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Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。基因工程名词解释-l 变性：在某些理化因素作用下，DNA分子互补碱基之间的氢键断裂，使DNA分子双螺旋结构松散，变成单链。l 复性：高温变性的DNA逐渐冷却后，分开的两条单链重新结合成双链DNAl 退火：热变性的DNA经缓慢的冷却后，复性的过程l PCR：聚合酶链反应，是模仿体内细胞DNA复制的过程的体外DNA快速扩增方法。以DNA互补链聚合反应为基础，通过DNA变性，引物与模板一侧的互补序列复性杂交，耐热DNA聚合酶催化引物延伸等过程的多次循环，获得待扩增的特异性DNA片段。l 模板：一条单链DNA片段，其3上具有与引物杂交的序列l 引物：与待扩增的靶DNA区段两端序列互补的人工合成的寡核苷酸片段,其3端必须具有游离的-OH基团。l 限制核酸内切酶：能专一性的识别双链DNA上的特殊核苷酸序列，并使每一条链的一个磷酸二酯键断开。l DNA连接酶：催化DNA链的相邻3-羟基和5-磷酸基团发生缩合反应，形成磷酸二酯键，分为ATP依赖型和NAD+依赖型。Klenow片段：是大肠杆菌DNA聚合酶I的羧基端片段，长度为全酶的70。具有5®3聚合酶活性及3®5外切酶活性。限制性图谱：DNA分子上的限制性内切核酸酶的识别序列的分布图同裂酶：即从不同的原核生物中分离出来，具有相同识别序列的限制性核酸内切酶。切割的位点可以相同，也可以不相同。同尾酶：来源不同，识别序列也不同，但切割DNA分子所得到的DNA片段具有相同的黏性末端，这样一组限制性核酸内切酶称为同尾酶。黏性末端：大多数断裂的结果形成的DNA片段,具有互补碱基的单链延伸末端.这种末端叫黏性末端。酶活性单位：某种限制性核酸内切酶在最适反应条件下,60min内完全切割1ugDNA所需要的酶活性定为1酶活性单位(unit或U)容积活性:1ul酶液中具有的酶活性单位,即U/ull 缺口：在双链DNA的某一条链上两个相邻核苷酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链断裂。l 裂口：在双链DNA的某一条链上失去一个或多个核苷酸所出现的单链断端。接头：是一种化学合成的寡核苷酸，含有一种以上的限制性内切核酸酶识别序列。连杆：一种按照预先设计，化学合成的寡核苷酸片段。一般由8-12个核苷酸组成，其上有一种或几种内切酶的识别位点。严谨型质粒：每种质粒在相应的宿主细胞内保持相对稳定的拷贝数，拷贝数少的质粒为严谨型松弛型质粒：拷贝数多（10个以上）的质粒称为松弛型质粒的不亲和性：不能共存在于同一个宿主细胞中的质粒，称为l 克隆载体：是一种能携带外源DNA片段进入受体细胞，并得以维持或表达的DNA分子。l 表达载体：是在克隆型载体的基础上增加了表达元件，并且在受体细胞中能稳定维持和表达外源目的基因l 穿梭载体：是能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。如有些载体既能在原核细胞中复制又能在真核细胞中复制。这类载体主要是质粒载体。-互补：冠瘿碱：在带有完整T-DNA的Ti质粒或Ri质粒的转化植物细胞中，都能检测到一类特殊的非蛋白态的氨基酸，这一类氨基酸总称为冠瘿碱T-DNA：能转移到植物细胞内的DNA片段双元中间克隆载体：T-DNA和中间质粒中都含有LIH序列中间质粒克隆载体：T-DNA的部分序列插入大肠杆菌质粒载体，构建的载体插入外源DNA后，先在辅助质粒的帮助下进入农杆菌，再在农杆菌的介导下进入植物细胞的基因载体。COS位点：在噬菌体线性双链DNA分子的两端，各有一条由12个核苷酸组成的彼此完全互补的5单链突出序列，即为COS位点。Ti质粒：存在于植物的土壤农杆菌中，诱发植物产生冠瘿瘤的质粒。SD序列：在mRNA起始密码子AUG上游10个碱基左右处，有一段富含嘌呤的碱基序列，能与细菌16SrRNA3端识别互补，帮助从起始AUG处开始翻译,称为SD序列重叠基因：在某些生物中，不同基因可共用同一段DNA的核苷酸序列，它们的核苷酸序列是彼此重叠的，这样的基因叫重叠基因l 基因组文库：某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌的群体之中，这个受体菌群体就是该种生物的基因组文库。l cDNA文库：某种生物基因组转录的部分或全部mRNA经反转录产生的各种cDNA片段分别与克隆载体重组，贮存在一种受体菌群体中，这个群体叫cDNA文库l RACE：cDNA末端的快速扩增，以cDNA的第一条链为模板，设计合成一组引物，通过PCR扩增技术获得多拷贝数双链cDNA套式PCR：用两对引物扩增同一样品的方法在两对引物中，一对引物与靶序列的退火结合位点处于另一对引物扩增的DNA序列内，前者称为内部引物，后者称为外侧引物锚定PCR：单侧或者单边PCR，是指通过添加锚定引物接头的方法来扩增合成位置序列或未全知的序列的方法逆转录PCR：RT-PCR，是将mRNA逆转录与PCR技术相偶联的一种基因分离技术反向PCR：根据已知DNA序列设计2个引物，扩增出这已知靶序列的两端未知DNA片段l 酵母双杂交系统：由诱饵蛋白、靶蛋白、带有一个或多个报告基因的宿主菌株组成，用于检测已知蛋白质之间的相互作用，蛋白质的功能域研究及未知蛋白编码基因的分离克隆。表面显示技术：是一种基因表达筛选技术。将目的基因克隆在特定的表达载体中，使其表达产物显示在活的噬菌体表面，然后根据表达产物的某些生物学活性的检测来筛选、富集和克隆带有目的基因的噬菌体。