色谱分析检测技术..优秀PPT.ppt

LOGO化学物质（职业卫生毒物）的化学物质（职业卫生毒物）的试验室分析技术试验室分析技术GC、HPLC 浙江泰鸽平安科技有限公司书目书目液相色谱法（液相色谱法（HPLC）五职业卫生毒物检测标准及其检测方法职业卫生毒物检测标准及其检测方法一实验室常用检测方法实验室常用检测方法二色谱法概述色谱法概述三三气相色谱法（气相色谱法（GC）四 themegallery Company Logo1.1毒物检测规范标准毒物检测规范标准v 在进行职业卫生危害因素检测时，必需依据在进行职业卫生危害因素检测时，必需依据国家颁布的相关规范和标准进行样品采集、试验室检国家颁布的相关规范和标准进行样品采集、试验室检测等，没有标准方法可接受国外标准，国内外均无标测等，没有标准方法可接受国外标准，国内外均无标准可采样国内外公认的方法。准可采样国内外公认的方法。vGBZ 2.1、GBZ 159、GBZ 160、WS/T-1996vGB/T170611997 作业场所空气采样仪器的作业场所空气采样仪器的技术规范技术规范vGB/T8170 中华人民共和国国家标准数值修约中华人民共和国国家标准数值修约规则规则v工作场所空气中有毒物质监测探讨规范工作场所空气中有毒物质监测探讨规范 themegallery Company Logo1.2职业卫生检测方法的基本要求职业卫生检测方法的基本要求1.应当接受科学、先进、牢靠、可行的检验方法。应当接受科学、先进、牢靠、可行的检验方法。2.检测方法必需包括采样方法、样品预处理和测定方法。检测方法必需包括采样方法、样品预处理和测定方法。3.应满足工作场全部害因素职业接触限值中有害物质容许浓度对检测的应满足工作场全部害因素职业接触限值中有害物质容许浓度对检测的要求。要求。4.方法具有确定的特异性，空气中常见共存物不干扰测定或能被消退。方法具有确定的特异性，空气中常见共存物不干扰测定或能被消退。5.采样方法应符合采样方法应符合GBZ 159的要求，能采集空气中相应存在状态的待的要求，能采集空气中相应存在状态的待测物。测物。6.方法性能指标应符合职业卫生标准制定规范的要求。方法性能指标应符合职业卫生标准制定规范的要求。7.空气中毒物浓度以空气中毒物浓度以mg/m3表示，即在温度表示，即在温度20、大气压、大气压101.3 kPa 状态下状态下，1立方米空气中含待测物的毫克数。立方米空气中含待测物的毫克数。themegallery Company Logo1.3职业卫生标准职业卫生标准vGBZ/T 160-2004 共检测共检测81类化合物，其中无机化合物类类化合物，其中无机化合物类45种，种，42个检测方法；非金属类化合物个检测方法；非金属类化合物11种，种，37个检测方法；有个检测方法；有机化合物类机化合物类44种，种，115个检测方法。个检测方法。检测方法检测方法项目数（个）项目数（个）比例（比例（%）GC20663HPLC155AAS299SP5617其它其它186 themegallery Company Logo1.3职业卫生标准职业卫生标准vGBZ/T 160-2007 新增新增26种化合物检测标准方法，种化合物检测标准方法，增加增加4个编号、个编号、修订修订12个标准方法。个标准方法。themegallery Company Logo标准号标准号内容描述内容描述备注备注GBZ/T160.38-2007（烷烃类）（烷烃类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订高浓度样品采集、解吸测定方法说明高浓度样品采集、解吸测定方法说明增加增加戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷-溶剂解吸溶剂解吸GC增加增加GBZ/T160.39-2007（烯烃类）（烯烃类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加二聚环戊二烯溶剂解吸二聚环戊二烯溶剂解吸GC增加增加GBZ/T160.42-2007（芳香烃类）（芳香烃类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加对对-特丁基甲苯、二乙烯基苯溶剂解吸特丁基甲苯、二乙烯基苯溶剂解吸GC增加增加 themegallery Company Logo标准号标准号内容描述内容描述备注备注GBZ/T160.45-2007（卤代烷烃（卤代烷烃类）类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加1,2-二氯丙烷、二氯二氟甲烷二氯丙烷、二氯二氟甲烷-溶剂解吸溶剂解吸GC 增加增加GBZ/T160.48-2007（醇类）（醇类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加1-甲氧基甲氧基-2-丙醇溶剂解吸丙醇溶剂解吸GC增加增加GBZ/T160.51-2007（酚类）（酚类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加五氯酚及钠盐五氯酚及钠盐-HPLC增加增加GBZ/T160.52-2007（脂肪族醚类）（脂肪族醚类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订高浓度样品采集、解吸测定方法说明高浓度样品采集、解吸测定方法说明增加增加正丁基缩水甘油醚正丁基缩水甘油醚-溶剂解吸溶剂解吸GC增加增加 