方法学选择与评价.ppt

第三章第三章 方法学方法学选择与与评价价第三章第三章 方法学方法学选择与与评价价第一第一节 实验方法的方法的评价与价与选择第二第二节 量量值溯源、溯源、误差及不确定度差及不确定度第三第三节 方法学的方法学的评价价第一第一节 实验方法的方法的评价与价与选择方法学方法学评价价(evaluation of methodology)是通是通过实验途径途径测定分析方法的技定分析方法的技术性能性能,并并评价其是否可接受，其目的在价其是否可接受，其目的在于明确于明确该方法是否具有足方法是否具有足够的方法性能的方法性能来来说明明检测系系统的可靠性及可以的可靠性及可以满足足临床需求。床需求。方法学方法学评价具体内容价具体内容第一第一节 实验方法的方法的评价与价与选择一、一、实验方法的分方法的分级二、参考物的分二、参考物的分级三、方法三、方法选择的原的原则四、方法四、方法选择与与评价基本步价基本步骤五、定量五、定量实验的方法学的方法学评价价六、定性六、定性实验的方法学的方法学评价价实验方法的分方法的分级1.1.决定性方法决定性方法(definitive method)定定义：是准确度最高、系：是准确度最高、系统误差最小、差最小、经过研究研究证明尚未明尚未发现其不准确度或其不准确度或不精密度的方法，其不精密度的方法，其测定定结果与果与“真真值”最最为接近。接近。用途用途：主要用于：主要用于评价参考方法和价参考方法和对一一级参考物定参考物定值，而不直接用于，而不直接用于鉴定常定常规方法。方法。2.2.参考方法参考方法(reference method)定定义：是准确度与精密度已：是准确度与精密度已经充分充分证实，干干扰因素少，系因素少，系统误差与重复差与重复测定的随定的随机机误差相比可以忽略不差相比可以忽略不计，有适当的灵，有适当的灵敏度、特异度及敏度、特异度及较宽的分析范的分析范围。用途用途：主要用于：主要用于鉴定常定常规方法。方法。3.3.常常规方法方法(routine method)定定义：指性能指：指性能指标符合符合临床需要，有足床需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的的精密度、准确度、特异性和适当的分析范分析范围，经济实用的用的临床常床常规检验方方法。法。用途用途：这类方法方法经有关学有关学术组织认可后可后可作可作为推荐方法。推荐方法。常常常常规规方法方法方法方法参考方法参考方法参考方法参考方法决定性决定性决定性决定性 方法方法方法方法准确度增加准确度增加应用范用范围增加增加 不同方法的关系不同方法的关系决定性方法决定性方法一级参考物一级参考物参考方法参考方法二级参考物二级参考物校准物校准物常规方法常规方法控制物控制物各各级实验方法和参考物的相互关系方法和参考物的相互关系 返返节目目录 二、参考物分二、参考物分级 参考物也称参考物也称标准品或准品或标准物准物质国国际标准化委准化委员会定会定义：它的一种或几种物理：它的一种或几种物理或化学成分已或化学成分已经充分确定，可用于校准充分确定，可用于校准仪器、器、评价价测定方法或定方法或给其他物其他物质定定值的物的物质“参考物参考物证书”的参考物称的参考物称为有有证参考物参考物（certified reference material,CRMcertified reference material,CRM）其定其定值由建立了溯源性的由建立了溯源性的测量程序确定量程序确定每个参考物都附有其置信水平的不确定度每个参考物都附有其置信水平的不确定度:标准准值总不确定度不确定度二、参考物分二、参考物分级 1.1.一一级参考物参考物(primary reference material)特点：特点：含量确定，含量确定，稳定均一，数定均一，数值由决定性方由决定性方法或由高度准确的若干方法确定法或由高度准确的若干方法确定用途：用途：可用于校正决定性方法，可用于校正决定性方法，评价及校正参考价及校正参考方法以及方法以及为“二二级参考物参考物”定定值，一，一级参考物均参考物均有有证书二、参考物分二、参考物分级 2.2.二二级参考物参考物特点：特点：纯溶液（水或有机溶溶液（水或有机溶剂）或某）或某特殊基特殊基质的的纯溶液。可由溶液。