(精品)动物细胞工程第二章 (2).ppt

第二章第二章动物细胞的大规模离体培养技术动物细胞的大规模离体培养技术引引言言动物细胞培养方法、工艺及控制动物细胞培养方法、工艺及控制动物细胞大规模培养反应器及改进动物细胞大规模培养反应器及改进动物细胞的高密度培养动物细胞的高密度培养第一节第一节引言引言v基本概念基本概念v发展简史发展简史v微生物与动物细胞的差异微生物与动物细胞的差异v动物细胞大规模培养的应用动物细胞大规模培养的应用第一节第一节引言引言动物细胞大规模培养技术动物细胞大规模培养技术（large-scaleculturetechnology）人工条件下，动物细胞在反应器中进行大量地、人工条件下，动物细胞在反应器中进行大量地、高密度培养，以生产珍贵生物制品的技术。高密度培养，以生产珍贵生物制品的技术。pHpH温度温度溶氧溶氧发酵工发酵工艺等条艺等条件件一一发发展展简简史史1907Harrison创立创立了体外组织培养技术；了体外组织培养技术；1951Earle开发动物细胞体外培养开发动物细胞体外培养合成培养基合成培养基；1957Graff应用应用灌注技术灌注技术，培养密度达，培养密度达1010个个/L；1962Capstick成功实现小鼠成功实现小鼠肾细胞的大规模肾细胞的大规模培养，培养，标志着动物细胞大规模培养技术的开始；标志着动物细胞大规模培养技术的开始；1967VanWezel成功地以成功地以DEAE-SephadexA50为为载载体体，实现动物细胞的载体培养；，实现动物细胞的载体培养；1975Kohler和和Milstein成功建立成功建立单克隆抗体技术单克隆抗体技术；1975Sato用激素代替血清使垂体细胞株在无血清介质用激素代替血清使垂体细胞株在无血清介质中生长成功，预示中生长成功，预示无血清培养无血清培养的诱人前景；的诱人前景；1986DemeBiotech公司首次成功地用公司首次成功地用微囊化技术微囊化技术大规大规模培养杂交瘤细胞来生产单克隆抗体；模培养杂交瘤细胞来生产单克隆抗体；1989Konstantinovti首次提出大规模细胞培养过程中首次提出大规模细胞培养过程中的生理状态控制技术，更新培养工艺的的生理状态控制技术，更新培养工艺的优化控制理论优化控制理论。一一发发展展简简史史二、二、微生物与微生物与动物细胞动物细胞差异差异细胞壁细胞壁生长生长速率速率0.1-0.5h-10.01-0.05h-1需氧量需氧量CO2需求需求营养要求营养要求环境影响环境影响生长浓度生长浓度1091010/ml106/ml大小大小1002000nm10100um三三动物动物细胞细胞培养培养技术技术应用应用q疫苗生产上的应用疫苗生产上的应用疫苗生产上的应用疫苗生产上的应用 v已实现商业化生产的产品有口蹄疫苗、狂犬病毒疫苗、已实现商业化生产的产品有口蹄疫苗、狂犬病毒疫苗、骨髓灰质炎病毒疫苗、牛白血病疫苗骨髓灰质炎病毒疫苗、牛白血病疫苗q干扰素生产上的应用干扰素生产上的应用干扰素生产上的应用干扰素生产上的应用 v自自1957年发现干扰素以来，经历了自然干扰素、基因重年发现干扰素以来，经历了自然干扰素、基因重组干扰素和蛋白质工程干扰素等组干扰素和蛋白质工程干扰素等3个发展阶段。个发展阶段。v英国英国Wellcome公司为了满足临床实验的需要，采用公司为了满足临床实验的需要，采用8000LNamalwa细胞生产细胞生产干扰素。干扰素。DMEM培养基培养基胎牛血清胎牛血清其他成分其他成分锥形瓶逐级锥形瓶逐级放大培养放大培养加碱（碳酸加碱（碳酸氢钠）氢钠）加糖（葡萄加糖（葡萄糖）糖）灌注培养液灌注培养液微载体微载体5L种子罐培种子罐培养养培养液培养液50L生生物物反反应应器器接种狂犬接种狂犬病毒病毒出液口出液口收获病毒收获病毒Vero细胞和狂犬病毒的培养工艺细胞和狂犬病毒的培养工艺q单克隆抗体生产上的应用单克隆抗体生产上的应用单克隆抗体生产上的应用单克隆抗体生产上的应用 v应用动植物细胞生产单克隆抗体是一条经济、可靠的途径。