2022年医学专题—细菌的分布与分离接种.ppt

医学医学(yxu)微生物学实验微生物学实验微生物学(wi shn w xu)教研室 2011年4月第一页，共二十九页。实验(shyn)内容一、细菌分布实验一、细菌分布实验(shyn)(shyn)空气中细菌的检查（操作）空气中细菌的检查（操作）皮肤、日常物品细菌的检查（操作）皮肤、日常物品细菌的检查（操作）二、细菌分离接种技术（操作）二、细菌分离接种技术（操作）平板划线接种法；斜面培养基接种法平板划线接种法；斜面培养基接种法 液体培养基接种法；半固体穿刺接种法液体培养基接种法；半固体穿刺接种法三、细菌在培养基上生长现象（示教）三、细菌在培养基上生长现象（示教）第二页，共二十九页。目的(md)要求l认识细菌在外界的分布规律l掌握(zhngw)细菌分离培养基本技术l认识细菌在不同培养基中的生长现象第三页，共二十九页。一、细菌的分布一、细菌的分布(fnb)实验实验l（1）空气细菌检查）空气细菌检查 材料：培养基，普通琼脂平皿l（2）皮肤（其他物品）皮肤（其他物品(wpn)）消毒前后的细菌检）消毒前后的细菌检查查 材料：培养基，无菌生理盐水，75%酒精棉球，2.5%碘酒棉球，无菌棉棒l（3）自来水中的细菌检查）自来水中的细菌检查 材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯第四页，共二十九页。1.1.空气中细菌空气中细菌(xjn)(xjn)的检查的检查(操作操作,4,4块块/室室)取三块琼脂取三块琼脂(qingzh)(qingzh)平板，将平板，将2 2个打开皿盖个打开皿盖分别置于不同的环境分别置于不同的环境1530min1530min后，后，盖好皿盖。另外盖好皿盖。另外1 1个不启盖作为对个不启盖作为对照。置照。置3737培养培养1824h1824h。材料材料(cilio)(cilio)：普通琼脂平板普通琼脂平板方法：方法：结果：结果：计数菌落数，观察菌落数的差异。计数菌落数，观察菌落数的差异。第五页，共二十九页。2 2、皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查、皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查(jinch)(jinch)方法方法l在在1个平皿底部做好标记，分为个平皿底部做好标记，分为消毒前消毒前与与消毒后消毒后两个区域。两个区域。l取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，在管壁上挤干水在管壁上挤干水后擦拭皮肤后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，作来回作来回划线，注意勿划破琼脂表面。划线，注意勿划破琼脂表面。l将将皮肤区域或物品皮肤区域或物品用碘酒用碘酒(din ji)棉球及酒精棉球涂擦消毒，另棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。平皿区域。l平皿平皿37、24h培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。菌落数目，描述菌落特征。第六页，共二十九页。结果结果(ji gu)(ji gu)：计数计数(j sh)(j sh)菌落菌落数数371824h消毒(xio d)前消毒后第七页，共二十九页。自来水中的细菌(xjn)检查l在在1个平皿底部做好标记。个平皿底部做好标记。l用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水15S。l取一支无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒前取一支无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒前的无菌琼脂平皿表面，的无菌琼脂平皿表面，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。作来回划线，注意勿划破琼脂表面。l将平皿于将平皿于37、24h培养后取出观察平皿表面有无细菌生长培养后取出观察平皿表面有无细菌生长(shngzhng)，描述菌落特征。，描述菌落特征。第八页，共二十九页。1.半固體培養基接種法（操作半固體培養基接種法（操作(cozu)）2.斜面培養基接種法斜面培養基接種法3.