农产品中甲基对硫磷农药残留免疫亲和电化学检测技术(T-JAASS 7—2020).pdf

ICS 65.020B 15团体标准T/JAASS 7-2020农产品中甲基对硫磷农药残留免疫亲和电化学检测技术Derermination of parathion residues by Immunoaffinity electrochemical method20201012 发布20201012 实施江苏省农学会江苏省农学会发 布T/JAASS 7-2020目次前言.1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂与材料.16仪器与设备.17试样制备.28测定.29结果判定与表述.210 重复性.311 检测限和特异性.3III前言本文件按照 GB/T 1.1-2020 给出的规则起草。本文件由江苏省农业科学院提出。本文件由江苏省农学会归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院、南京农业大学、浙江大学、华南农业大学、广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司。本文件主要起草人：刘凤权、王利民、郭逸蓉、徐振林、华修德、王鸣华、张存政、孙远明、石松。T/JAASS 7-20201农产品中甲基对硫磷农药残留免疫亲和电化学检测技术1范围本文件规定了甲基对硫磷农药的免疫亲和电化学检测技术的原理、试剂与材料、仪器与设备、试样制备、测定、结果计算与表述、重复性、检测限与特异性。本文件适用于农产品中甲基对硫磷农药残留的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法3术语和定义本文件无术语和定义。4原理试样中甲基对硫磷农药分子与免疫亲和柱中固定相上甲基对硫磷抗体（下称抗体）发生特异性结合，其他与抗体不发生免疫亲和反应的成分随流动相流出，利用醋酸缓冲液使固定相上抗体变性，将固定相上抗体结合的甲基对硫磷洗脱，洗脱液进行电化学检测。5试剂与材料5.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯；实验室用水符合GB/T 6682 中规定的二级水，标准溶液和流动相用水为一级水。5.2甲醇 色谱纯5.3醋酸缓冲液 pH=5.06仪器与设备6.1甲基对硫磷免疫亲和柱，柱容量300 ng。T/JAASS 7-202026.2滤纸 9 cm 双圈定性滤纸6.3容量瓶 10 mL 容量瓶6.4电化学工作站6.5电化学反应池，其中包括 1 根玻碳电极、1 根 Ag/AgCl 参比电极和 1 根铂丝电极。反应池内可包含 4 mL 样品液。7试样制备7.1提取取试样可食部分，切碎后，称取10 g 0.1 g，加入5 mL甲醇（5.1）-水（80:20）溶液涡旋5 min，静置30 min。随后将样品溶液在滤纸（6.2）上进行固液分离。滤液转移至10 mL容量瓶（6.3）并定容至10 mL（甲醇-水溶液冲洗滤纸中的样品）。样品滤液由纯水进行5倍稀释，待检测用。7.2净化将免疫亲和柱（6.1）连接于10.0 mL玻璃定量管下。准确移取10.0 mL样品提取液注入玻璃定量管中，将空气压力泵与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2 mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，以10.0 mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加入2.0 mL醋酸缓冲液洗脱，流速不超过1 mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，加醋酸缓冲液定容为4.0 mL，供电化学检测用。8测定8.1检测步骤8.1.1 在电化学反应池内施加开路电压，维持 120 s；8.1.2 在电化学反应池内进行方波扫描，扫描范围（-0.2 V，-1.0 V），步进电压 4 mV，振幅 25 mV，频率 25 Hz；8.1.3 在电化学反应池内施加同一开路电压，维持 240 s；8.1.4 在电化学反应池内进行方波扫描，扫描范围（-0.6 V，0.3 V），步进电压 4 mV，振幅 25 mV，频率 25 Hz。8.2检测条件上述步骤中的电化学反应池，内含有4 mL pH=5.0的醋酸缓冲液；整个电化学检测方法是在室温条件下进行的；甲基对硫磷的定量依据是电化学反应中最后一步方波扫描后氧化峰大小。9结果计算与表述试样中甲基对硫磷含量以质量分数X计，单位为毫克每千克（mg/kg），按式（1）计算：T/JAASS 7-20203（1）式中：Pi：检测溶液中甲基对硫磷组分的氧化峰高值；Vi：电化学反应池中检测溶液体积，单位为毫升（mL）；Cs：甲基对硫磷标准溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；Vs：标准溶液的检测体积（mL）；Ps：甲基对硫磷标准溶液氧化峰高平均值（系列浓度）；m：试样质量，单位为克（g）。测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后一位。10重复性在重复实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。11检测限与特异性11.1检测限:甲基对硫磷的检测限为 0.02 mg/kg，符合 GB 2763 要求。11.2特异性:检测方法对杀螟硫磷、甲基毒死蜱、倍硫磷、甲基立枯磷等农药的交叉反应均小于 1%。