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药学论文-积雪草的化学成分与药理作用研究进展                     戴卫波，梅全喜，孔祥廉【关键词】  积雪草 化学成分 药理作用积雪草Centella asiatica (L. ) Urb又称崩大碗、落得打、连钱草、半边钱等，为伞形科积雪草属植物,广泛分布于长江流域以南各地, 是广东民间地区常用中草药，我国医学上用积雪草外用及内服治病已有两千多年历史。积雪草性寒、味苦、辛,具有清热利湿、活血止血、解毒消肿之成效。全草主含三萜类，多炔烯烃类，挥发油类等成分。临床多用于湿热黄疸、痈肿疮毒、跌打损伤、传染性肝炎、皮肤病、流行性脑脊髓膜炎等。总之，积雪草具有多种重要生物活性,是个值得开发利用的药用植物资源。本文对其化学成分和药理作用研究进展进行综述，为更好地研究和利用资源提供根底资料。1  化学成分1.1  三萜类积雪草全草主要含大量的三萜皂苷类成分，如：积雪草苷asiaticoside、羟基积雪草苷madecassoside、玻热模苷brahmoside、玻热米苷brahminoside、参枯尼苷 thankuniside 、异参枯尼苷 isothankunside 和斯理兰卡积雪草苷centelloside1，积雪草二糖苷(asiaticodiglycoside)2等，均为五环三萜皂苷， 最近报道发现新的三萜类成分， 积雪草皂苷B(centellasaponin B),积雪草皂苷C(centellasaponin C, ),积雪草皂苷D(centellasaponin D)。积雪草中还有多种游离的三萜酸:积雪草酸asiatic acid、羟基积雪草酸brahmic acid or madecassic acid、异参枯尼酸isothankunic acid和Ternomilic acid1，马达积雪草酸(madasiatic acid),centic acid，Centoic acid, cenellic acid,indocentic acid2 ，6-羟基积雪草酸(6-O-Hhydroxyasiatic acid)3等。1.2 多炔烯烃类积雪草中还含有多炔烯烃类成分, 如:C16H21O2，C19H27O4，C19H27O3，C15H20O22，C19H28O2，C17H24O3和11-oxoheneicosanyl-cyclohexane和dotriacont-8-en-1-oic acid,3-isoocladecanyl-4-hydroxy-a-pyrone4 ,3-o-a-L-arabinopyranosyl-2a，3a，6a，23a-tetrhydroxyurs-12-ene-28-oic acid2 等。1.3 挥发油类秦路平等5 应用GC-MS分析，从积雪草中鉴定了45 个长链的挥发油类成分。其中含量较高的有石竹烯(caryophyllene) ， 法尼烯(farnesol)， 榄香烯(elemene), 长叶烯(longifolene) 等。1.4 其他成分除上述化学成分外积雪草中还含有其他成分,Srivastava R6 在积雪草提取物中别离得到Stigmasterol,Stigmasterone 和Stigmasteroi-B-glucopyranoside。Holeman 等7 从积雪草中别离得到了倍半萜类成分。何明芳等8 在积雪草中别离得到了胡萝卜苷(daucosterol) 、香草酸(vanfllic acid) 。另外在积雪草中还发现含有内消旋肌醇、积雪草糖、胡萝卜烃类、叶绿素、山萘酚、-谷甾醇、谷氨酸、天冬氨酸、维生素B1 、生物碱以及鞣质等成分。