抗体保存指南！.docx

抗体保存指南！大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。本指南以abeam抗体保存方 法为主，同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品！请谨记！无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体！1 .收到抗体后请务必在12 000 rpm离心2030 s后再打开管盖进行 分装和保存！质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12 000 rpm离心20-30 s 才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在10 000 rpm离心 也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！2 .对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20度or 80度对绝大多数抗体来说，保存在-20度是完全足够了。没有任何证据显示 保存在-80度会有更多的好处！分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于 多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。因为分装体积 越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4度，避免再冻起抗体工作液应该当天配制当天用完，在4度尽量不要超过1天。绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而 不是门上。3 .大部分抗体收到后4度短暂保存12周对抗体活性是没有影响的。如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4度保存，这是为了避免反复冻 融对抗体活性的损害。如果要长期保存则最好是在-20度or-80度。最关键 的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品 请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4度保存会 导致抗体的降解！4 .大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要12周的时间，所以是 在4度的条件下来完成的。4度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用 干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。这就多了一次 冻融的过程）。所以运输过程中绝对避免干冰运输！特殊抗体的保存条件：1 .酶联抗体：永远保存在4度，避免冻起来。否则会导致酶活性的下降 或者丧失。2 .偶联抗体：所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其 是荧光抗体，对光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！3 . IgG3的同型对照：永远保存在4度，避免冻起来。因为如果出现冻 融过程，该抗体非常容易形成多聚体。无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！反复冻融会导致抗体变性，导 致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！抗体保存其它相关信息：关于加入甘油保存：有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘 油在-20度会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。但是abeam仅对非常小的一部分抗体检测 过其在这种条件下的稳定性；而abeam只对按照推荐条件保存的抗体提供质 量保证！加入甘油的溶液不建议在-80度保存，因为这已经超过了甘油的冰点。 如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！关于蛋白保护剂：蛋白在高浓度时更不容易降解(1 mg/ml或者更高)，这就是为什么在 抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了 ；另一方面，加入的蛋白也可以减 少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加 入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。关于叠氟化钠(sodium azide )的使用:为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中(终浓度0.02%(w/v) )。 Abeam的很多抗体已经含有了 0.02%-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer"中 有标明的。在下述情况中不能使用叠氮化钠：(1 )如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它 阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.(2)要偶联带有氨基基团的抗体：叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前,应将叠 氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01%o 对于需要偶联的抗体，thimerosal(merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护 剂！注：叠氮化钠的去除方式：可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除HgG的分子量是150kDa(IgM是 600 kDa);叠氮化钠的分子量只有65 Da。使用cut off 14 kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。