发酵工程3.pptx
发酵工程(3)6.5 发酵工程的下游技术从发酵液中分离、纯化目的产物的过程称从发酵液中分离、纯化目的产物的过程称为下游加工工程（为下游加工工程（downstream processing）。这一过程由一些化学工程）。这一过程由一些化学工程单元组成。单元组成。这一过程在整个生产中所占成本较高，传这一过程在整个生产中所占成本较高，传统发酵工厂中占总投资的统发酵工厂中占总投资的60%；重组蛋白；重组蛋白生产企业这部分费用占生产费用的生产企业这部分费用占生产费用的80%90%。6.5.1 发酵工程下游技术概论1.1.特点：特点：产物在初始料中含量较低产物在初始料中含量较低,而产品要求纯度高、而产品要求纯度高、无菌、无热原无菌、无热原；含有大量细胞及代谢产物含有大量细胞及代谢产物；产物稳定性差，易失活变性；产物稳定性差，易失活变性；产物的种类繁多、结构不一、活性各异；产物的种类繁多、结构不一、活性各异；代价昂贵代价昂贵,回收率低。回收率低。几种产品在发酵液中的浓度 产品 典型浓度（g/L）抗生素 25 氨基酸 100 酒精 100 有机酸 100 酶 20 蛋白质 106.5.1 6.5.1 发酵工程下游技术概论发酵工程下游技术概论 2.2.2.2.建立分离纯化工艺的根据建立分离纯化工艺的根据建立分离纯化工艺的根据建立分离纯化工艺的根据 发酵产物其上游过程的各种因素对分离、纯发酵产物其上游过程的各种因素对分离、纯发酵产物其上游过程的各种因素对分离、纯发酵产物其上游过程的各种因素对分离、纯化工艺有影响。包括：化工艺有影响。包括：化工艺有影响。包括：化工艺有影响。包括：菌种的类型及其代谢特性。菌种的类型及其代谢特性。菌种的类型及其代谢特性。菌种的类型及其代谢特性。原材料培养基的来源及其质量。原材料培养基的来源及其质量。原材料培养基的来源及其质量。原材料培养基的来源及其质量。物料中杂质的种类和性质。物料中杂质的种类和性质。物料中杂质的种类和性质。物料中杂质的种类和性质。生产工艺及条件。生产工艺及条件。生产工艺及条件。生产工艺及条件。目的产物特性。目的产物特性。目的产物特性。目的产物特性。产品质量的要求产品质量的要求产品质量的要求产品质量的要求3.一般程序(1).预处理和固液分离：加速固液相分离(2).细胞破碎分离胞内产物(3).初步纯化（提取）：除去与目的产物性 质差异很大的杂质(4).高度纯化（精致）：除去与产物性质相 似的杂质(5).产品加工生物产品分离纯化的一般步骤生物产品分离纯化的一般步骤发酵液或培养液发酵液或培养液细胞产物细胞产物胞外产物胞外产物胞内产物胞内产物离心或过滤细胞离心或过滤细胞（洗涤）（洗涤）离心或过滤离心或过滤（洗涤（洗涤)离心或过滤离心或过滤（洗涤）（洗涤）细胞破碎细胞破碎（化学法机（化学法机械法等）械法等）整体细整体细胞萃取胞萃取离心、过滤离心、过滤干燥干燥分离剂回收、再生分离剂回收、再生提取、分离提取、分离沉淀、吸附、萃取、过滤等沉淀、吸附、萃取、过滤等分离剂回收、再生分离剂回收、再生纯化、精制纯化、精制层析、结晶、电泳等层析、结晶、电泳等干燥干燥废物废物产物产物产物产物滤液滤液循环循环副产物副产物废物废物滤渣滤渣副产物副产物循环循环废物废物细胞细胞滤渣滤渣副产物副产物废物废物细胞细胞含产物的清液含产物的清液预处理阶段4.4.分离纯化的技术分离纯化的技术分离纯化的技术分离纯化的技术技术条件温和能保持产物生物活性。技术条件温和能保持产物生物活性。技术条件温和能保持产物生物活性。技术条件温和能保持产物生物活性。选择性好，能从复杂的混合物中有效的将目的产物分选择性好，能从复杂的混合物中有效的将目的产物分选择性好，能从复杂的混合物中有效的将目的产物分选择性好，能从复杂的混合物中有效的将目的产物分离，达到较高的纯化倍数。离，达到较高的纯化倍数。离，达到较高的纯化倍数。离，达到较高的纯化倍数。收率要高。收率要高。收率要高。收率要高。两个技数间能直接衔接两个技数间能直接衔接两个技数间能直接衔接两个技数间能直接衔接,不需要对物料加以处理。不需要对物料加以处理。不需要对物料加以处理。不需要对物料加以处理。纯化过程要快，满足高纯化过程要快，满足高纯化过程要快，满足高纯化过程要快，满足高 生产率的要求。生产率的要求。生产率的要求。生产率的要求。6.5.2 发酵液的预处理和固液分离方法发酵液的预处理和固液分离方法 1.发酵液的预处理发酵液的预处理 细细菌菌及及某某些些放放线线菌菌菌菌体体细细小小，发发酵酵液液粘粘度度大大，不不能能直直接接过过滤滤.由于菌菌体体自自溶溶，核核酸酸、蛋蛋白白质质及及其其它它有有机机粘粘性性物物质质的存在会造成滤滤液液浑浑浊浊，滤滤速速极极慢慢。在预处理中应采用絮絮凝凝或或凝凝聚聚的的方方法法，设法增大悬浮液中固固体体粒粒子子的大小，提高其沉降速度，或采用稀稀释释、加加热等方法降低粘度热等方法降低粘度，以利于过滤。