2 药理作用2.1 抗抑郁的作用陈瑶等9给长期未预知应激刺激致大鼠抑郁模型灌胃给药，结果与正常大鼠比拟，抑郁症模型组动物血浆促肾上腺皮质激素ACTH、血清促甲状腺激素TSH、甲状腺素T4、和3，3，5-三碘甲状腺原氨酸(rT3)浓度显著降低，血清三碘甲状腺原氨酸T3浓度显著升高；积雪草总苷各剂量组血浆ACTH水平、血清TSH、T4和rT3水平不同程度增加，血清T3水平减少。结果说明积雪草总苷在对下丘脑-垂体-甲状腺轴HPTA，有促进垂体血清促TSH的合成与分泌，改善甲状腺功能的异常的作用；在对下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴HPAA，不同程度提高ACTH的水平，并对下丘脑促肾上腺素皮质激素释放激素CRH和糖皮质激素有影响。积雪草总苷可能是通过提高机体对各种非特异性刺激的抵抗力，防止过度应激刺激所致机体HPAA和HPTA等调节功能紊乱而发挥抗抑郁作用的。    早期的研究资料10说明，积雪草的挥发油和乙醇初提液具有抗抗抑郁作用。近期研究报道说明积雪草的抗抑郁作用是通过降低单胺氧化酶的活性，调节脑内氨基酸的含量11；抑制血清皮质酮水平的升高，增强脑内单胺类神经递质的传递12等而发挥作用的。2.2 抗胃溃疡作用乐锦茂等13发现复方积雪草浸膏治疗胃溃疡两周以后, 大鼠血流加快, 血流呈流线型或线粒型，血细胞聚集减少，胃溃疡愈合面积达99.5%。发现复方积雪草浸膏对组胺所致的胃液分泌，胃液游离酸和总酸、胃蛋白酶均有一定的抑制作用。    随着积雪草对胃溃疡的临床和药理作用的研究不段深入，近几年有许多研究证实积雪草对胃溃疡有治疗作用。如：发现积雪草提取物对乙醇胃黏膜具预防作用；对乙酸胃溃疡具有治疗作用；可以降低过氧化物(MPO) 、丙二醛(MDA) 、IL8的产生；可以增加胃黏膜細胞的存活率14。通过加强黏膜的自身阻碍以及减少自由基的损害来扺抗小鼠乙醇所致的胃黏膜损害15；通过增加粘蛋白和糖蛋白的分泌 ,增强胃黏膜的屏障作用而发挥抗溃疡作用16。2.3 对纤维细胞合成的影响谢举临等17研究了积雪草苷对纤维细胞核DNA 合成和胶原蛋白合成的影响，发现积雪草苷可以影响成纤维细胞的超微结构，表现为核分裂相较少，核仁变细小或缺失，使成纤维细胞的增殖变得不活泼，合成和分泌蛋白的活性能力减弱。积雪草苷还可以抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成。    王瑞国等18发现积雪草苷在一定剂量范围内能促进小鼠成纤维细胞DNA 合成和胶原蛋白合成, 并呈剂量依赖关系。汤丽霞等19也有积雪草酸抑制肝星状细胞 HSC-T6细胞型胶原蛋白表达的报道。潘姝等20积雪草苷可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期，减少成纤维细胞中的磷酸化Smad2的含量，增加细胞中Smad7的含量。此外,章庆国等21，黄茂芳等22研究积雪草提取物对人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响，也得到了同样的结论。2.4 对皮肤系统的作用张涛等23报道了积雪草苷在烧伤创面愈合过程中能有效促进细胞周期蛋白B1和增殖细胞核抗原的表达，使细胞周期的S + G2 期明显提前,从而加快细胞增殖,促进创面愈合。毛维翰等24对积雪草苷作了治疗皮肤病的临床多中心开放性研究，结果发现，积雪草苷对皮肤溃疡治疗有效率为 91. 7%，对瘢痕疙瘩的有效率为 67.9%，对局限性硬皮病的有效率为 89%，对皮肤淀粉样变形的有效率为 76%,对萎缩性硬化性苔藓等其他一些皮肤病也有较好的治疗作用 。    此外还有用积雪草配成的烧伤膏用于治疗浅度及深度烧伤，发现患者疼痛缓解快、创面渗出少、愈合周期短、瘢痕形成率低25。还有积雪草苷可直接作用于黑素细胞, 抑制黑素合成，是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂26。