最新《DB地方标准》DBS61-0008-2022.pdf

DBS61陕 西 省 食 品 安 全 地 方 标 准DBS61/00082022食品安全地方标准植物提取物中苯并（a）芘的测定2022-07-14 发布2023-01-14 实施陕西省卫生健康委员会发 布DBS 61/000820221前 言本标准按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本标准代替DBS61/0008-2015 植物提取物中苯并（a）芘的测定 液相色谱-荧光检测法。本标准与DBS61/0008-2015相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全地方标准 植物提取物中苯并（a）芘的测定”；扩充了气相色谱-串联四级杆质谱法定性；修改了原标准的结构。请注意本文的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文的附录A、附录B均为资料性附录。本文由陕西省卫生健康委员会发布并归口。本文由中华人民共和国西安海关技术中心提出并起草。本文主要起草人：施妍婧，张璐，孔祥虹，何强，张亚莉，李莹，邹阳，李子豪，郝甜甜本次为第一次修订。DBS 61/000820222食品安全地方标准 植物提取物中苯并（a）芘的测定1 范围本标准规定了植物提取物中苯并（a）芘残留量的液相色谱定量测定及气相色谱-质谱/质谱的定性确证方法。本标准适用于食用植物提取物中苯并（a）芘残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3原理试样经正己烷提取，经硅胶固相萃取柱和聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化，液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量，阳性样品采用气相色谱-串联质谱仪定性确证。4试剂与材料警告：苯并（警告：苯并（a）芘是一种已知的强致癌物质，应注意危险品操作规则。）芘是一种已知的强致癌物质，应注意危险品操作规则。除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。4.1 试剂4.1.1正己烷（C6H14，CAS:92112-69-1）：色谱纯。4.1.2二氯甲烷（CH2CI2，CAS:75-09-2）：色谱纯。4.1.3乙腈（CH3CN,CAS:75-05-8）：色谱纯。4.2 溶液配制4.2.1 正己烷-二氯甲烷（3+1，体积比）：量取 300mL 正己烷与 100 mL 二氯甲烷混合均匀。4.2.2 乙腈-水（95+5，体积比）：量取 950 mL 乙腈与 50 mL 水混合均匀。4.3 标准品DBS 61/000820223苯并（a）芘标准物质：（Benzo(a)pyrene，C20H12，CAS:50-32-8）：纯度99%。4.3 标准溶液配制4.3.1 标准储备溶液（1 mg/mL）：准确称 10mg 苯并（a）芘标准品，精密称定，于 10mL容量瓶中，用乙腈溶解定容至刻度，摇匀，配制为 1mg/mL 的标准储备溶液，0 4 避光保存，可保存 12 个月。4.3.2标准中间溶液（1.0g/mL）：准确量取 1 mg/mL 苯并（a）芘标准储备液 0.025 mL，于 25 mL 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，0 4 避光保存，可保存 6 个月。4.3.4 标准曲线的制备分别准确吸取苯并（a）芘中间液（1.0g/mL）10L、20L、50L、100L、200L、500L于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，得到1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0 ng/mL的系列标准曲线溶液，现用现配。4.4 材料4.4.1 硅胶固相萃取柱：1 g/6 mL，或者相当。使用前依次用 5 mL 二氯甲烷、10 mL 正己烷活化，保持柱体湿润。4.4.2聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱：Bond Elut ENV 柱，500 mg/6 mL，或者相当。使用前依次用 5 mL 二氯甲烷、10 mL 正己烷活化，保持柱体湿润。5仪器与设备5.1液相色谱仪：配有荧光检测器。5.2气相色谱-串联质谱仪：配有电子轰击源（EI）。5.3 分析天平：感量 0.00001 g 和 0.01g。5.4旋转蒸发器。5.5 涡旋混匀器：转速 3000 r/min。5.6 超声波清洗器。5.7 离心机：转速 5000 r/min。5.8 固相萃取装置。5.9移液枪：100 L，1 mL，10 mL。5.10有机系滤膜：0.22 m。6试样制备与保存DBS 61/000820224取有代表性样品200 g，混合均匀，装入洁净容器中，密闭并标明标记，常温保存。7测定步骤7.1提取准确称取试样1g（精确至0.01 g）于离心管中，加入10 mL正己烷，涡旋混匀，超声提取30 min，4000 r/min离心5 min，取正己烷层溶液于100 mL梨形瓶中，用10mL正己烷重复提取2次，合并正己烷提取液，于40 减压浓缩至约5 mL，待净化。7.2净化硅胶固相萃取柱串接在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上方，取待净化液上样，用约5 mL正己烷洗涤梨形瓶，洗涤液合并上样，弃去流出液，再用15 mL正己烷淋洗固相萃取柱，待淋洗液全部通过固相萃取柱后，弃去流出液和硅胶固相萃取柱，用5 mL正己烷-二氯甲烷溶液（4.2.1）洗脱聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，整个净化过程保持流速23 mL/min，收集洗脱液，于40 减压浓缩至近干，准确加入1 mL乙腈溶解定容，过微孔（5.10）滤膜，待测定。