l 噬菌体显示技术:是一种基因筛选技术，他将目的基因克隆在特定的表达载体上，使其表达产物显示在活的噬菌体表面，根据表达产物的生物学活性的检测，来筛选、富集和克隆含有目的基因的噬菌体。表达序列标签（EST）：基因序列中一段能够特意的标记或表征基因的序列，它一般含有足够的结构信息来显示该基因与其他基因的区别，长度为100150bp。l 转座子标签法;转座子随机转入某一功能的基因内部，会导致该基因发生突变失活，而专离该基因时，可使它恢复活性。根据这种特性建立的分离基因的方法。定点诱变；体外特异性地改变目的DNA序列中某个碱基的技术。l 基因定位克隆；根据目的基因在基因组上的位置特性而不是其编码产物来进行基因克隆。l 染色体步查法:是一种利用已知的基因或分子标记来分离与其紧密连锁的未知基因的有效方法。感受态细胞（CompetentCell）；利用理化方法人工诱导细胞使之处于易于接受和容纳外源DNA分子的状态，这时的细胞称为感受态细胞.转化(transformation);重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞稳定维持和表达的过程。转染（transfection）;采用与质粒DNA转化受体细胞相类似的的方法，将重组噬菌体DNA分子直接导入受体细胞的过程。转导（transduction）;通过噬菌体颗粒感染宿主细胞为媒介，将外源DNA分子导入到受体细胞中并稳定遗传的过程。报告基因：载体携带的选择标记基因。核酸分子杂交;分子探针:具有同特异性目标分子产生很强的相互作用并可对作用产物进行有效检测的DNA分子、RNA分子和蛋白质分子。l 启动子；DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域，在许多情况下，还包括促进这一过程的调节蛋白的结合位点。Pribnow框；原核生物中，在起始密码子上游有一个由5-6个核苷酸组成的共有序列，以其发现者的名字命名为Pribnow框(Pribnowbox)，这个框的中央位于起点上游10bp处，所以又称10序列(10sequence)，是转录的解旋功能部位，一般较保守。转录单位；从转录起始位点到转录终止位点所对应的、作为RNA聚合酶模板的基因序列范围。可以是单一基因、也可以是多个基因。l 操纵子；转录的功能单位。很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列l 增强子:能够增强启动子转录活性的DNA顺式作用序列，决定基因时间和空间特异性表达。l 衰减子:在第一个结构基因与启动子之间的一个区域，包括前导序列、终止序列及之间的隔序列。转录衰减实质上是转录与一个前导肽翻译过程的偶连，是原核生物特有的基因调控机制。l 绝缘子:阻止临近的调控元件对其所界定基因的启动子起增强或抑制作用抑制增强子的功能具有极性。反义RNA;是指与mRNA互补的RNA分子，也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合,即抑制了该mRNA的翻译。共抑制;转录后基因沉默（posttranscriptionalgenesilencing，PTGS）现象。转录后基因沉默指转基因在细胞核里能稳定转录，但在细胞质里却无相应的稳定态mRNA存在。由于转基因编码区与受体细胞基因组间存在的同源性，导致转基因与内源基因的表达同时受到抑制基因沉默；基因没有正常表达的现象。主要表现在转基因植物和转基因动物中。融合蛋白;将外源蛋白基因与受体菌自身蛋白基因重组在一起，但不改变2个基因阅读框，以这种方式表达的蛋白叫融合蛋白包涵体;在一定条件下，外源基因的表达产物在大肠杆菌中积累并致密地聚集在一起形成无膜的裸露结构。信号肽；有些蛋白质在刚开始合成时，N端富含疏水性氨基酸的特异序列，介导新合成的肽链穿过质膜而被定向转运。l 亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。问答题:1.简述PCR反应的原理及步骤2.RNA制备过程中如何消除RNA酶的污染?3.用于检测核酸样品纯度和浓度有哪些方法？简述其基本原理4.DNA的双脱氧链终止测序法的基本原理?5.凝胶电泳的种类及应用？基因工程常用的工具酶的特点及应用?1.基因克隆载体的条件？2.pUC质粒载体的优点？3.大肠杆菌表达载体有哪些种类？特点如何？4.如何利用农杆菌Ti质粒构建植物克隆载体？5.构建噬菌体克隆载体的依据及策略？6.Cosmid载体的特点？7.大容量克隆载体的类型及其特点？1.基因文库的类型及其特点？2.构建噬菌体基因组文库的步骤3.cDNA文库的构建过程4.mRNA差别显示技术的原理和基本程序5.cDNARDA的基本原理6.抑制性加法杂交技术的原理7.简述PCR技术在DNA定点诱变方面的应用1.简述受体细胞选择的基本原则及几类受体细胞的特点。2.简述外源重组基因导入植物和动物受体细胞的主要方法。3.筛选植物转化细胞的常用报告基因有哪些及方法？4.核酸分子杂交分析的基本原理及核酸探针制备的主要方法？5.Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、斑点印迹杂交、菌落（噬菌斑）原位杂交的基本步骤和异同点?1.原核生物和真核生物启动子的特点?2.基因表达的调控机制包括哪些?3.基因表达的顺式调控元件有哪些？原核生物和真核生物有什么不同？4.增强子有哪些特征?5.本征终止子和依赖型终止子的特点?6.如何在大肠杆菌中高效表达外源目的基因？7.IPTG如何诱导Lac表达系统中的基因表达?8.外源基因在大肠杆菌中的表达形式有哪些?9.简述外源基因表达产物检测的主要方法？-