themegallery Company Logo标准号标准号内容描述内容描述备注备注GBZ/T160.54-2007（脂肪族醛类）（脂肪族醛类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加三氯乙醛三氯乙醛-溶剂解吸溶剂解吸HPLC增加增加GBZ/T160.55-2007（脂肪族酮类）（脂肪族酮类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订高浓度样品采集、解吸测定方法说明高浓度样品采集、解吸测定方法说明增加增加异佛尔酮、二异丁基甲酮、二乙基甲酮、异佛尔酮、二异丁基甲酮、二乙基甲酮、2-己酮己酮-溶剂解吸溶剂解吸GC增加增加GBZ/T160.63-2007（饱和脂肪族（饱和脂肪族酯类）酯类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订解吸测定方法说明解吸测定方法说明增加增加乙酸异丁酯、乙酸异戊酯乙酸异丁酯、乙酸异戊酯-溶剂解吸溶剂解吸GC增加增加GBZ/T160.68-2007（氰类）（氰类）样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订高浓度样品采集、解吸测定方法说明高浓度样品采集、解吸测定方法说明增加增加甲基丙稀氰甲基丙稀氰-溶剂解吸溶剂解吸GC增加增加 themegallery Company Logo标准号标准号内容描述内容描述备注备注GBZ/T160.78-2007（拟除虫聚酯类农药）（拟除虫聚酯类农药）有机氮农药改为拟除虫聚酯类农药有机氮农药改为拟除虫聚酯类农药修订修订样品空白（对照试验、位置）样品空白（对照试验、位置）修订修订氰戊菊酯氰戊菊酯-HPLC增加增加GBZ/T160.82-2007（醇醚类）（醇醚类）二丙烯基乙二醇甲基醚二丙烯基乙二醇甲基醚-溶剂解吸溶剂解吸GC增加增加GBZ/T160.83-2007（铟及其化合物）（铟及其化合物）微孔滤膜采样，硝酸消解，火焰微孔滤膜采样，硝酸消解，火焰AAS测定测定增加增加GBZ/T160.84-2007（钇及其化合物）（钇及其化合物）微孔滤膜采样，硝高酸消解，微孔滤膜采样，硝高酸消解，ICP测定测定增加增加GBZ/T160.85-2007（碘及其化合物）（碘及其化合物）活性碳管采样，碳酸氢钠溶液解吸，离子色活性碳管采样，碳酸氢钠溶液解吸，离子色谱测定谱测定增加增加 themegallery Company Logo二、试验室常用检测方法二、试验室常用检测方法试验室常用检测方法试验室常用检测方法光谱法光谱法 色谱法色谱法 质谱法质谱法 电化学法电化学法 分子光谱分子光谱原子光谱原子光谱气相色谱气相色谱液相色谱液相色谱离子色谱离子色谱气质气质液质液质ICP-MS极谱法极谱法电位溶出电位溶出电位分析法电位分析法电导法电导法 themegallery Company Logo三、色谱法概述三、色谱法概述v色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年探讨植物叶子的组成时所用的一种方法。他用碳酸钙作吸附剂，分别植物干燥叶子的石油醚萃取物。v他把干燥的碳酸钙粉末装到一根长的玻璃管中，然后把植物叶子的石油醚萃取液倒到管中的碳酸钙上，萃取液的色素就吸附在管内上部的碳酸钙里，再用纯净的石油醚洗脱被吸附的色素，于是在管内的碳酸钙上就形成了三种颜色的6个色带。themegallery Company Logo3.1色谱法起源色谱法起源v当时，茨维特把这种色带叫做色谱，色谱法因之得名。(Chromatography)v在这一方法中，把玻璃管叫做“色谱柱”，碳酸钙叫做“固定相”，纯净的石油醚叫做“流淌相”。这就是最早的液固色谱法。v后来在此基础上又发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。themegallery Company Logo 俄国植物学家茨维特（俄国植物学家茨维特（Tswett）在）在1906 年探讨用碳酸钙分别植年探讨用碳酸钙分别植物色素时发觉的，色谱法物色素时发觉的，色谱法(Chromatography)因之得名。因之得名。石油醚石油醚碳酸钙颗粒碳酸钙颗粒色素色素玻璃柱玻璃柱 themegallery Company Logo3.2分别原理分别原理v色谱法的分别原理是：色谱法的分别原理是：v溶于流淌相溶于流淌相(mobile phase)中的各组分，经过中的各组分，经过固定相时，由于与固定相固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、安排、离子吸引、排阻、亲和）发生作用（吸附、安排、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，那么在固定相中滞留的时间的大小、强弱不同，那么在固定相中滞留的时间就不同，故从固定相中流出的先后也就不同。就不同，故从固定相中流出的先后也就不同。v这种方法被称为色层法、层析法。这种方法被称为色层法、层析法。