可由实验室自己室自己配制或配制或为商品，其物商品，其物质的量由参考方的量由参考方法定法定值或用一或用一级参考物比参考物比较而确定。而确定。用途：主要用于用途：主要用于 常常规方法的方法的标化化 为控制物定控制物定值。二、参考物分二、参考物分级 3.3.校准物校准物 特点：特点：冻干品或溶液，可以用一干品或溶液，可以用一级或或二二级参考物以参考方法定参考物以参考方法定值。用途：用途：用于用于对常常规方法和方法和仪器的校准。器的校准。二、参考物分二、参考物分级 4.4.控制物控制物(control material)即质控品控品特点特点：与：与检测过程相适程相适应，成分及基，成分及基质与与检测的的样本相同或相似，且均匀、本相同或相似，且均匀、稳定。定。用途用途：控制物用于常：控制物用于常规质量控制，采用控制量控制，采用控制物和物和样品同步品同步进行行测量，将量，将测试结果与控制果与控制物保物保证值相比相比较，以，以评价其准确度和价其准确度和检查实验室内是否存在系室内是否存在系统误差。差。返返节目目录 三、方法三、方法选择的原的原则 实用性：用性：备样本用量少、分析速度快、同本用量少、分析速度快、同时进行多行多项目和多目和多样本的分析；方法操作本的分析；方法操作简便、便、试剂种种类少、易于少、易于实现自自动化，安全可靠化，安全可靠 ，价格低廉价格低廉 。可靠性：可靠性：较高的精密度和准确度，高的精密度和准确度，较宽的的检测范范围。三、方法三、方法选择的原的原则可靠性：可靠性：精密度：精密度：变异系数（异系数（CV%CV%）一般）一般应小于小于5%5%准确度是指准确度是指测定定值与与“真真值”的符合程度，一般的符合程度，一般偏差系数（偏差系数（CBCB）应小于小于5%5%特异性是指只与待特异性是指只与待测物物质起化学反起化学反应，不与其他，不与其他结构构类似的化合物似的化合物发生反生反应检测能力用能力用检测限度或限度或“检出限出限”衡量衡量检出限通常是指能与适当的出限通常是指能与适当的“空白空白”读数相区数相区别的，的，检测系系统可以可以检出的待出的待测物的最小量物的最小量 返返节目目录 四、方法四、方法选择与与评价的基本步价的基本步骤 提提出出要要求求收收集集资料料确确定定候候选方方法法初初步步评价价原原理理资料料仪器器试剂试剂成成分分保保存存稳定定性性生生物物安安全全样本本要要求求准准 精精 特特异异 灵灵敏敏标准准化化操操作作规程程设备设施施服服务技技术支支持持 返返节目目录 五、定量五、定量实验的方法学的方法学评价价定量定量实验检测系系统可以可以给出具体数出具体数值的的实验结果果 定量定量实验的方法学的方法学评价包括价包括:线性范性范围、准确度、精密度、灵敏度、准确度、精密度、灵敏度、特异度和参考区特异度和参考区间等性能指等性能指标 六、定性六、定性实验的方法学的方法学评价价 定性定性实验结果：出阳性或阴性果：出阳性或阴性 是或非是或非定性定性检测性能性能评价：重复性研究价：重复性研究 方法学比方法学比较（一）（一）评价前的准价前的准备 实验室工作人室工作人员的培的培训 熟悉待熟悉待评价的价的试剂或系或系统 掌握掌握样本和本和试剂的的处理和存理和存储过程程 按厂商的要求按厂商的要求进行，注意基行，注意基质效效应 定性定性实验需需进行阴性和阳性行阴性和阳性质控物控物测定定（二）定性（二）定性实验重复性研究重复性研究 确立方法的确立方法的临界界值：同同样一份一份样本，在多次重复本，在多次重复实验中中各有各有50%50%的几率的几率获得阳性或阴性得阳性或阴性结果果时该分析物的分析物的浓度；度；在在临界界值基基础上准上准备出出20%20%的的浓度度的的样本；本；样本分本分别测定定2020次，次，记录阴性及阳性阴性及阳性结果数；果数；结果分析：果分析：?“临界界值”样本的阴性本的阴性结果和阳性果和阳性结果不是各占果不是各占50%50%?+20%+20%浓度的度的样本本产生阳性生阳性结果数果数95%95%，同，同时，-20%-20%浓度的度的样本本产生阴性生阴性结果数果数95%95%?阳性和阳性和/或阴性或阴性结果数果数95%95%对于被测物浓度在临界值20%浓度范围以外的样本，实验方法将给出稳定的结果。