7.3 测定7.3.1液相色谱条件a）色谱柱：多环芳烃专用液相色谱柱（250 mm4.6 mm，5 m），或相当者；b）流动相：乙腈-水（95+5，体积比）等度洗脱；c）柱温：35 C；d）激发波长：384 nm；发射波长：406 nm；e）流速：1.5 mL/min；f）进样量：10 L。7.3.2 液相色谱法定量根据样液中苯并（a）芘含量情况，选定与样液浓度相近的标准使用溶液，标准使用溶液和样液中苯并（a）芘的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如果样液中苯并（a）芘含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。以保留时间定性，外标法定量，在7.3.1给定的液相色谱条件下，苯并（a）芘标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1。7.4 气相色谱-质谱/质谱法定性取 7.2 中于 40 减压浓缩至近干的样品，准确加入 1 mL 正己烷溶解定容，供气相色谱-串联质谱仪定性确证。7.4.1 气相色谱-质谱/质谱参考条件a)色谱柱：DB-5ms弹性石英毛细管柱（30 m 0.25 mm，0.25 m），或相当者；DBS 61/000820225b)色谱柱温度：120 保持，0.5min，以20/min 的速度升温至250，保持8 min，再以10/min的速度升温至290，保持5 min；c)进样口温度：280；d)色谱-质谱接口温度：290；e)载气：氦气，纯度大于等于99.999%，流速1.0 mL/min；f)进样量：1.0 L；g)进样方式：不分流进样，1 min后打开分流阀；h)电离方式：EI；i)电离能量：70 eV；j)离子源温度：250；k)四极杆温度：150；l)碰撞气：氩气，纯度大于等于99.999%，压力1.5 mTorr（0.2 Pa）；m)测定方式：多重反应监测模式（MRM）；n)多重反应监测条件：谱检测条件参见表1；o)溶剂延迟：18 min。表表1 苯并芘测定的苯并芘测定的MRM条件条件化合物定量离子对m/z碰撞能量eV定性离子对m/z碰撞能量eV苯并（a）芘252.0/250.035252.0/224.0501）非商业性声明：7.4.1中所列参考质谱条件是在岛津TQ 8030质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家及型号的仪器。7.5 测定法根据样液中苯并（a）芘含量情况，选定与样液浓度相近的标准使用溶液，标准使用溶液和样液中苯并（a）芘的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如果样液中苯并（a）芘含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。以保留时间定性，液相色谱测定，外标法定量，气相色谱-质谱/质谱定性确证。7.6空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。8结果计算和表达8.1结果计算和表达试样中苯并（a）芘含量按式（1）计算DBS 61/000820226mAVcAXss（1）式中：X试样中苯并（a）芘的含量，单位为微克每千克（g/kg）；A样液中苯并（a）芘的色谱峰面积；sc标准工作液中苯并（a）芘的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；sA标准工作液中苯并（a）芘的色谱峰面积；m试样质量，单位为克（g）。计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 方法的灵敏度、准确度和精密度9.1 灵敏度本方法苯并（a）芘定量限为1.0 g/kg。9.2 准确度生姜、黄芪、甘草、海带、小白菊、枸杞植物提取物（粉状）中苯并（a）芘在1.05.0 g/kg添加浓度水平上的回收率在71.0118.0%之间，添加水平及回收率数据参见附录B中表B.1。9.3 精密度本方法批内相对标准偏差15%，批间相对标准偏差20%。DBS 61/000820227AA附录A（资料性附录）苯并（a）芘标准溶液的液相色谱图及气相色谱-质谱图6.698EU-0.200.000.200.400.600.801.001.201.40分钟0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.00图A.1 苯并（a）芘标准溶液的液相色谱图（2.0 ng/mL）图 A.2 苯并（a）芘的气相色谱-串联四级杆质谱选择离子流图图 A.3苯并（a）芘气相色谱-串联四级杆质谱-质谱图DBS 61/000820228BB附录B（资料性附录）方法的加标回收率和相对标准偏差不同植物提取物中苯并（a）芘残留加标回收率和相对标准偏差（RSD）见表B.1表 B.1 植物提取物中苯并（a）芘残留的添加回收率和相对标准偏差样品加标水平/（g/kg）回收率范围/%RSD/%生姜提取物1.082.0100.04.52.080.5107.05.65.076.492.86.1黄芪提取物1.071.0118.07.52.080.0103.05.15.085.0100.64.7甘草提取物1.074.0100.03.32.087.0296.51.35.085.2106.44.1小白菊提取物1.075.0107.03.72.082.0107.53.425.089.0110.23.7枸杞提取物1.073.0106.06.62.089.0105.53.75.097.8117.87.4海带提取物1.076.0110.09.12.079.5106.56.65.089.4102.83.6_