themegallery Company Logo3.3色谱分别过程色谱分别过程v色谱分别过程色谱分别过程Temporal course流流动动相相 themegallery Company Logo themegallery Company Logo四、气相色谱四、气相色谱 气相色谱仪是一个载气连续运行、气密的气体流路系统。气路系统的气密性、载气流速的稳定性及测量的精确性，都影响色谱仪的稳定性和分析结果。高压钢瓶中的载气（气源）经减压阀减低至0.1-0.5MPa，通过装有吸附剂（分子筛）的净化气除去载气中的水分和杂质，到达稳压阀，维持气体压力稳定。样品在气化室变成气体后被载气带至色谱柱，各组分在柱中达到分别后依次进入检测器。themegallery Company Logo4.1组成 themegallery Company Logo 气相色谱仪结构气相色谱仪结构气相色谱仪结构气相色谱仪结构组成气路系统气路系统气路系统气路系统进样系统进样系统进样系统进样系统分离系统分离系统分离系统分离系统数据处理数据处理数据处理数据处理检测系统检测系统检测系统检测系统控温系统控温系统控温系统控温系统 themegallery Company Logo4.2气相色谱法的分析原理 气相色谱法主要是利用物质的沸点、极性及气相色谱法主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分别。吸附性质的差异来实现混合物的分别。1分别原理分别原理 气相色谱分别是利用试样中各组分在色谱柱气相色谱分别是利用试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相间的安排系数不同，当汽化后中的气相和固定相间的安排系数不同，当汽化后的试样被载气带人色谱柱中运行时，组分就在其的试样被载气带人色谱柱中运行时，组分就在其中的两相间进行反复多次的安排（吸附一脱附一中的两相间进行反复多次的安排（吸附一脱附一放出）。由于固定相对各种组分的吸附实力不同放出）。由于固定相对各种组分的吸附实力不同（即保存作用不同），因此各组分在色谱柱中的（即保存作用不同），因此各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过确定的柱长后，便彼此分运行速度就不同，经过确定的柱长后，便彼此分别，依次离开色谱柱进入检测器，产生的离子流别，依次离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。峰。2检测原理检测原理 当组分流精彩谱柱后，马上进入检测器。检当组分流精彩谱柱后，马上进入检测器。检测器将检测到的样品组分转变为电信号，而电信测器将检测到的样品组分转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。这些信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。这些信号放大并记录下来，就是气相色谱图。号放大并记录下来，就是气相色谱图。themegallery Company Logo 3分别分析条件的选择分别分析条件的选择 气相色谱分析的关键是物质的分别问题。两气相色谱分析的关键是物质的分别问题。两物质怎样才算达到完全分别呢？第一是两物质的物质怎样才算达到完全分别呢？第一是两物质的色谱峰的距离足够远；其次是色谱峰必需很窄。色谱峰的距离足够远；其次是色谱峰必需很窄。因为仅仅两峰间有确定的距离，而每一峰都很宽因为仅仅两峰间有确定的距离，而每一峰都很宽而导致彼此交叠，则还是分不开。所以只有同时而导致彼此交叠，则还是分不开。所以只有同时满足这两个条件，才能完全达到分别的目的。满足这两个条件，才能完全达到分别的目的。3.1载气及其流速的选择载气及其流速的选择 载气的流速不仅对色谱柱分别效率有重大影响，载气的流速不仅对色谱柱分别效率有重大影响，并且还确定分析所须要的时间。流速快，分析时并且还确定分析所须要的时间。流速快，分析时间短；流速慢，分析时间增长。检测时，一般都间短；流速慢，分析时间增长。检测时，一般都有一个最佳流速，可以使柱子的分别效果最好。有一个最佳流速，可以使柱子的分别效果最好。在实际工作中为了加快分析速度，选择的流速往在实际工作中为了加快分析速度，选择的流速往往稍高于最佳流速，但不影响分别。往稍高于最佳流速，但不影响分别。themegallery Company Logo3.2 柱温的选择柱温的选择 柱温的选择原则应是：在对最难分别的物质对保持较好分别度的前提下，尽可能接受柱温的选择原则应是：在对最难分别的物质对保持较好分别度的前提下，尽可能接受较高柱温，但以保留时间适宜、峰形不拖尾为度。在实际工作中，柱温的选择还须从较高柱温，但以保留时间适宜、峰形不拖尾为度。在实际工作中，柱温的选择还须从试样沸点和固定液配比综合考虑。柱温一般选择在接近或略低于组分平均沸点时的温试样沸点和固定液配比综合考虑。柱温一般选择在接近或略低于组分平均沸点时的温度。对于组分困难、沸程宽的试样，接受程序升温的方法，使低沸点和高沸点样品都度。对于组分困难、沸程宽的试样，接受程序升温的方法，使低沸点和高沸点样品都能达到良好的分别。能达到良好的分别。3.3 进样条件的选择进样条件的选择 进样时间：进样时间：进样速度必需快，一般用注射器或进样阀进样时，进样时间都在进样速度必需快，一般用注射器或进样阀进样时，进样时间都在Is以内。若进样时间以内。若进样时间过长，试样原始宽度变大，致使峰变形。