临界值浓度不准确、结果数据不充足、方法学剂量反应曲线在临界值处是非线性的 应另外准备不同浓度的实验样本，重新进行评价（三）定性（三）定性实验方法学比方法学比较对比的方法：另一种定性方法、比的方法：另一种定性方法、“金金标准准”方法、定量方法或方法、定量方法或临床床诊断。断。样本种本种类和数量和数量 ：最好使用常：最好使用常规患者的新患者的新鲜标本本 ，阴性阳性，阴性阳性标本分本分别5050例以上。例以上。实验过程程 ：10102020天内完成天内完成 性能指性能指标 ：敏感度、特异性、阳性：敏感度、特异性、阳性预测值和阴性和阴性预测值 表表3-2 3-2 已知样本临床诊断结果判断定性实验性能指标已知样本临床诊断结果判断定性实验性能指标实验方法实验方法比对方法（明确诊断）比对方法（明确诊断）阳性阳性阴性阴性总数总数阳性阳性A AB BA+BA+B阴性阴性C CD DC+DC+D总数总数A+CA+CB+DB+DN N（A+B+C+DA+B+C+D）已知已知样本本临床床诊断断结果判断定性果判断定性实验性能指性能指标 灵敏度灵敏度A/(AA/(AC)100%C)100%特异性特异性D/(BD/(BD)100%D)100%阳性阳性预测值A/(AA/(AB)100%B)100%阴性阴性预测值D/(CD/(CD)100%D)100%实验方法实验方法比对方法比对方法阳性阳性阴性阴性总数总数阳性阳性57572 25959阴性阴性4 439394343总数总数61614141102102实验方法与比方法与比对方法方法间比比较的的结果果计算算阳性符合率阳性符合率A/(AC)100%93.4%阴性符合率阴性符合率D/(BD)100%95.1%总符合率总符合率(AD)/N100%94.1%返回章目返回章目录第二第二节 量量值溯源溯源误差及不确定度差及不确定度一、量一、量值溯源的概念和意溯源的概念和意义 二、参考物的量二、参考物的量值溯源溯源 三、三、误差的分差的分类和表示和表示 四、四、测量不确定度量不确定度 一、量一、量值溯源的概念和意溯源的概念和意义溯源性：通溯源性：通过一条具有一条具有规定不确定度的不定不确定度的不间断的断的传递链，使，使测定定结果或果或标准准值能能够与与规定的参考定的参考标准，准，联系起来，使系起来，使测定定结果的果的准确性得到技准确性得到技术保保证和和验证。溯源性参考物检测系统标准化仪器试剂操作程序 标准品（准品（reference materialreference material）：）：充分均匀并具有一个或多个良好确定的特充分均匀并具有一个或多个良好确定的特性性值的材料或物的材料或物质，用来校准，用来校准仪器器设备、评估估测定方法或定方法或给其他物其他物质赋值。标准品分准品分级一一级标准品：准品：稳定、均一，由高度准确定、均一，由高度准确的若干方法定的若干方法定值，可用于校准决定性方，可用于校准决定性方法及法及为二二级标准品定准品定值。二二级标准品：用一准品：用一级标准品校准，参考准品校准，参考方法定方法定值。校准品：用二校准品：用二级标准品校准，准品校准，拟被用于被用于校准的常校准的常规方法定方法定值。用于。用于对常常规方法方法和和仪器的校准。器的校准。标准品分准品分级 返回返回节目目录 二、参考物的量二、参考物的量值溯源溯源溯源溯源链：用一个用一个测量程序量程序为某种物某种物质定定值，该物物质用做下一用做下一级测量程序的校准物量程序的校准物依此依此类推，形成一条不推，形成一条不间断的比断的比较链（一）参考物的量（一）参考物的量值溯源程序溯源程序1.1.溯源溯源链和校准和校准层次次 SISI单位溯源位溯源链：计量可追溯性量可追溯性链的理想的理想终点是点是国国际单位制位制(SI)(SI)其他参考物的溯源：其他参考物的溯源：对没有没有SISI单位的分析物，位的分析物，可溯源到可溯源到“国国际惯例例”表示的参考物表示的参考物质和参考和参考测定方法。定方法。（一）参考物的量（一）参考物的量值溯源程序溯源程序2.2.参考物量参考物量值的的传递方案方案 3.3.校准溯源的校准溯源的验证三要素三要素 由体外由体外诊断断试剂生生产厂家厂家测定的定的值应与用参考方法与用参考方法测定的数定的数值相同。相同。由体外由体外诊断断试剂生生产厂家用参考方法厂家用参考方法测定定结果在数学上相等的果在数学上相等的评估，即估，即线性回性回归方程斜率方程斜率为1 1、截距、截距为0 0。