革兰氏染色法.ppt

实验一：细菌的革兰氏染色实验一：细菌的革兰氏染色1.实验器材实验器材菌种：菌种：大肠杆菌；金黄色葡萄球菌；链球菌；溶藻弧菌溶液和试剂：溶液和试剂：草酸铵结晶紫、卢哥氏碘液、95%乙醇、番红液 其他用品：其他用品：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。2.实验目的实验目的学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。3.基本原理基本原理革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。4.实验步骤实验步骤具体参照p82实验内容：实验内容：1、每组分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、溶藻弧菌进行革兰氏染色，观察记录染色结果。2、分别选取一种G+和G-细菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。注意事项注意事项 为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不宜过热，脱色时间的控制。1、取载玻片用纱布擦干，涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。实验流程实验流程2、涂片：涂片：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载 玻片上，使其薄而均匀。3、晾干：晾干：让涂片在空气中自然干燥（可适度靠近酒精灯火焰旁温干）。4、固定：固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。5、染色：染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1 min。6、水洗：水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。7、媒染：媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。8、脱色：脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。9、复染：复染：滴加蕃红复染2-3 min，水洗。至此，革兰氏染色结束。10、镜检：镜检：干燥后用油镜观察。混合涂片染色方法同上。