过长，试样原始宽度变大，致使峰变形。themegallery Company Logo进样量：进样量：进样量太大，会使几个峰叠在一起，分别效果不好；进样量太少，会影响检出和增大进样量太大，会使几个峰叠在一起，分别效果不好；进样量太少，会影响检出和增大误差。总的来说，在实际分析过程中进样量一般是比较少的，液体试样进样量一般为误差。总的来说，在实际分析过程中进样量一般是比较少的，液体试样进样量一般为1uL，气体试样为，气体试样为lmL。汽化温度：汽化温度：进样后要有足够的汽化温度，使样品瞬间汽化被载气带入柱中，在保证试样不分进样后要有足够的汽化温度，使样品瞬间汽化被载气带入柱中，在保证试样不分解的状况下，适当的提高汽化温度对分别和定量有利，尤其当进样量大时更是如此。解的状况下，适当的提高汽化温度对分别和定量有利，尤其当进样量大时更是如此。一般选择的汽化温度比柱温高一般选择的汽化温度比柱温高3070。3.4 柱长柱长L的选择的选择 加大柱长对分别有利，但将使各组分的保留时间增加，分析时间延长。但柱过长，分加大柱长对分别有利，但将使各组分的保留时间增加，分析时间延长。但柱过长，分析时间增加且峰宽也会增加，导致总分别效能下降，因此柱长析时间增加且峰宽也会增加，导致总分别效能下降，因此柱长L要选择刚好使各组分得要选择刚好使各组分得到有效分别为宜。到有效分别为宜。3.5 担体粒度和筛分范围选择担体粒度和筛分范围选择 3.6 固定液配比的选择固定液配比的选择 themegallery Company Logo4.3色谱定性与定量分析（1）定性分析）定性分析 色谱定性分析就是要确定各色谱峰所代表的化合物。色谱定性分析就是要确定各色谱峰所代表的化合物。当前色谱定性分析常用的方法有以下几种。当前色谱定性分析常用的方法有以下几种。1.保留时间定性保留时间定性2.利用不同检测方法定性利用不同检测方法定性3.保留指数定性保留指数定性4.柱前或柱后化学反应定性柱前或柱后化学反应定性5.与其他仪器联用定性与其他仪器联用定性 themegallery Company Logov1.1.保留时间定性保留时间定性在确定的色谱系统和操作条件下，每种物质都有确定的保留时间，在确定的色谱系统和操作条件下，每种物质都有确定的保留时间，假如在相同色谱条件下，未知物的保留时间与标准物质相同，则可初假如在相同色谱条件下，未知物的保留时间与标准物质相同，则可初步认为它们为同一物质。为了提高定性分析的牢靠性，还可进一步变步认为它们为同一物质。为了提高定性分析的牢靠性，还可进一步变更色谱条件（分别柱、流淌相、柱温等）或在样品中添加标准物质，更色谱条件（分别柱、流淌相、柱温等）或在样品中添加标准物质，假如被测物的保留时间仍旧与标准物质一样，则可认为它们为同一物假如被测物的保留时间仍旧与标准物质一样，则可认为它们为同一物质。质。themegallery Company Logov2.2.利用不同检测方法定性利用不同检测方法定性同一样品可以接受多种检测方法检测，假如待测组分和标准物在同一样品可以接受多种检测方法检测，假如待测组分和标准物在不同的检测器上有相同的响应行为，则可初步推断两者是同一种物质。不同的检测器上有相同的响应行为，则可初步推断两者是同一种物质。在液相色谱中，还可通过二极管阵列检测器比较两个峰的紫外或可见在液相色谱中，还可通过二极管阵列检测器比较两个峰的紫外或可见光谱图。光谱图。v3.3.保留指数定性保留指数定性在气相色谱中，可以利用文献中的保留指数数据定性。保留指数在气相色谱中，可以利用文献中的保留指数数据定性。保留指数随温度的变更率还可用来推断化合物的类型，因为不同类型化合物的随温度的变更率还可用来推断化合物的类型，因为不同类型化合物的保留指数随温度的变更率不同。保留指数随温度的变更率不同。themegallery Company Logov4.柱前或柱后化学反应定性在色谱柱后装T型分流器，将分别后的组分导入官能团试剂反应管，利用官能团的特征反应定性。也可在进样前将被分别化合物与某些特殊反应试剂反应生成新的衍生物，于是，该化合物在色谱图上的出峰位置或峰的大小就会发生变更甚至不被检测。由此得到被测化合物的结构信息。v5.与其他仪器联用定性将具有定性实力的分析仪器如质谱（MS）、红外（IR）、原子吸取光谱（AAS）、原子放射光谱（AES，ICP-AES）等仪器作为色谱仪的检测器即可获得比较精确的定性信息。themegallery Company Logo（2）定量分析）定量分析 色谱定量分析的依据是被测物质的量与它在色谱定量分析的依据是被测物质的量与它在色谱图上的峰面积（或峰高）成正比。数据处理色谱图上的峰面积（或峰高）成正比。数据处理软件（工作站）可以给出包括峰高和峰面积在内软件（工作站）可以给出包括峰高和峰面积在内的多种色谱数据。因为峰高比峰面积更简洁受分的多种色谱数据。因为峰高比峰面积更简洁受分析条件波动的响，且峰高标准曲线的线性范围也析条件波动的响，且峰高标准曲线的线性范围也较峰面积的窄，因此，通常状况是接受峰面积进较峰面积的窄，因此，通常状况是接受峰面积进行定量分析。常用的定量分析方法以下几种：行定量分析。常用的定量分析方法以下几种：1.校正因子定量校正因子定量2.归一化法归一化法3.外标法外标法4.内标法内标法5.