要求厂家参考物要求厂家参考物测定定结果有互通性。果有互通性。（一）参考物的量（一）参考物的量值溯源程序溯源程序4.4.校准品在溯源中的作用校准品在溯源中的作用校准品在溯源中的作用校准品在溯源中的作用 实现溯源的溯源的“桥梁梁”是最可取而可靠是最可取而可靠的的办法法 实现溯源性的目的溯源性的目的 结果的可靠果的可靠实现溯源性的溯源性的评估估 室室间质量量评价是最易价是最易实现的量的量值溯源溯源的的长期期评估方法估方法 （一）参考物的量（一）参考物的量值溯源程序溯源程序5 5.实现溯源性的目和溯源性的目和评估估 实现溯源性的目的：溯源性的目的：结果的可靠果的可靠 体外体外诊断断试剂厂家按照厂家按照ISO 17511ISO 17511的要求，的要求，对校准校准品的定品的定值实现计量溯源，量溯源，为用用户提供常提供常规测定方定方法的溯源文件法的溯源文件 实现溯源性的溯源性的评估估 室室间质量量评价是最易价是最易实现量量值溯源溯源长期期评估方法估方法 （二）参考物量（二）参考物量值溯源的意溯源的意义通通过溯源的参考物校准常溯源的参考物校准常规方法方法测定患者定患者样本本结果的准确性源溯参考方法果的准确性源溯参考方法参考物是参考物是处理理过的的样本与新本与新鲜患者患者样本的基本的基质有有差异差异参考方法的准确度不能完全通参考方法的准确度不能完全通过参考物参考物传递给患患者者样本本对参考物的量参考物的量值有一定的有一定的调整整 返回返回节目目录 三、三、误差的分差的分类与表示与表示误差差系系统误差差来源来源随机随机误差差来源来源 方法方法误差差 仪器器误差差 实验条件条件 操作操作习惯 试剂误差差 操作操作误差差 固定原因固定原因 可以校正可以校正无法控制无法控制无法校正无法校正误差是指差是指测量量结果与被果与被测量的真量的真值之差之差（一）系（一）系统误差差（systematic error，SE）1.1.定定义 是指在是指在对同一被同一被测量的多次量的多次测试中，它保持不中，它保持不变或或按某种按某种规律而律而变化。又称方法化。又称方法误差、固定差、固定误差。差。由恒定因素引起，多次重复出由恒定因素引起，多次重复出现，可被，可被认识并校正并校正2.2.来源来源方法方法误差：由差：由检测方法固有的缺陷所致方法固有的缺陷所致仪器器误差：未差：未经校准的校准的仪器所器所产生的生的误差差仪器波器波长漂移、量器不准、温度或漂移、量器不准、温度或pHpH不准等引起不准等引起试剂误差：差：试剂质量差、量差、实验水不合格、参考物不水不合格、参考物不纯操作操作误差：操作不差：操作不规范，保温范，保温时间不足、加不足、加样不准不准（二）随机（二）随机误差差（random error，RE）1.1.定定义 随机随机误差是指在差是指在对同一被同一被测量的多次量的多次测试中，它受偶然因素影响而以不可中，它受偶然因素影响而以不可预知的方式知的方式变化，化，又称偶然又称偶然误差。差。随机随机误差影响不定，无大小和方向，呈正差影响不定，无大小和方向，呈正态分布。分布。这种种误差无法控制，是无法校正的。差无法控制，是无法校正的。2.2.来源来源 随机随机误差反映分析方法的不精密度差反映分析方法的不精密度不可避免不可避免难以以预测的的测定定仪器、器、试剂、环境、人境、人严格按照格按照标准化的操作准化的操作规程可减少随机程可减少随机误差。差。（三）（三）误差的表示方法差的表示方法 绝对误差差：是指：是指检测值与真与真值或或约定真定真值之之间的差的差值。其。其单位与位与检测值相同，可用于相同，可用于评价价检测结果的准确程度。果的准确程度。相相对误差差：是指：是指检测值绝对误差与真差与真值或或约定真定真值之比，通常以百分数表示，它能客之比，通常以百分数表示，它能客观的表示出的表示出检测结果的准确程度。果的准确程度。总误差差：常常规样本本测定定结果与真果与真值的差异是的差异是随机随机误差和系差和系统误差的差的总和。和。返回返回节目目录 四、四、测量不确定度量不确定度 （一）定（一）定义表征合理地表征合理地赋予被予被测量之量之值的分散性，与的分散性，与测量量结果相果相联系系的参数。不确定度是指在的参数。不确定度是指在统计控制状控制状态下下赋予被予被测量之量之值的分散性。的分散性。