实验三 透析实验(一)——蛋白质的透析.ppt

实验三 透析实验（一）蛋白质的透析实验目的掌握透析的基本原理和操作；了解透析袋的使用方法。实验原理透析是利用小分子能通过而大分子不能通过半透膜的原理把它们分开的一种重要手段，是生物化学分离提纯过程经常使用的基本操作技术之一。蛋白质作为生物分子物质，不能透过透析膜而小分子物质（比如离子等）可以自由通过。器具与试剂烧杯；玻棒；试管；试管架；透析袋（宽26cm，长8-10cm），线。0.5mol/L EDTA；2%NaHCO3；1AgNO3溶液；10%HNO3，10%NaOH；1%CuSO4；鸡蛋清-NaCl溶液实验步骤透析袋的前处理。将蛋白质溶液做双缩脲反应。取出透析袋，用三级水清洗透析袋内外，并检查透析袋是否有损坏。用线将透析袋靠近末端的地方绑紧。取8ml蛋白质溶液放入透析袋中，并将开口端同样用线绑住并放入盛有蒸馏水的烧杯中。随时用玻棒搅拌液体。每30min从烧杯中取水1ml，用10%HNO3酸化溶液，再加入1%AgNO3 1-2d,检查氯离子的存在。另外取出1-2ml做双缩脲反应，检查烧杯中是否有蛋白质存在。每0.5h更换一次烧杯中的三级水以加速透析过程。直到数小时后，烧杯中的水不能检出氯离子的存在时，停止透析。并观察和检测透析袋内容物是否有蛋白质或者氯离子存在。附：透析袋的处理方法 用2%NaHCO3和10mM的EDTA煮沸10min后，用蒸馏水清洗透析袋内外，重新置于1mM的EDTA溶液中煮沸10min，保存于4冰箱中。思考：透析是去除小分子物质，那还有哪些去除小分子物质的方法？影响透析的因素有哪些？