分子相关复习题.docx
1 .循环核酸：是指血浆中存在的游离于细胞外的DNA和RNA,常用于分子生物标 志物的是循环肿瘤细胞DNA、胎儿DNA和血装RNAo.循环游离核酸：是存在于人体体液中的细胞外游离状态的核酸，包括循环DNA 和循环RNA,与生理和病理状态下的细胞代谢密切相关。循环DNA和RNA水平的 检测在产前诊断、恶性肿瘤早期诊断和病程监测等方面具有十分重要的意义。2 .PCR（聚合酶链式反响）：是模拟生物体内DNA的复制过程，在体外（试管内）通 过酶促反响合成特异DNA片段的方法。其基本过程由变性、退火和延伸3个步骤 构成。变性、退火和延伸构成PCR的一个循环，每一个循环完成后，一个分子 的模板双链DNA被复制为两个分子。每个循环所产生的DNA片段又成为下一个循 环的模板。每一次循环都使靶DNA的拷贝数扩增一倍,PCR产物以2n的指数形式 增长（n为循环次数）。3 .逆转录PCR:以细胞内总、RNA或mRNA为材料进行核酸扩增的技术。首先在逆 转录酶的作用下，将RNA进行逆转录反响生成cDNA,然后再以cDNA作为模板进 行PCR扩增，得到所需的目的基因片段。4 .第一代DNA测序技术：自Sanger的双脱氧链终止法创造以来，DNA测序方法 一直都在改进，但该基本方法都是后来众多测序技术的基石，这些技术统称为第 一代DNA测序技术。5 .血友病：是临床最为常见的由于凝血因子缺陷所致的凝血机制异常而引起的 遗传性出血性疾病。主要有A、B两种类型，遗传模式均为X连锁隐性遗传。6 .原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原那么 进行特异性结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下 进行细胞内基因定位或基因表达检测的技术。7 .抑癌基因：又称肿瘤抑制基因，为一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的 基因，正常情况下抑制细胞增殖、促进细胞分化。8 .实时荧光定量PCR:指在PCR反响体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实 时监测整个PCR反响进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 大题：1 .简述杂交探针标记方法的种类？放射性核素标记法:灵敏度高、特异性强，主要缺点是容易造成放射性污染， 而且放射性核素的半衰期较短,必须随用随标。非放射性核素标记法:非放射性核素标记法无放射性污染,探针标记后可保存 较长时间（2年以上），但灵敏度和特异性尚不如核素标记。生物素标记探针:生物素（biotin）是-种水溶性维生素，可与dUTP的C-5位 共价结合，用其标记的dUTP可代替dTTP掺入DNA探针。地高辛配基标记探针:地高辛配基（digoxigenin）可与dUTP共价结合,用其标 记的dUTP也可代替dTTP掺入DNA探针,可用与酶或荧光色素结合的抗地高辛配 基抗体直接检测，或间接使用免疫荧光法进行检测。辣根过氧化物酶标记探针:首先将辣根过氧化物酶与带正电荷的聚乙烯亚胺交 联结合,然后由这种带正电荷的复合物与带负电荷的单链或双链DNA结合，在戊 二:醛稀溶液作用下,HRP与DNA形成共价键，产生酶标记探针。2 .简述一下real time qPCR中TapMan水解探针法？根据荧光共振能量传递（FRET）原理，当完整探针因R基团与Q基团分别位于探 针的两端，距离很近而使R基团发射的荧光被Q基团淬灭，导致没有荧光发射。 在扩增过程中，TAqDNA聚合酶沿着模板移动合成新链，当移动到与模板互补的 探针处时，TAGDNA聚合酶同时还发挥其5, -3'核酸外切酶活性，从探针的5'端 逐个水解脱氧核甘三磷酸，R基团与Q基团随之别离，破坏了 R基团与Q基团 之间的FRET,因而，此时R基团不再受Q基团的抑制而发射出荧光，仪器的检 测系统便可检测得到荧光信号。R基团信号的强弱程度与PCR反响产物的拷贝数 成正比，.杂交的分类标准有哪三种？根据不同的分类标准，杂交的类型有哪些？根据杂交核酸分子的种类，可以分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA杂交,RNA 与RNA杂交根据杂交探针标记的不同，可以分为核杂交和非核杂交根据杂交 介质的不同，可以分为液相杂交、固相杂交和原位杂交：其中固相杂交又可以分 为菌落杂交、Southem印迹杂交、Northemn印迹杂交、点杂交和狭缝杂交。3 .阴性质控品失控的常见原因是什么？.失控的常见原因：阴性质控品失控，提示实验室污染，其原因可能为：扩增产 物污染；标本交叉污染；基因组DNA或质粒污染;试剂污染。一旦实验室发 生污染，必须停止实验，找到并去除污染源。污染可能发生在检测的各个阶段, 应以顶防为主。4 . PCR引物设计的原那么？长度为2030个核甘酸碱基随机分布，G+C的含量为4555%.防止发夹 结构的形成，引物的存在连续互补序列不超过3bp.引物之间不应存在互补序 列，防止3,端互补重叠 .引物的碱基序列与非扩增区域无同源性 .引物 3,端碱基一定与模板配对，最正确碱基选G和C；,引物5,端可以修饰，如加 酶切位点，突变位点，起始密码子，终止密码子等。5 .简述细菌感染性疾病的分子生物学检验中，其诊断策略有哪两种?各自定义？ 其诊断策略也可以分为以下两种:一般性检出策略，即只需要提供是否有某种 病原菌的感染;完整性检出策略，即不仅对病原菌感染作出诊断，还要进行病原 菌的分型（包括亚型）和耐药性方面的检测。6 .简述探针设计的基本原理？.探针要绝对保密；长度要适合（确保探针的Tm值要比引物的Tm值高出5-10）操作的5,端不能含有G探针的3,端必须进行封闭防止探针中多个重复碱基出现（G不能多于C）假设TaqMan探针应尽可能靠近上游引物防止探针与引物之间形成二聚体末端修饰