不确定度不确定度按量按量纲分分类 按按赋予予不确定度不确定度大小的程度大小的程度 按按评定方法定方法 标准准不确定度不确定度 相相对不确定度不确定度 A A类标准准不确定度不确定度 B B类标准准不确定度不确定度 标准准不确定度不确定度 扩展展不确定度不确定度 合成合成标准准不确定度不确定度 （二）不确定度分（二）不确定度分类标准不确定度：是指以准不确定度：是指以标准差表示的准差表示的测量不确量不确定度。定度。相相对不确定度：是指不确定度：是指标准不确定度除以被准不确定度除以被测量量之之值。A A类标准不确定度：是指用准不确定度：是指用统计分析的方法来分析的方法来评定出的不确定度，其定出的不确定度，其评定方法定方法为A A类评定定B B类标准不确定度：是指用非准不确定度：是指用非统计分析的方法来分析的方法来评定出的不确定度，其定出的不确定度，其评定方法定方法为B B类评定定（二）不确定度分（二）不确定度分类扩展不确定度：是指确定展不确定度：是指确定测量量结果区果区间的量，的量，合理合理赋予被予被测量之量之值分布在指定概率内含于分布在指定概率内含于此区此区间。具有一定可信度的具有一定可信度的测量量值都都处于此区于此区间内，又称范内，又称范围不确定度或展伸不确定度。不确定度或展伸不确定度。合成合成标准不确定度：是指当准不确定度：是指当测量量结果是由若果是由若干个其他的干个其他的值求得求得时，按其他各量的方差和，按其他各量的方差和协方差算得的方差算得的标准不确定度。准不确定度。（三）不确定度（三）不确定度计算算 准确准确计算不确定度非常困算不确定度非常困难，一般，一般仅能能近似估算不确定度近似估算不确定度实验室的不确定度室的不确定度为合成不确定度，表合成不确定度，表示示为：返回章目返回章目录 测量不确定度与量不确定度与误差的主要区差的主要区别 区区 别不确定度不确定度误差差评定目的定目的表明被表明被测量量值的分散性的分散性表明表明测量量结果偏离真果偏离真值的程度的程度评定定结果果用用标准差或准差或标准差的倍数或置信区准差的倍数或置信区间的半的半宽表示，可以通表示，可以通过A A、B B类评定方定方法定量确定。法定量确定。误差差为有正号或有正号或负号的量号的量值，其，其值为测量量结果减去被果减去被测量的真量的真值，误差往差往往不能准确得到，只可得到其估往不能准确得到，只可得到其估计值。影响因素影响因素当当测量条件、方法、程序改量条件、方法、程序改变时测量量不确定度必定改不确定度必定改变而不而不论测量量结果如果如何，分析何，分析时，应充分考各种影响因素，充分考各种影响因素，并并对不确定度的不确定度的评定加以定加以验证。误差是客差是客观存在的，不受外界因素的存在的，不受外界因素的影响，不以人的影响，不以人的认识程度而改程度而改变，只，只要要测量量结果不果不变，误差不差不变。性性质区分区分测量不确定度分量量不确定度分量评定定时一般不必区一般不必区分其性分其性质，其分量本身无本，其分量本身无本质区区别，而只是按而只是按评定的方法可分定的方法可分为A A类和和B B类两两类。误差出差出现于于测量量结果中的果中的规律可分律可分为随机随机误差和系差和系统误差两差两类结果修正果修正不确定度本身不确定度本身隐含含为一种可估一种可估计的的值，它不是指具体确切的它不是指具体确切的误差差值，虽可估可估计，但却不能用以修正，但却不能用以修正测量量结果。果。系系统误差的估差的估计值如果已知如果已知则可以可以对测量量结果修正，一个量果修正，一个量值经过修正后，修正后，可能会更靠近真可能会更靠近真值第三第三节 方法学的方法学的评价价一、准确度的一、准确度的评价价二、精密度的二、精密度的评价价三、三、检测限的限的评价价四、可四、可报告范告范围五、参考区五、参考区间验证一、准确度的一、准确度的评价价（一）定（一）定义 准确度（准确度（accuracyaccuracy）是指是指测定定值与真与真值接近接近的程度的程度一般用偏差和偏差系数表示一般用偏差和偏差系数表示 准确性准确性评价方法有：回收价方法有：回收试验 干干扰试验 方法比方法比对试验 （二）回收（二）回收实验回收回收实验用于用于评估估实验方法正确方法正确测定在常定在常规样本中加入的本中加入的纯分析物分析物(质量、量、浓度、活性度、活性)的的能力。能力。