大肠菌群检验原始记录-平板计数法-2016版-5样.doc

大肠菌群检验原始记录（平板计数法）检验单位检验员检验日期至环境条件温度 ，相对湿度 %检验依据GB4789.3-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数第二法样品名称产品批号仪器设备及耗材：电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、PH计、移液器培养基及试剂：结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）： ml 配制日期： 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）： ml 配制日期： 无菌生理盐水： ml 配制日期： 实验过程：1.样品处理和稀释：1.1 如需要，使用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸将样品调整pH在6.57.5之间。1.2 制备样品稀释液根据样品状态，无菌操作，称取/无菌吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌生理盐水中充分混匀，制成 1:10 样品匀液。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），在振荡器上振荡混匀，制成1：100的样品匀液。按上面步骤操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。2.接种VRBA选择适宜的23个连续稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液），吸取1mL于无菌平皿内，每个稀释度接种两个平皿。同时分别吸取1 mL 生理盐水加入两个无菌平皿内作为空白对照。及时将1520mL融化并恒温至46的VRBA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，待琼脂凝固后，再加34mL VRBA覆盖平板表层。同时再以只加 VRBA 的平皿，作为 VRBA 的空白对照。将平板翻转，培养。3.培养将以上 VRBA 平板倒置于36.0±1，培养18h24h（ / / 时 / / 时）并分别计数可疑和典型菌落。4.平板菌落数选择选取菌落数在15150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环。5.证实试验(接种BGLB)从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36±1培养24h48h，（ / / 时 / / 时）观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。6.结果与报告6.1每g（ml）样品中大肠菌群数：证实为大肠菌群阳性的试管÷接种总管数×平板菌落数×稀释倍数按“四舍五入”原则修约，保留 2 位有效数字，无菌落生长以1 乘以最低稀释倍数报告。6.2 称重取样以 CFU/g 为单位报告,体积取样以 CFU/mL 为单位报告。样品1稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFU/mL¨ CFU/g¨VRBA疑似大肠菌群菌落数接种BGLB管数BGLB阳性管数样品2稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFU/mL¨ CFU/g¨VRBA疑似大肠菌群菌落数接种BGLB管数BGLB阳性管数样品3稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFU/mL¨ CFU/g¨VRBA疑似大肠菌群菌落数接种BGLB管数BGLB阳性管数样品4稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFU/mL¨ CFU/g¨VRBA疑似大肠菌群菌落数接种BGLB管数BGLB阳性管数样品5稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFU/mL¨ CFU/g¨VRBA疑似大肠菌群菌落数接种BGLB管数BGLB阳性管数空白VRBA空白（仅VRBA）生理盐水+VRBABGLB空白（仅BGLB）报告人报告日期复核人复核日期