2.5 对肾的作用复方积雪草在长期的临床实践中显示能改善慢性肾功能衰竭CRF患者病症 ,降低血肌酐、尿素氮及 24 h 尿蛋白量27。实验研究提示能抑制系膜细胞增殖 ,减少细胞外基质沉积，下调肾组织中 型胶原、纤连蛋白(FN) 、层 黏 蛋 白 (LN) 以 及 转 化 生 长 因 子 1(TGF -1)和基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 的表达 ,降低血清和肾组织匀浆丙二醛含量 ,增加超氧化物歧化酶活性 ,抑制脂质过氧化28，29；能够下调-SMA 、Vimentin mRNA 表达水平30；阻止系膜细胞由 G1 期进入 S期；下调佛波酯刺激的系膜细胞清道夫受体表达31；抑制炎性细胞因子 TNF-上调所致的肾局部补体 C3 过度产生32。王军等33用基因表达谱芯片检测说明：复方积雪草可抑制PDGF-、PDGF-、PDGF受体、VEGF mRNA的表达;能抑制 IL-9、IL-7R2、MIP等因子的mRNA的表达;经复方积雪草刺激后，肾组织中癌基因 c-Myc , Jun 表达被抑制； 覃志成等34研究发现复方积雪草可以明显减低高 IgA 血清刺激足细胞表达的 VEGFmRNA；张边江等35报道了积雪草提取物对血管紧张素 Ang 刺激下的大鼠肾小球系膜细胞MC增殖和 Ca2+水平有抑制和降低作用。2.6 抗肿瘤作用Bahu T.D 等36报道积雪草纯化物体外对肿瘤细胞增殖有抑制的作用,并显示一定的剂量依赖关系。同时他们还发现, 口服积雪草提取物或经层析法获得的积雪草纯化物，能抑制小鼠腹水瘤的生长并延长这些耐受小鼠的寿命，而且还发现它对人体正常的淋巴细胞没有毒副作用。    1996年有人报道了积雪草具有抗癌作用，之后陆续出现了很多积雪草提取物抗肿瘤作用的研究报道，如：积雪草的醇提取物有抗艾滋病毒逆转录酶的活性8；积雪草苷对体外培养的L929细胞和CNE细胞的增殖有抑制作用，对移植S180细胞的增殖也有抑制作用,同时能提高荷S180小鼠的存活时间37；积雪草苷对B16细胞的生长有丝分裂过程有明显抑制作用，能够诱导细胞凋亡或死亡，提示积雪甙有抗黑素瘤细胞生长作用38；积雪草苷可诱导肿瘤细胞凋亡并与长舂新碱显示协同作用, 有可能作为生化调节剂应用于肿瘤化疗39。积雪草苷对宫颈癌Hela 细胞的生长有显著抑制作用并且呈浓度和时间依赖性；可能通过抑制Survivin表达，促进Capase- 3表达而在诱导宫颈癌细胞凋亡过程中发挥重要作用40。2.7 对心血管系统作用有人报道41将积雪草总苷用于制备防治冠心病、心肌堵塞、脑血栓形成、脑堵塞等心血管疾病药物中的新用途。周建燮等42也有积雪草苷促进内皮细胞生长、内膜修复的作用 ,初步提示其具有治疗PCI术后再狭窄的作用的报道。    Cesarone,M.R 43研究发现, 积雪草的三萜类成分可以增加患者的毛细血管通透性, 改善微循环, 改善结缔组织血管壁功能, 减轻踝部水肿, 可以治疗静脉高血压。 Incandela L44研究发现,积雪草的三萜类成分具有调节静脉管壁成纤维细胞的作用, 能增加胶原蛋白和组织蛋白的合成，刺激静脉壁周围胶原的重塑，可以用于治疗静脉功能障碍。李桂桂等45对兔心肌缺血再灌注损伤 (M IRI)模型研究，发现羟基积雪草苷MC可明显减小左心及全心心肌堵塞面积；对心电图有一定的改善作用；并能明显改善心功能，降低 LDH及 CK的升高程度。并且，MC可明显降低 CRP升高程度；升高 SOD酶活性 ,减少 MDA含量；可明显抑制 M IRI引起的心肌细胞凋亡，使 Bcl-2表达上调。MC对心肌缺血再灌注损伤具有明显的预防和保护作用 ,作用机制可能与抗脂质过氧化物产生、提高 SOD活力、抗炎以及抗心肌细胞凋亡有关。