应用动植物细胞生产单克隆抗体是一条经济、可靠的途径。v英国英国Celltech公司采用无血清培养液在公司采用无血清培养液在10000L气升式生物反应气升式生物反应器中培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体；器中培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体；v国内国内也已成功地应用中空纤维培养系统和微载体培养动物细胞也已成功地应用中空纤维培养系统和微载体培养动物细胞生产单克隆抗体作为血型定型试剂。生产单克隆抗体作为血型定型试剂。q其他基因重组产品生产上的应用其他基因重组产品生产上的应用其他基因重组产品生产上的应用其他基因重组产品生产上的应用 v细胞能精确地转录、翻译和加工较大或更复杂的克隆蛋白质；细胞能精确地转录、翻译和加工较大或更复杂的克隆蛋白质；v可以简化蛋白质的分离提纯；可以简化蛋白质的分离提纯；v美国美国Endotronic公司用中空纤维生物反应器大规模培养动物细公司用中空纤维生物反应器大规模培养动物细胞生产出免疫球蛋白胞生产出免疫球蛋白G、A和和M，尿激酶，人生长激素等。尿激酶，人生长激素等。第二节第二节动物细胞培养方法、工艺动物细胞培养方法、工艺及其控制及其控制环境系统环境系统培养系统培养系统反应器反应器提取系统提取系统温度温度v细胞体外生存的基本条件之一；细胞体外生存的基本条件之一；v不同源细胞，最适生长温度不尽相同，昆虫细胞不同源细胞，最适生长温度不尽相同，昆虫细胞25-28，哺乳动物细胞哺乳动物细胞37；v低温耐受力强于高温；低温耐受力强于高温；v动物细胞培养的温度允许波动的范围在动物细胞培养的温度允许波动的范围在0.25。1、动物细胞、动物细胞培养的环境培养的环境一一动物细胞动物细胞培养条件培养条件pHv合适的合适的pH是细胞生存的必要条件之一。是细胞生存的必要条件之一。v开始培养时培养液的理想开始培养时培养液的理想pH为为7.4，随着培养的进行，随着培养的进行，pH会因细胞会因细胞代谢所释放的代谢所释放的CO2而下降，但必须控制在而下降，但必须控制在7.0以上。以上。v大规模培养时，影响培养液的大规模培养时，影响培养液的pH稳定性的主要因素有三种：稳定性的主要因素有三种：缓缓冲液的缓冲能力及种类；对流空间大小；葡萄糖浓度。冲液的缓冲能力及种类；对流空间大小；葡萄糖浓度。v磷酸对动物细胞有毒害作用，常用的缓冲系统是磷酸对动物细胞有毒害作用，常用的缓冲系统是NaHCO3/CO2。v调节培养液调节培养液pH的方法：的方法：oA、添加添加NaHCO3缓冲剂及通入含缓冲剂及通入含CO2的空气进行调节；的空气进行调节；oB、用用0.1mol/LNaOH或或0.1mol/LHCl进行调节。进行调节。利用酸碱直接调节会发生局部过酸或过碱的现象，从而对利用酸碱直接调节会发生局部过酸或过碱的现象，从而对细胞产生毒害作用。细胞产生毒害作用。2、营养成分、营养成分细胞的生长、繁殖以及产物的合成都必须从环境中摄取各种细胞的生长、繁殖以及产物的合成都必须从环境中摄取各种营养物质以合成细胞物质及在新陈代谢中起调节作用。营养物质以合成细胞物质及在新陈代谢中起调节作用。这些营养物质包括碳源、氮源、氨基酸、无机盐、微量元素、这些营养物质包括碳源、氮源、氨基酸、无机盐、微量元素、生长因子，等。生长因子，等。3、溶解氧、溶解氧氧气是细胞代谢所必需的。氧气是细胞代谢所必需的。一般在培养初期要求较低的溶氧水平，而在对数生长期或培一般在培养初期要求较低的溶氧水平，而在对数生长期或培养后期，当细胞增多时溶氧的水平代谢将受到阻碍；养后期，当细胞增多时溶氧的水平代谢将受到阻碍；而溶氧浓度过高又对细胞产生毒害作用，使细胞的代谢受到而溶氧浓度过高又对细胞产生毒害作用，使细胞的代谢受到抑制。抑制。