核算中质量与浓度的换算19347.pdf
核算中质量与浓度的换算 光度计测量的转换:双链 DNA(ds DNA)：A260=OD260=1 相当于 50 g/ml 溶液 单链 DNA(ss DNA)：A260=OD260=1 相当于 33 g/ml 溶液 RNA：A260=OD260=1 相当于 40 g/ml 溶液 参 考 文 献：Freifelder,D.,Physical Biochemistry:Applications to Biochemistry&Molecular Biology,.Freeman and Company,CA,1982,p.494-536.核酸分子量计算方程式：吸光度(A)摩尔消光系数浓度长度 500 bp 的双链 DNA325,000 Daltons 500 nt*的单链 DNA162,500 Daltons*nt=nucleotide dNMP 的平均分子量325 Daltons（总的也就是腺苷三磷酸 dNMP，d 是脱氧的意思,N 是核 苷 总 称(包 括ATCG)，M代 表1，P磷 酸 基 团 合 起 来 就 是 脱 氧 核 苷 酸 2-deoxynucleoside-5-monophosphate）寡聚体定量：寡聚体-寡聚体，是一种由数量较少的单体以共价键重复的连接而成的短多聚体，常是指氨基酸、糖、核苷酸的短多聚体。其单体的数目一般在 20 以下，常为 210个 monomerie unit(mer)：单体单元，相当于 nt 或者 BP 都可以。通常用于双链核酸中的单位，100 mer DNA 相当于每一条链有 100nt，那么整条链就是 100bp 20-mer，A260=1 的贮存液含有 5 nmol 寡聚体：5 nmol=33 g/(20325)40-mer，A260=1 的贮存液含有 5 nmol 寡聚体：nmol=33 g/(40325)pmol 为单位的引物转换为 g 为单位的引物：（X pmoles长度 bp325）/1,000,000 例：10pmoles 的 25-mer，则为（10pmol25bp325）/1,000,000=g primer g 为单位的引物转换为 pmol 为单位的引物：（X pmoles1,000,000）/（长度 bp 325）例：g 的 20-mer，则为（g1,000,000）/（20bp325）=pmoles primer pcr 扩增反应引物浓度的计算：引物毫摩尔浓度（mM）=pmoles/l 例 1：100 l PCR 反应体系中有 20pmol 的引物=mM 例 2：引物为 24bp，并溶解于 l H2O 中；10 l 溶液稀释至测定其 A260 为：A260=OD260=；则贮存液在 260nm（A260）的吸光度为 76；的贮存液含有个单位的 A260；引物碱基组成为：A=6,C=6,G=6,T=6；260nm 引物的摩尔消光系数=a(16,000)+b(12,000)+c(7,000)+d(9,600)注：a、b、c、d 分别是 As、Gs、Cs、Ts 的碱基个数；PCR 引物的摩尔消光系数=6(16,000)+6(12,000)+6(7,000)+6(9,600)=267,600 则 PCR 引物贮存液的摩尔浓度为：76/267,600=284 mM 核酸数据(Nucleic Acid Data)Kd 是 kilodaltons 的缩写，既千道尔顿。是氨基酸的分子量单位。Kbs 是千碱基对的意思，是核酸的单位名称。1 个脱氧核糖核酸碱基的平均分子量为 333 Daltons（道尔顿）1 个核糖核酸碱基的平均分子量为 340 Daltons（道尔顿）DNA 与表达蛋白之间分子量换算：1 kb DNA=333 amino acid 104 Da（道尔顿）10,000 Da Protein 270 bp DNA 30,000 Da Protein 810 bp DNA 50,000 Da Protein 1350 bp DNA 100,000 Da Protein 27 kb DNA 一个 DNA 碱基对（钠盐）的平均分子量=650 道尔顿 A260 unit ds DNA=50 g/ml=mM(in nucleotides)A260 unit ss DNA=33 g/ml=mM(in nucleotides)A260 unit ss RNA=40 g/ml=mM(in nucleotides)双链 DNA 分子的分子量(道尔顿)=碱基对数目650 双链 DNA 分子的末端摩尔数=2 DNA 质量（克）/DNA 分子量（道尔顿）限制性内切酶酶切后的 DNA 末端摩尔数:a)环状 DNA 分子:2 DNA 摩尔数 位点数 b)线性 DNA 分子:2 DNA 摩尔数位点数+2 DNA 摩尔数 1 g 1000 bp DNA=pmol=1011 molecules 1 g pUC18/19 DNA(2686 bp)=pmol=1011 molecules 1 g pBR322 DNA(4361 bp)=pmol=1011 molecules 1 g M13mp18/19 DNA(7249 bp)=pmol=1011 molecules 1 g DNA(48502 bp)=pmol=1010 molecules 1 pmol 1000 bp DNA=g 1 pmol pUC18/19 DNA(2686 bp)=g 1 pmol pBR322 DNA(4361 bp)=g 1 pmol M13mp18/19 DNA(7249 bp)=g 1 pmol DNA(48502 bp)=g