结果用回收率表示果用回收率表示对实验方法的准确度方法的准确度进行行评价价 （二）回收（二）回收实验回收浓度样本最终测定浓度基础样本浓度回收浓度样本最终测定浓度基础样本浓度1.1.回收回收实验基本步基本步骤AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA加分析物加分析物 加水加水H H2 2O O制制备样本本 计算加入的待算加入的待测物物A A的的浓度度测定定样本中待本中待测物物A A的的浓度度 计算回收率算回收率 2.2.回收回收实验注意事注意事项使用常使用常规样品基品基质吸量准确吸量准确加入待加入待测物的物的浓度度标准液准液浓度度重复重复测定定计算比例系算比例系统误差：差：比例系比例系统误差差 =100%-=100%-平均回收率平均回收率（三）干（三）干扰试验干干扰物物质可以是可以是测量量误差的重要来源差的重要来源干干扰物物质引起的引起的误差是恒定系差是恒定系统误差，与分析物差，与分析物的的浓度无关度无关常常见干干扰物物质有：有：病理条件下的代病理条件下的代谢物：糖尿病物：糖尿病患者本身原因：患者本身原因：饮酒、酒、药物、物、饮食等食等样本中因素：溶血、脂血、黄疸等本中因素：溶血、脂血、黄疸等样本本处理中因素：抗凝理中因素：抗凝剂、添加、添加剂等等（三）干（三）干扰试验1.1.原理原理 将阳性干将阳性干扰物加入物加入临床床标本的混合液本的混合液(干干扰测定定样本本)中，与不加干中，与不加干扰物的同一混物的同一混合液合液(干干扰对照照样本本)组比比较有无偏倚，称有无偏倚，称为“配配对差异差异”试验混合液的干混合液的干扰物物浓度度应具有具有临床决定性水平床决定性水平一般最有效的方法是在一般最有效的方法是在较高高浓度下度下对系列可系列可能的干能的干扰物做初步物做初步筛选2.2.干干扰实验基本步基本步骤制制备样本本 计算加入的待算加入的待测物物A A的的浓度度测定定样本中待本中待测物物A A的的浓度度 计算干算干扰值AAAAAAAAAAAAAA加干扰物加水BH2O3.3.干干扰实验注意事注意事项试验标本：常本：常选择患者患者标本本吸量精确吸量精确加入干加入干扰物的物的浓度、体度、体积：要：要达病理达病理标本的本的最高最高浓度度值，体，体积尽可能小尽可能小干干扰物的物的选择：根据反根据反应原理、厂家建原理、厂家建议和和文献提示文献提示 测定次数定次数（四）方法比（四）方法比对试验 方法比方法比对试验是指把是指把试验方法方法(待待评价或待价或待验证的方法的方法)与比与比对方法方法(参考方法或准确参考方法或准确度已知的方法度已知的方法)进行比行比较，从，从测定定结果果间的的差异了解待差异了解待评价方法的价方法的检测结果的偏倚。果的偏倚。如果如果这些些误差小于差小于总误差，方法是可接受差，方法是可接受如果如果误差太大，差太大，则必必须拒拒绝该方法，或需方法，或需要要识别和消除其和消除其误差来源。差来源。（四）方法比（四）方法比对试验 1.1.基本方法基本方法 用用试验方法和比方法和比对方法同方法同时测定一定一组患患者的新者的新鲜标本，分析两个本，分析两个检测系系统测定定结果的差异，得到恒定或比例系果的差异，得到恒定或比例系统误差差的数据。的数据。2.2.比比对实验要求要求新新鲜患者患者标本本最少在最少在5 5个工作日个工作日对最少最少4040份份覆盖从低覆盖从低值、参考区、参考区间到高到高值基于随机的、系基于随机的、系统的和的和总误差的大小差的大小判断方法的可接受性。判断方法的可接受性。3.3.方法学比方法学比较实验 实验方法：用做比方法：用做比对的方法的方法(新方法新方法)比比较方法：与之比方法：与之比对的方法的方法(原来方法原来方法)室内比室内比对：比：比对在在实验室内部之室内部之间进行行的方法学比的方法学比对实验室室间比比对：在不同：在不同实验室之室之间进行的方行的方法学比法学比对实验4.4.比比对实验步步骤样本数：本数：8 8个个临床患者床患者样本，本，编号。用号。用两种方法同两种方法同时进行行实验 ，正序倒序，正序倒序测定定 1 1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、7 7、8 8 8 8、7 7、6 6、5 5、4 4、3 3、2 2、1 1重复重复5 5天，必天，必须进行校准和室内行校准和室内质控。