标准加入法标准加入法 themegallery Company Logo五、高效液相色谱五、高效液相色谱 themegallery Company Logo5.1液相色谱发展概述v液相色谱法起先阶段是用大直径的玻璃管柱在室温顺常压下用液位差输送流淌相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。v高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年头后期引入了气相色谱理论而快速发展起来的。v它与经典液相色谱法的区分是填料颗粒小而匀整，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流淌相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。themegallery Company Logov又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。v一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或爱护柱、柱温限制器等，现代HPLC仪还有微机限制系统，进行自动化仪器限制和数据处理。制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。themegallery Company Logo5.2主要类型和原理v通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。谱法。v高效液相色谱法按固定相不同分为液固吸附色谱法、液液高效液相色谱法按固定相不同分为液固吸附色谱法、液液安排色谱法（正相与反相）、键合相色谱。依据固定相的安排色谱法（正相与反相）、键合相色谱。依据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法和薄层色形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法和薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、安排色谱、离子交换色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、安排色谱、离子交换色谱、体积排阻色谱和亲和色谱。谱、体积排阻色谱和亲和色谱。v1 1液固色谱法液固色谱法 v运用固体吸附剂，被分别组分在色谱柱上分别原理是依据运用固体吸附剂，被分别组分在色谱柱上分别原理是依据固定相对组分吸附力大小不同而分别。分别过程是一个吸固定相对组分吸附力大小不同而分别。分别过程是一个吸附解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，附解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度粒度510m510m。适用于分别分子量。适用于分别分子量2001000 2001000 的组分，大多的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分别同分异构体。于分别同分异构体。themegallery Company Logo2.2.液液色谱法液液色谱法 运用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合运用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分别原理是依据被分别的于担体表面而形成的固定相，分别原理是依据被分别的组分在流淌相和固定相中溶解度不同而分别。分别过程组分在流淌相和固定相中溶解度不同而分别。分别过程是一个安排平衡过程。是一个安排平衡过程。涂布式固定相应具有良好的惰性；流淌相必需预先涂布式固定相应具有良好的惰性；流淌相必需预先用固定相饱和，以削减固定相从担体表面流失；温度的用固定相饱和，以削减固定相从担体表面流失；温度的变更和不同批号流淌相的区分常引起柱子的变更；另外变更和不同批号流淌相的区分常引起柱子的变更；另外在流淌相中存在的固定相也使样品的分别和收集困难化。在流淌相中存在的固定相也使样品的分别和收集困难化。由于涂布式固定相很难避开固定液流失，现在已很少接由于涂布式固定相很难避开固定液流失，现在已很少接受。现在多接受的是化学键合固定相，如受。现在多接受的是化学键合固定相，如C18C18、C8C8、氨、氨基柱、氰基柱和苯基柱。基柱、氰基柱和苯基柱。themegallery Company Logo 液液色谱法按固定相和流淌相的极性不同可分为正相液液色谱法按固定相和流淌相的极性不同可分为正相色谱法色谱法(NPC)(NPC)和反相色谱法和反相色谱法(RPC)(RPC)。正相色谱法正相色谱法 接受极性固定相接受极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流淌相为相对非极性的疏水性溶剂流淌相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调整组分的保留时间。常用于分别中等极性和极性较强的调整组分的保留时间。常用于分别中等极性和极性较强的化合物化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。