液體培養基接種法液體培養基接種法 細菌的接種法細菌的接種法（一）分離培養（一）分離培養1.平板平板(pngbn)分離劃線接種法（操作）分離劃線接種法（操作）（二）純培養（二）純培養第九页，共二十九页。接种接种(jizhng)环（上）和接种环（上）和接种(jizhng)针（下）针（下）柄约22cm25mm绝缘柄约7.5cm金属柄约14.5cm58cm安装环(针)的螺口(约8mm)无菌操作无菌操作(cozu)第十页，共二十九页。无菌操作无菌操作(cozu)Aseptic area10-20cm外焰外焰(w(w i i yy n)n)焰芯焰芯内焰内焰(n(n i i yy n)n)第十一页，共二十九页。菌液采取(ciq)法第十二页，共二十九页。（一）平板划线（一）平板划线(hu xin)接种法（分离培养接种法（分离培养法）法）连续划线(hu xin)法 分段划线(hu xin)法 第十三页，共二十九页。IVIII1/5 I1/10 Rotate 90Flame loopRotate 90Rotate 90III1/4 Flame loop（一）平板划线接种（一）平板划线接种(jizhng)法（分离培养法）法（分离培养法）第十四页，共二十九页。培养培养(piyng)结果结果132注意事项：注意事项：1.1.区之间接种区之间接种(jizhng)(jizhng)要灭菌要灭菌2.2.用力适当用力适当(shdng)(shdng)，不要划破，不要划破 琼脂表面琼脂表面3.3.注意无菌操作注意无菌操作第十五页，共二十九页。（二）液体（二）液体(yt)培养基接种法培养基接种法第十六页，共二十九页。（二）液体（二）液体(yt)培养基接种法培养基接种法第十七页，共二十九页。（三）半固体穿刺（三）半固体穿刺(chunc)接种法接种法l用途：观察细菌(xjn)动力，保存菌种。第十八页，共二十九页。斜面培养基接种斜面培养基接种(jizhng)法法（操作）（操作）l用途：常用(chn yn)于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。第十九页，共二十九页。斜面斜面(ximin)培养基接种法培养基接种法第二十页，共二十九页。液体液体(yt)培养基接种法培养基接种法第二十一页，共二十九页。半固体培养基接种半固体培养基接种(jizhng)法（操作）法（操作）方法方法(fngf)：穿刺接种：穿刺接种结果结果(ji gu)：沿穿刺线生长：沿穿刺线生长动力动力-扩散生长扩散生长动力动力+第二十二页，共二十九页。三、细菌三、细菌(xjn)在培养基上生长现象（示教）在培养基上生长现象（示教）沉淀沉淀(chndin)成链生长成链生长浑浊浑浊均匀分散生长均匀分散生长菌膜菌膜表面生长（需氧菌）表面生长（需氧菌）1.固体固体(gt)2.半固体半固体3.液体液体菌落菌落 菌苔菌苔动力动力+动力动力-第二十三页，共二十九页。固体固体(gt)培养基生长现象培养基生长现象第二十四页，共二十九页。液体液体(yt)培养基中生长现象培养基中生长现象沉沉淀淀(c ch h n nd di i n n)生生长长混混浊浊(h h n nz zh hu u)生生长长表表面面生生长长第二十五页，共二十九页。半固体培养基中生长半固体培养基中生长(shngzhng)现象现象有鞭毛(binmo)动力+无鞭毛(binmo)动力沿刺线生长混浊生长第二十六页，共二十九页。培养基培养基生长现象生长现象用途用途 固体平板固体平板 固体斜面固体斜面液体液体半固体半固体细菌细菌(xjn)在培养基上生长现象在培养基上生长现象第二十七页，共二十九页。实验报告实验报告l记录细菌分布实验实验结果l记录细菌在各种培养基上的生长(shngzhng)现象第二十八页，共二十九页。内容(nirng)总结医学微生物学实验。（2）皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查。材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯。盖好皿盖。计数菌落数，观察菌落数的差异。在1个平皿底部做好标记，分为消毒前与消毒后两个区域。将皮肤区域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材(qci)，接种于标有消毒后的平皿区域。平皿37、24h培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。接种环（上）和接种针（下）第二十九页，共二十九页。