控。数据数据处理及理及结果果报告。告。5.5.方法比方法比对试验要点要点 样本要求：本要求：应选择常常规检测的新的新鲜标本作本作为试验标本本比比对方法：用两种方法同方法：用两种方法同时测定一批定一批标本，本，计算出两种算出两种检测方法方法间测定定结果的差异，以此来果的差异，以此来估估计试验方法在方法在测定定标本本时可能引入的可能引入的误差原差原则上，比上，比较方法方法应具有好的精密度，无已知的具有好的精密度，无已知的干干扰物，分析范物，分析范围至少与至少与实验方法相同。方法相同。标本本测定：不同定：不同检测系系统开始开始检测的的时间应相相近，且都近，且都应在在2 2个小个小时内内检测完完毕。6.6.方法比方法比对试验结果果评价价作作图分析：作分析：作图法是方法学比法是方法学比较最基最基本的分析技本的分析技术，可以直，可以直观地初步判断地初步判断数据的分布特点。可数据的分布特点。可绘制散点制散点图和偏和偏差差图 离群点的离群点的检查 标本内分析物含量的本内分析物含量的统计分析分析检验 线性回性回归统计 临床可接受性能判断床可接受性能判断 7.7.方法比方法比对试验简易方法易方法参照参照CLIS EP15-A2CLIS EP15-A2文件文件用用户对精密精密度和准确度性能的核度和准确度性能的核实试验批准指批准指南南（第（第2 2版）版）进行准确度行准确度评价。价。通通过对定定值参考物参考物检测，对检测系系统的准确度性能的准确度性能进行行评价。价。8.8.简易易评价程序价程序选择定定值参考物，至少要求参考物，至少要求测定定2 2个水平，个水平，用用实验方法重复方法重复测定定2 2次，将次，将检测结果与果与说明明书标示示值或靶或靶值进行比行比对。计算偏倚，以算偏倚，以CLIACLIA8888的的1/21/2作作为评价价标准，准，偏倚小于偏倚小于CLIACLIA8888的的1/21/2，认为新新检测系系统的偏倚的偏倚临床可接受水平，新床可接受水平，新检测系系统或新方或新方法可法可应用于用于临床。床。返回返回节目目录 二、精密度的二、精密度的评价价 精密度（精密度（precisionprecision）是指）是指测量程序在量程序在相同条件下，相同条件下，对同一同一样本本进行行连续多次多次测量所得量所得结果之果之间的一致性，是表示的一致性，是表示测定定结果中随机果中随机误差大小程度的指差大小程度的指标。精。精密度常用密度常用标准差或准差或变异系数来描述不精异系数来描述不精密度，从而度量精密度大小。密度，从而度量精密度大小。（一）精密度（一）精密度检测基本方法基本方法批内重复性批内重复性试验 日内重复性日内重复性试验 日日间重复性重复性试验 总的不精密度的不精密度（二）注意事（二）注意事项试验标本的本的选择 （1 1）标准液准液简便易得，可制成不同便易得，可制成不同浓度，度，干干扰因素少，可作因素少，可作为评价随机价随机误差的最差的最佳佳样品。品。（2 2）冻干干质控血清控血清稳定、使用方便，适定、使用方便，适用于用于进行日行日间重复性重复性试验。（3 3）患者）患者标本或混合血清常用于短本或混合血清常用于短时间内完成的内完成的试验。（二）注意事（二）注意事项分析物分析物浓度的度的选择 在医学上具有决定在医学上具有决定性意性意义的的浓度水平度水平试验样本数量本数量 在在试验周期内至少做周期内至少做2020个个样本的本的检测试验条件条件 要尽量在相同的条件下要尽量在相同的条件下 返回返回节目目录 三、三、检测限的限的评价价 检测限限是指是指检测系系统可可检测出的最低分出的最低分析物析物浓度，又称度，又称为分析灵敏度分析灵敏度试验样品：空白品：空白样品品 检测限限样品品测定次数：无具体定次数：无具体规定，通常定，通常测定定10102020次。次。试验时间：一般做：一般做1010天天检测。结果果计算算 检测低限低限生物生物检测限：生物限：生物检测限更真限更真实地反地反映映实际检测限限浓度水平度水平样本本测定的不定的不确定度。确定度。功能灵敏度：功能灵敏度反映了方法功能灵敏度：功能灵敏度反映了方法能可靠能可靠测定的最低定的最低浓度。度。