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    过氧化氢酶活性 演示文稿.ppt

    • 资源ID:85525365       资源大小:66.50KB        全文页数:6页
    • 资源格式: PPT        下载积分:16金币
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    过氧化氢酶活性 演示文稿.ppt

    过氧化物酶活性测定过氧化物酶活性测定一、实验目的:一、实验目的:学习和掌握过氧化物酶(POD)活性测定的原理及方法。二、实验原理二、实验原理:在通常情况下,需氧生物在还原氧至水的过程中会产生氧气,植物细胞中电子传递不通畅时,会产生一系列活性氧(超氧阴离子自由基,羟自由基,单线态氧,过氧化氢),会直接或间接启动膜脂过氧化作用,导致膜的损伤和破坏。过氧化物酶广泛存在于植物体中,是生物体内存在的一种防护氧自由基对细胞膜系统伤害的酶,在细胞膜产生过氧化物的破坏有保护作用,在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。过氧化物酶能催化过氧化氢氧化酚类,产物为醌类化合物,此化合物进一步缩合或与其他分子缩合,产生颜色较深的化合物。本实验是以邻甲氧基苯酚(即愈创木酚)为过氧化物酶的底物,在该酶存在下,H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚,其反应为:该红棕色的物质在波长470nm处有最大光吸收,故可通过测470nm处的吸光度变化来测定过氧化物酶的活性。器材与试剂n1 实验仪器:分光光度计,离心机,秒表,天平,研钵。n2 实验试剂:50mmol/L磷酸缓冲液,50mmol/L愈创木酚溶液,2%过氧化氢。n3 实验材料:小麦(营养液,盐胁迫)。实验步骤n1.粗酶液的提取 称取植物材料0.5g,加5ml50mmol/L 磷酸缓冲液,于研钵中研磨成匀浆,以4000r/min离心15min,残渣再用5ml 磷酸缓冲液提取一次,合并两次上清液,25ml容量瓶定溶,保存在冷处。n2.酶活性的测定 n取光径1cm比色杯2只,于1只中加入磷酸缓冲液1ml,50mmol/L愈创木酚溶液1ml,2%过氧化氢1ml,作为校零对照;另一只加入50mmol/L愈创木酚溶液1ml,2%过氧化氢 1ml,上述酶液1ml(如酶活性过高可适当稀释),立即开启秒表计时,于分光光度计470nm波长下测量OD值,每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小,即以A稀释倍数(min鲜重g)表示。注意事项n酶的提取需要在低温下进行。

    注意事项

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