影响溶解氧的因素：影响溶解氧的因素：通风与搅拌通风与搅拌通风与搅拌通风与搅拌 罐压罐压罐压罐压 培养液的理化性质培养液的理化性质培养液的理化性质培养液的理化性质 反应器的结构及空气分布器反应器的结构及空气分布器反应器的结构及空气分布器反应器的结构及空气分布器 传递推动力传递推动力传递推动力传递推动力 4、渗透压等其他因素、渗透压等其他因素渗透压、血清、剪切力等动物细胞有很大的影响。渗透压、血清、剪切力等动物细胞有很大的影响。二二动物细胞动物细胞大规模大规模培养用培养用培养基培养基天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基天然天然培养基培养基天然培养基是使用最早、最为有效的动物细胞天然培养基是使用最早、最为有效的动物细胞培养基，它主要取自动物体液或从动物组织分离培养基，它主要取自动物体液或从动物组织分离提取而得；提取而得；类型类型血清血清优质的血清外观应为透明、无溶血、淡黄色、无沉淀物。优质的血清外观应为透明、无溶血、淡黄色、无沉淀物。血浆血浆容易发生液化，目前已很少单独使用，一般是禽类血浆。容易发生液化，目前已很少单独使用，一般是禽类血浆。组织浸出液组织浸出液常用的是胚胎浸出液（如鸡胚浸出液），有促进细胞生长的作用。常用的是胚胎浸出液（如鸡胚浸出液），有促进细胞生长的作用。水解乳蛋白水解乳蛋白由乳白蛋白经水解而制得，氨基酸的含量较高。由乳白蛋白经水解而制得，氨基酸的含量较高。优点是营养成分丰富、培养效果良好；优点是营养成分丰富、培养效果良好；缺点是成分复杂、个体差异大、来源有限。缺点是成分复杂、个体差异大、来源有限。合成合成培养基培养基既能提供一个近拟于体内的生存环境，又便于控制和既能提供一个近拟于体内的生存环境，又便于控制和提供标准化体外生存环境。提供标准化体外生存环境。合成培养基种类很多，但一般都含有氨基酸、维生素、合成培养基种类很多，但一般都含有氨基酸、维生素、糖类、无机离子和一些辅助性成分。糖类、无机离子和一些辅助性成分。根据天然培养基的成分，用化学物质对细胞体生存环根据天然培养基的成分，用化学物质对细胞体生存环境中各种已知物质在体外人工条件的模拟，经过反复实境中各种已知物质在体外人工条件的模拟，经过反复实验筛选、强化和重新组合后形成的培养基。验筛选、强化和重新组合后形成的培养基。主要营养成份主要营养成份氨基酸氨基酸合成培养基的主要成分，以必需氨基酸为主，一般细胞仅能利用氨合成培养基的主要成分，以必需氨基酸为主，一般细胞仅能利用氨基酸的基酸的L型同分异构体。几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的型同分异构体。几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质。要求，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质。维生素维生素维持细胞生长的一种生物活性物质，它们在细胞中大多形成酶的辅维持细胞生长的一种生物活性物质，它们在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞的代谢有重大的影响。基或辅酶，对细胞的代谢有重大的影响。糖类糖类主要是葡萄糖，通过糖酵解形成丙酮酸，并可转化乳酸或乙酰乙酸主要是葡萄糖，通过糖酵解形成丙酮酸，并可转化乳酸或乙酰乙酸进入柠檬酸循环形成进入柠檬酸循环形成CO2。对胚胎细胞和转化细胞，乳酪在培养基对胚胎细胞和转化细胞，乳酪在培养基中的积累特别明显。中的积累特别明显。无机离子无机离子其他成分其他成分v代谢的中间产物代谢的中间产物v氧化还原剂氧化还原剂v三磷酸腺苷三磷酸腺苷v辅酶辅酶A等成分。等成分。细胞的重要组成部分之细胞的重要组成部分之一，参与细胞的代谢活一，参与细胞的代谢活动。培养基中无机离子动。培养基中无机离子除除K、Na等外，还等外，还含有含有Fe2+、Zn2、Cu2等微量离子。等微量离子。常用的合成培养基常用的合成培养基v较为常用的有较为常用的有199培养液、培养液、Eagle（MEM、DMEM）、）、RPM1640、HAM培养液等。培养液等。