反相色谱法反相色谱法 一般用非极性固定相（如一般用非极性固定相（如C18C18、C8C8）；流淌相为水或缓）；流淌相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调整保留时间。适用于分别非极性和水互溶的有机溶剂以调整保留时间。适用于分别非极性和极性较弱的化合物。极性较弱的化合物。RPC RPC 在现代液相色谱中应用最为广泛，在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个据统计，它占整个HPLC HPLC 应用的应用的80%80%左右。左右。themegallery Company Logo正相色谱正相色谱 20%反相色谱反相色谱80%正相色谱正相色谱 20%反相色谱反相色谱80%正相正相HPLC 极性极性:固定相固定相 流淌相流淌相 固定相固定相-极性强极性强 流淌相流淌相(己烷己烷,庚庚烷烷)-极性弱极性弱 极性小物质先出峰极性小物质先出峰主流反相反相HPLC 极性极性:固定相固定相 流淌相流淌相 固定相固定相-极性弱极性弱 流淌相流淌相(甲醇甲醇,乙腈乙腈等等)-极性强极性强 极性大物质先出峰极性大物质先出峰 themegallery Company Logo5.3液相色谱仪工作流程 themegallery Company Logov现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后依据现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后依据分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。积分仪或色谱工作站）。v液相色谱仪的工作过程：输液泵将流淌相以稳定的流速液相色谱仪的工作过程：输液泵将流淌相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入样品导入,流淌相将样品带入色谱柱流淌相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在色谱柱中各组分因在固定相中的安排系数或吸附力大小的不同而被分别，并在固定相中的安排系数或吸附力大小的不同而被分别，并依次随流淌相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记依次随流淌相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。录、处理或保存。themegallery Company Logo5.4工作步骤步 骤步 骤准准备备开开机机 清关清关洁机洁机 分测分测 析试析试 themegallery Company Logo1.准备v1、准备所需的流淌相，用合适的0.45m滤膜过滤，超声脱气20min。v2、依据待检样品的须要更换合适的洗脱柱（留意方向）和定量环。v3、配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45m滤膜过滤。（留意：滤膜有水性与有机两种，选择合适的）v4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正。themegallery Company Logo themegallery Company Logo2.开机v检查仪器各部件。v打开仪器电源开关、泵和检测器开关。v泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最终打开色谱工作站 themegallery Company Logo3.平衡系统v检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以解除。v视察泵限制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步推断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。用检验方法规定的流淌相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流淌相。v视察基线变更。假如冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。themegallery Company Logo4.清洗管路及关机v1、分析完毕后，先关检测器，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如运用过含盐流淌相，则先用水（5%甲醇），然后用甲醇-水冲洗，各种冲洗剂一般冲洗1530分钟，最终用甲醇保留色谱柱，特殊状况应延长冲洗时间。v2、冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可运用进样阀所附专用冲洗接头。v3、关断电源，作好运用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流淌相、柱压，运用小时数，仪器完好状态等。themegallery Company LogoLOGO themegallery