DNA单位换算.pdf

1 DNA 单位换算 吴乃虎 (中国科学院遗传与发育生物研究所)黄美娟 (北京大学生命科学学院)1.重量单位换算 1g=10-6g 1ng =10-9g 1pg =10-12g 1fg =10-15g 2.换算系数(核酸碱基对与分子量的换算)1Kb dsDNA(Na+)=6.6105Da 1Kb ssDNA(Na+)=3.3105Da 1Kb ssRNA(Na+)=3.4105Da 脱氧核苷酸的平均分子量=324.5 Da(330Da)例：配制 1pmol pBR322 DNA溶液 100ml需称取多少 DNA？解：pBR322 DNA MW=43633302=2.8106 2.8106106g 1pmol=-2.8g(1L)1012 2.8 100ml 1pmol pBR322 DNA -0.28g 10 3.DNA和 RNA的定量(OD值换算)OD：optical density 光密度 一般是应用紫外分光光度计检测核酸的浓度，它适用于 DNA及 RNA浓度的测定。核酸(DNA、RNA)、蛋白质以及盐和小分子都有吸收紫外光的性质，其吸收高峰分别为：核 酸 260nm 波长处 蛋 白 质 280nm 波长处 盐、小分子 230nm 波长处 A260单位(核酸 OD 值)的换算：2 1A260(1 OD)单位的双链 DNA50g/ml 1A260(1 0D)单位的单链 DNA40g/ml 1A260(1 OD)单位的单链 RNA40g/ml 1A260(1 OD)单位的寡核苷酸33g/ml 例：取某 DNA样品溶液 5 l，加水至 1000l，在 UV260nm时，测得的 OD 值是 0.2，问原溶液中的 DNA浓度(g/l)是多少？解：0.250g/ml10g 这表示 5 l 样品溶液共有 10g DNA，所以该样品 DNA浓度应是：10g/5l2g/l 例.取某质粒 DNA 溶液 3l，加入到 300l TE 中，测得的 OD 值 A2600.134，问其 DNA 浓度为多少？解：0.13450g300 -0.6g/l 31000 即此质粒 DNA 浓度为每微升 0.6g。4.DNA 溶液纯度测定 一般情况下，应用紫外分光光度计测定 DNA 溶液在 A230、A260和 A280下的吸收光值，便可以很好地确定 DNA 溶液的纯度，通常只测 A260和 A280两个吸收光度便可满足要求。因为纯的 DNA 溶液其 A260/A280的比值约为 1.8-1.9，而其 A260/A230的比值则应大于 2.0，所以当：a.A260/A2801.8 时，表明 RNA 污染严重 b.A260/A2801.6 时，表明有明显的蛋白质或苯酚的污染 c A260/A2802.0 时，表明溶液中有残存的核苷酸、氨基酸、酚、盐等小分子杂质 这样的 DNA 样品溶液需重新处理：在 a 情况下，可考虑用 RNA 酶处理之，在 b 和 c 的情况下，可考虑用蛋白酶 K 以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀重新处理样品。在 SDS和 EDTA的存在的条件下，proteinase K 仍具有很高的活性，因此在 DNA降解酶活力被抑制的情况下，使用 proteinase K仍可以消除蛋白质，为制备高纯度高分子量的 DNA制品创造了条件。2011年 4 月提供