v随着细胞培养技术的发展和应用范围的扩大，对各种培养的要求也随着细胞培养技术的发展和应用范围的扩大，对各种培养的要求也越来越严格，多数人工合成的培养基都要加入不同浓度的血清才能培越来越严格，多数人工合成的培养基都要加入不同浓度的血清才能培养细胞。养细胞。无血清培养基无血清培养基v血清的成分非常复杂，对一些要求较高的基础性研究的结果影响血清的成分非常复杂，对一些要求较高的基础性研究的结果影响较大；较大；v血清中也含有一定的毒性物质和抑制物质，对细胞有去分化作用，血清中也含有一定的毒性物质和抑制物质，对细胞有去分化作用，影响某些细胞功能的表达；影响某些细胞功能的表达；v无血清培养基一般由基础培养基和替代血清的补充因子组成。无血清培养基一般由基础培养基和替代血清的补充因子组成。三三动物细胞动物细胞发酵工艺发酵工艺分批式分批式流加式流加式半连续式半连续式连续式连续式灌注式灌注式细胞接种后进行培养，一方面新鲜培养基不断地加入反应器内，另细胞接种后进行培养，一方面新鲜培养基不断地加入反应器内，另一方面又将培养液连续不断地取出，但细胞留在反应器内，使细胞一方面又将培养液连续不断地取出，但细胞留在反应器内，使细胞处于不断的营养状态中。处于不断的营养状态中。不同培养工艺对不同培养工艺对tPA（人组织型纤维蛋白溶酶原人组织型纤维蛋白溶酶原激活剂）的产量和活性的影响激活剂）的产量和活性的影响培养工艺培养工艺分批培养分批培养半连续式培养半连续式培养灌注培养灌注培养纯化利率纯化利率%82165纯化物质的相对产量纯化物质的相对产量11.337.74比活性（比活性（IU/mgtPA）114.4391.3392.6第三节第三节动物细胞大规模培养动物细胞大规模培养反应器及改进反应器及改进一一动物细胞动物细胞大规模大规模培养用培养用生物反应器生物反应器满足：低剪切力、良好的混合状态、合满足：低剪切力、良好的混合状态、合适氧浓度、等。适氧浓度、等。20世纪世纪70年代以来，动物细胞大规模培年代以来，动物细胞大规模培养用生物反应器有了很大的发展，种类越养用生物反应器有了很大的发展，种类越来越多，规模越来越大。来越多，规模越来越大。动物细胞培养用生物反应器类型动物细胞培养用生物反应器类型悬浮培养反应器悬浮培养反应器贴壁培养反应器贴壁培养反应器包埋培养反应器包埋培养反应器搅拌反应器搅拌反应器搅搅拌拌反反应应器器（微微载载体体培养）培养）流化床反应器流化床反应器气升式反应器气升式反应器玻璃珠床反应器玻璃珠床反应器固定床反应器固定床反应器中空纤维反应器中空纤维反应器中空纤维反应器中空纤维反应器陶陶质质矩矩形形通通道道蜂蜂窝窝状状反应器反应器陶陶质质矩矩形形通通道道蜂蜂窝窝状状反应器反应器动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器v1、搅拌罐式生物反应器、搅拌罐式生物反应器与传统的微生物反应器相类似，只是根据动物细胞培养的与传统的微生物反应器相类似，只是根据动物细胞培养的特性，作适当的调整。特性，作适当的调整。要求搅拌器转动时产生的剪切力小，混合性能好，要求搅拌器转动时产生的剪切力小，混合性能好，同时通气培养过程中尽量减小操作对细胞的损伤程度而又同时通气培养过程中尽量减小操作对细胞的损伤程度而又能达到充足供氧的目的。能达到充足供氧的目的。v2、气升式生物反应器、气升式生物反应器自自1979年年Katinger等首次用气升式生物反应器成功地进行了等首次用气升式生物反应器成功地进行了动物细胞的悬浮培养以来，气升式生物反应器在动物细胞大规动物细胞的悬浮培养以来，气升式生物反应器在动物细胞大规模培养中的应用一直是生物工程学家关注和热衷的焦点。模培养中的应用一直是生物工程学家关注和热衷的焦点。v3、中空纤维生物反应器、中空纤维生物反应器中空纤维生物反应器是个特制的圆筒，圆筒里面封装着数千根中空纤维生物反应器是个特制的圆筒，圆筒里面封装着数千根中空纤维。中空纤维。