2.8 抗病原微生物作用积雪草水提物有抗菌和抗病毒作用，对金黄色葡萄球菌和变形杆菌有抑菌作用，对绿脓杆菌、大肠杆菌、副大肠杆菌、宋氏痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌和炭疽杆菌均无抑菌作用46。张胜华等47报道了积雪草苷对37株标准及临床别离菌株显示较强抗菌活性，尤其对各种耐药细菌，包括耐甲氧西林的金葡球菌MRSA、表葡菌MRSE，耐5种氨基糖苷类抗生素、产钝化酶的粪肠球菌、产-内酰胺酶的大肠埃希菌。肺炎克雷伯杆菌和醋酸钙不动杆菌，以及耐哌拉西林的铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度值与三金片相近。积雪草苷对小鼠膀胱上行性肾感染大肠埃希菌26的去除细菌作用较强，可知积雪草苷具有良好的体内外抗菌活性，尤其对于泌尿系统感染。2.9 增强记忆的作用孙峰等48通过对慢性铝中毒痴呆小鼠模型的研究，羟基积雪草甙可明显减轻铝过负荷所致的海马神经元损伤,明显缩短小鼠寻找平台潜伏期，降低小鼠脑组织中MAO-B活性，对慢性铝中毒小鼠的海马神经元具有保护作用 ,从而改善学习记忆能力，产生对拟痴呆模型的治疗作用。陈明亮等49用复方积雪草连续灌胃30 d阿尔茨海默病(AD) 模型大鼠，做跳台实验和 Y迷宫实验发现治疗组学习记忆能力显著升高。2.10 对肝的作用明志君等50用二甲基亚硝氨DMN制备的大鼠肝纤维化模型研究积雪草总苷抗实验性大鼠肝纤维化的作用，发现积雪草总苷能改善肝功能，并且肝组织病理学检查显示具有抗肝纤维化作用，可知积雪草总苷对 DMN 诱导的大鼠慢性肝纤维化具有良好的治疗作用。抑制肝纤维化可以通过抑制肝星状细胞(HSC)的增殖,促进HSC细胞的凋亡。汤丽霞等19的研究说明积雪草酸能抑制活化的HSC-T6细胞的型胶原蛋白表达水平。马葵芬等51也报道了积雪草酸对化学损伤原代培养大鼠肝细胞有保护作用。2.11 其他作用除以上综述的药理活性之外还有许多作用如：调节免疫和降低血糖的作用52，抗炎作用53，抗乳腺增生的作用54，降温作用55等。3 小结积雪草为我国常用中药，近20年来对积雪草的研究主要集中在它的化学成分及药理作用两方面。因此，必须提高实验技能和更新实验方法,加快对其有效成分的研究；同时还要注重进行药理活性的检验和临床实验，以便更好地利用积雪草的生物活性，促进积雪草在多领域的应用，以便更合理地综合利用积雪草资源。【参考文献】  1赵宇新，李曼玲，冯伟红，等.积雪草的研究进展J.中国中医药信息杂志，2002,9(8)：,81.2张雷磊，王海生，姚庆强，等. 积雪草化学成分研究J.中草药，2005，36(12)：1761.3Shukla YN,Srivas tava Ritu, Tripathi AK,et al.Charicterization of an Ursane triterpenoid from Centella asiatica with growth inhibitory activity against Spilarictia oblique Pharm BiolJ.(Lisse Neth),2000,38(4)：262.4Srivastava Ritu,Shukla YN.A disubstituted pyrone from Centella AsiaticaJ.Indian Chen,Sect B:Org Chem Incl Med Chem,1997.36B(10)：963.5秦路平，丁如贤，张卫路，等.积雪草挥发油类成分分析及其抗抑郁作用研究J.第二军医大学学报，1998，19(2)：186.6Srivastava Ritu,Shukal YN,Tripathi AK. 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