三、三、检测限的限的评价价 返回返回节目目录 四、可四、可报告范告范围 （一）可（一）可报告范告范围 指指检测方法可以方法可以报告的所有告的所有结果范果范围，包，包扩分析分析测量范量范围和和临床可床可报告范告范围。1.1.分析分析测量范量范围 指患者指患者样本没有本没有进行任何行任何预处理（稀理（稀释或或浓缩等），等），检测方法能方法能够直接直接测定出的待定出的待测物的范物的范围 2.2.临床可床可报告范告范围 是指是指对临床床诊断、治断、治疗有意有意义的待的待测物物浓度范度范围。（二）（二）线性性试验线性性试验是指用是指用试验方法方法对一系列一系列浓度度样本本进行分析，行分析，对检测结果果进行直行直线回回归，评价价该分析方法能准确分析方法能准确报告告的最低的最低浓度、最高度、最高浓度或能度或能检测到的到的范范围。1.1.线性性试验基本步基本步骤试验样本本 （1 1）混合患者血清）混合患者血清（2 2）在混合患者血清中加入一定量的待）在混合患者血清中加入一定量的待测物物（3 3）经过特殊特殊处理的混合人血清理的混合人血清（4 4）标准品、商品化准品、商品化质控物或能力控物或能力验证材料材料1.1.线性性试验基本步基本步骤样本数量：一般采用本数量：一般采用浓度从低到高的度从低到高的5 56 6份份样品。品。样本本测定：全部定：全部试验在同一工作日内完成在同一工作日内完成样本本浓度范度范围：应覆盖待覆盖待评线性范性范围的上、下限。的上、下限。评价价结果不果不满意意时应重新重新设定定浓度。度。线性范性范围内至少内至少应保留有保留有4 4个个浓度。度。2.2.线性性实验统计学学处理理离群点离群点检查：观察察结果有无明果有无明显的数据的数据错误，若有明，若有明显异常异常时，应判断是否判断是否为离群点，如离群点超出离群点，如离群点超出2 2点，点，则保留全部保留全部数据或重做全部数据或重做全部实验。以分析物以分析物浓度度(已知已知)为Y Y轴，测定均定均值为X X轴，绘制制X-YX-Y线性性图，目，目测分析分析测量范量范围。2.2.线性性实验统计学学处理理若所有若所有实验点在坐点在坐标纸上呈明上呈明显直直线趋势用直用直线回回归统计方法方法对数据数据进行行处理，理，得直得直线回回归方程方程Y=bX+aY=bX+a理想状理想状态下，下，预期期值和和实测值间呈通呈通过原点、斜率原点、斜率为1 1的回的回归线，即，即b b为l l，a a为0 0离群点离群点检查用于特定用于特定浓度度Y Y值离群点的离群点的检验。将将4 4个重复个重复值从大到小排列（从大到小排列（Y1Y1到到Y4Y4）。）。计算：算：D=Y1-Y4D=Y1-Y4若若Y1Y1可能是离群点，可能是离群点，计算：算：D1=D1=（Y1-Y2Y1-Y2）/D/D若若Y4Y4可能是离群点，可能是离群点，计算：算：D4=D4=（Y3-Y4Y3-Y4）/D/D返回章目返回章目录五、参考区五、参考区间的的验证参考区参考区间的的验证通常通常检测至少至少2020例健康自愿者例健康自愿者无已知疾病、能无已知疾病、能够走走动、无任何用、无任何用药、体重在健、体重在健康范康范围的的标本本选择合适的合适的统计方法确定方法确定95%95%的参考范的参考范围，若在，若在推荐的参考范推荐的参考范围内，或内，或仅有有5%5%的数据超出推荐的的数据超出推荐的参考范参考范围本章小本章小结临床床实验室室方方法法的的选择与与评价价，直直接接影影响响检验结果的果的质量量实验方法分方法分为决定性方法、参考方法和常决定性方法、参考方法和常规方法方法参参考考物物质分分为一一级参参考考物物、二二级参参考考物物、校校准准物物和和质控物控物常常规方方法法应有有完完整整的的分分析析体体系系（仪器器、试剂、校校准物）准物）其其校校准准物物的的值能能通通过一一条条不不间断断的的链，溯溯源源到到国国际或国家或国家标准准规定的量定的量值上上方方法法学学评价价或或验证实际上上是是对误差差的的评估估，即即系系统误差和随机差和随机误差差 测量不确定度表明量不确定度表明赋予被予被测量之量之值的分散性的分散性误差差则是表明是表明测量量结果偏离真果偏离真值的差的差值临床床实验室室选择方方法法时考考虑方方法法的的准准确确度度、精精密密度度、线性性范范围、干干扰因因素素、分分析析测量量范范围和和参参考考区区间等等本章小本章小结 返回章目返回章目录 谢谢返回返回总目目录