纤维是一种细微的管状结构，类似于动物组织内的毛细血管，纤维是一种细微的管状结构，类似于动物组织内的毛细血管，中空纤维的外径一般为中空纤维的外径一般为100500um，管壁厚度约管壁厚度约5075um，管管壁是极薄的半透膜，似海绵，富含毛细管。壁是极薄的半透膜，似海绵，富含毛细管。在中空纤维生物反应器中就形成了两个空间：在中空纤维生物反应器中就形成了两个空间：一是一是“内室内室”，即纤维管内空间，可灌流无血清培养液供，即纤维管内空间，可灌流无血清培养液供细胞生长；细胞生长；二是二是“外室外室”，即纤维管与管之间的间隙；，即纤维管与管之间的间隙；细胞接种到外室，细胞贴附在外室的管壁上，并迅速吸取细胞接种到外室，细胞贴附在外室的管壁上，并迅速吸取从内室渗透出来的养分，迅速生长繁殖。从内室渗透出来的养分，迅速生长繁殖。中空纤维反应器具有无剪切力和高传质等优点。中空纤维反应器具有无剪切力和高传质等优点。中空纤维生物反应器的总体发展趋势是中空纤维生物反应器的总体发展趋势是让细胞在管束外空让细胞在管束外空间生长，以达到更高的培养细胞密度。间生长，以达到更高的培养细胞密度。中空纤维材质可以是纤维素、改性纤维素、醋酸纤维、聚丙烯、中空纤维材质可以是纤维素、改性纤维素、醋酸纤维、聚丙烯、聚砜、铜氨人造纤维、聚甲基丙烯酸甲酯及其他聚合物。聚砜、铜氨人造纤维、聚甲基丙烯酸甲酯及其他聚合物。大规模大规模HEK293细胞发酵培养细胞发酵培养重组腺病毒的纯化重组腺病毒的纯化实时实时HPLC质量监测技术质量监测技术二二标准罐式搅拌反应器的改进标准罐式搅拌反应器的改进细胞培养的细胞培养的搅拌搅拌动物细胞微载动物细胞微载体培养技术体培养技术1、细胞培养的搅拌、细胞培养的搅拌普通叶轮水平剪切力很高，对动物细胞损害较大。普通叶轮水平剪切力很高，对动物细胞损害较大。海轮或倾斜叶片海轮或倾斜叶片产生的混合剪切力，能产生水平和垂直混合产生的混合剪切力，能产生水平和垂直混合速度，对动物细胞的损害比较小。速度，对动物细胞的损害比较小。一般培养过程搅拌转速控制在一般培养过程搅拌转速控制在4050rpm。2、动物细胞微载体培养技术、动物细胞微载体培养技术v直径在直径在60-250um微粒，适用于贴壁细胞生长的微珠。微粒，适用于贴壁细胞生长的微珠。v微载体培养具有以下优点：微载体培养具有以下优点：表面积表面积/体积大，单位体积培养液的细胞产率高；体积大，单位体积培养液的细胞产率高；兼有悬浮培养和贴壁培养两种培养方式的优点；兼有悬浮培养和贴壁培养两种培养方式的优点；可用简单的显微镜观察细胞在微珠表面上生长情况；可用简单的显微镜观察细胞在微珠表面上生长情况；培养基利用率高，劳动强度小；培养基利用率高，劳动强度小；细胞的收获过程简单。细胞的收获过程简单。v1）动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制）动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制增殖经历：增殖经历：黏附黏附、贴壁贴壁、生长生长和和扩展成单层。扩展成单层。作用力：作用力：静电引力静电引力和和范德华力范德华力。表面黏附取决于：细胞与微载体的表面黏附取决于：细胞与微载体的接触几率接触几率、相融性相融性。细胞与微载体的相融性与载体表面的物理化学性质有关。细胞与微载体的相融性与载体表面的物理化学性质有关。v2）微载体的主要特性）微载体的主要特性微载体的大小微载体的大小微载体的颗粒直径应尽可能小，但微载体颗粒太小时，接种密度微载体的颗粒直径应尽可能小，但微载体颗粒太小时，接种密度较高，就会对高密度细胞培养不利。较高，就会对高密度细胞培养不利。通常微载体颗粒直径控制在通常微载体颗粒直径控制在100200um之间。之间。微载体的密度微载体的密度搅拌转速搅拌转速4050rpm时，一般在时，一般在1.031.05g/cm3。微载体的表面电荷微载体的表面电荷电荷的性质电荷的性质并不是控制细胞黏附和贴壁的决定因素，并不是控制细胞黏附和贴壁的决定因素，电荷密电荷密度度才是关键问题，电荷密度太低，细胞贴附不充分；如果电荷密才是关键问题，电荷密度太低，细胞贴附不充分；如果电荷密度太高，将会出现度太高，将会出现“毒性毒性”作用而限制细胞的生长。作用而限制细胞的生长。v3）微载体的种类）微载体的种类以交联葡聚糖为基质的微载体以交联葡聚糖为基质的微载体最广泛的一类微载体。主要有最广泛的一类微载体。主要有DEAE交联葡聚糖、交联葡聚糖、Cytodex2微微载体、载体、Dormacell微载体、微载体、Cytodex3微载体（迄今公认的最优秀微载体（迄今公认的最优秀的一种微载体）。的一种微载体）。以塑料为基质的微载体以塑料为基质的微载体主要有聚苯乙烯微载体、聚丙烯酰胺微载体等。主要有聚苯乙烯微载体、聚丙烯酰胺微载体等。明胶明胶/变性胶原微载体变性胶原微载体以玻璃为基质的微载体以玻璃为基质的微载体以纤维素为基质的微载体以纤维素为基质的微载体液膜微载体液膜微载体大孔微载体大孔微载体第四节第四节动物细胞的高密度培养动物细胞的高密度培养一一控制方法控制方法1、通气、通气v传统的细胞供氧方法会使一些动物细胞破坏，为传统的细胞供氧方法会使一些动物细胞破坏，为了避免，通常采用了避免，通常采用顶部和表面通风顶部和表面通风，但通常会引起，但通常会引起氧气的供应不足。氧气的供应不足。v表面积大表面积大的容器更有利于氧气的传递。的容器更有利于氧气的传递。v工业上通常的做法是工业上通常的做法是采用纯氧来代替空气采用纯氧来代替空气，需，需要连接一个氧气放大器来进行控制。要连接一个氧气放大器来进行控制。2、pH值值v常用的控制方法常用的控制方法空气和二氧化碳分别由两根带阀的螺旋管喷射进入空气和二氧化碳分别由两根带阀的螺旋管喷射进入培养基，通过调节阀门来控制培养基，通过调节阀门来控制pHpH；用二次流量控制器将二氧化碳与空气相混合，然后用二次流量控制器将二氧化碳与空气相混合，然后再一起进入培养基，混入空气的二氧化碳总量由此来再一起进入培养基，混入空气的二氧化碳总量由此来决定，从而使决定，从而使pHpH改变不明显；改变不明显；通过增加空气和减少二氧化碳的量可以降低培养基通过增加空气和减少二氧化碳的量可以降低培养基的的pHpH。动物细胞培养的低搅拌速率和低混合度，易导致局部酸性或碱动物细胞培养的低搅拌速率和低混合度，易导致局部酸性或碱性过高的现象，可采用在液面以下滴加酸碱的方法解决。性过高的现象，可采用在液面以下滴加酸碱的方法解决。3、温度控制、温度控制v最有效的温控方法是通过在带夹套的容器中通入一定温度的最有效的温控方法是通过在带夹套的容器中通入一定温度的水，水在一个装有泵体的水槽中被加热到比所需温度稍高的水水，水在一个装有泵体的水槽中被加热到比所需温度稍高的水平后再通入容器的夹套进行循环流动。平后再通入容器的夹套进行循环流动。4、反应器的设计、反应器的设计v形状一般是圆底直壁或圆底长颈的，不容易产生局部停滞现形状一般是圆底直壁或圆底长颈的，不容易产生局部停滞现象，且有利于气体的传递和表面通气的控制。象，且有利于气体的传递和表面通气的控制。二二培养方法培养方法1、灌注培养、灌注培养2、胶囊密封、胶囊密封两种形式两种形式用薄膜把细胞包成一种微用薄膜把细胞包成一种微型胶囊，营养和水能自由型胶囊，营养和水能自由通过，而细胞和大分子分通过，而细胞和大分子分泌产品留在薄膜里面。泌产品留在薄膜里面。动物细胞用褐藻酸盐、琼脂动物细胞用褐藻酸盐、琼脂糖或纤维基质固定，细胞的糖或纤维基质固定，细胞的生长在基质中自由生长，产生长在基质中自由生长，产品分泌到培养基中。品分泌到培养基中。3、薄膜反应器、薄膜反应器最流行的薄膜系统是最流行的薄膜系统是空心纤维反应器空心纤维反应器，是把空心的纤维管捆，是把空心的纤维管捆在一起装进反应器里，培养基在管里，而细胞则在管外。在一起装进反应器里，培养基在管里，而细胞则在管外。三三细胞的保藏细胞的保藏和种子复壮和种子复壮请随时提出你的宝贵意见请随时提出你的宝贵意见 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