分离菌体和其它悬浮颗粒 去除部分可溶性杂质 改变滤液的性质 发酵液中杂质很多，其中对提炼影响最大的是高高价无机离子（价无机离子（Ca、Mg十十、Fe）和杂蛋白质杂蛋白质等。高高价价无无机机离离子子的的存存在在，会影影响响树树脂脂对生化物质的交换容量交换容量。杂杂蛋蛋白白质质的的存存在在，不仅在采用离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时会降降低低其其吸吸附附能能力力，而且在采用有机溶剂或两两水水相相萃萃取取时，容易易产产生生乳乳化化，使两两相相分分离不清离不清，在预处理时，应尽量除去这些物质。1)高价无机离子的去除方法高价无机离子的去除方法 为去除钙离子，宜加入草酸的可溶性盐，如草酸钠。反应生成的草草酸酸钙钙还能促使蛋白质凝固，提高滤液（也称为原液）质量。要除去镁离子，可以加入三三聚聚磷磷酸酸钠钠，它和镁离子形成可溶性络合物可溶性络合物：Na5P3O10MgMg Na Na3P3O102Na十十 用磷酸盐处理磷酸盐处理，也能大大降低钙离子和镁离子的浓度。要除去铁离子铁离子，可加入黄血盐加入黄血盐，使形成普鲁士蓝普鲁士蓝沉淀沉淀。2)杂蛋白质的去除方法杂蛋白质的去除方法 蛋白质一般以胶体状态胶体状态存在于发酵液中。(1)调pH值 蛋白质在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等等电电点点。因为羧羧基基的的电电离离度度比比氨氨基基大大，故蛋白质的酸酸性性性质通常强强于于碱碱性性，因而很多蛋白质的等等电电点点都在酸性范围内（pH 4.05.5）。但单靠调节pH至等电点的办法不能将大部分蛋白质除去。在酸性溶液中在酸性溶液中，蛋白质能与一些阴离子如三氯乙阴离子如三氯乙酸盐酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐酸盐等形成沉淀沉淀；在碱性溶液中在碱性溶液中，能与一些阳离子，如Ag十，十，Cu，Zn十十，十十，Fe和和Pb等形成沉淀沉淀。(2)加热处理:变性蛋白质溶溶解解度度较较小小。最常用的使蛋白质变性的方法是加加热热。加热还能使液体粘粘度度降降低低，加快过滤速度。该法只适用于对热较稳定的生化物质对热较稳定的生化物质。（3）加入使蛋白变形的有机溶剂）加入使蛋白变形的有机溶剂 加加酒酒精精、丙丙酮酮等等有有机机溶溶剂剂或或表表面面活活性性剂剂等等使使蛋蛋白白质质凝凝固固。加加有有机机溶溶剂剂使使蛋蛋白白质质变变性性的方法通常只适用于所处理的液体数量较少液体数量较少的场合。（4）利用吸附作用除去蛋白 四环类抗生素生产中，采用黄血盐和硫酸锌黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾亚铁氰化锌钾K2Zn3Fe（CN）52的胶状沉淀胶状沉淀来吸附蛋白质吸附蛋白质。在枯草杆菌发酵液中，常加入氯氯化化钙钙和和磷磷酸酸氢氢二二钠钠，这两者本身生成庞庞大大的的凝凝胶胶，把蛋白质、菌体及其它不溶性粒子吸吸附附并并包包裹裹在其中而除去，从而加快了过滤速度。（5）加入絮凝剂，使可溶性蛋白质胶体凝聚或絮凝）加入絮凝剂，使可溶性蛋白质胶体凝聚或絮凝 凝聚和絮凝技术凝聚和絮凝技术能有效地改变细胞、菌体和蛋白细胞、菌体和蛋白质质等胶体粒子胶体粒子的分散状态，使聚集起来，以便于过滤，常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理中。凝聚是在中性盐作用下，由于双电层排斥电位的降 低，而 使 胶 体 体 系 不 稳 定 的 现 象。常 用 Al2（SO4）318H2O（明明 矾矾）；AlC136H2O；FeC13；ZnSO4；MgCO3等等 絮凝是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。目前最常见的高分子聚合物絮凝剂是聚丙烯酰胺类衍生物。聚丙烯酰胺类衍生物。3）去除色素及其它物质(1).色素产生 微生物生长代谢产生，培养基带来(2)去除方法 离子交换剂、离子交换纤维、活性炭等吸附 如DEAE-纤维素从含酶溶剂中吸附色素物质时，可同时去除非活性蛋白质序号序号方法方法原原 理理设设 备备1絮凝利用电荷中和及大分子桥联作用形成更大的粒子2离心离心在离心产生的策略场作用下，加快颗粒的沉降速度高速冷冻离心机蝶片式离心机管式离心机倾析式离心机筐式离心机3过滤过滤依据过滤介质的空隙大小进行分离板框过滤机平板过滤器真空旋转过滤机管式过滤器蜂窝式过滤器深层过滤器4膜分离依据被分离的分子大小和膜孔大小进行分离平板、卷曲、中空纤维、管式微孔过滤器平板、卷曲、中空纤维，管式超滤器平板渗透器半透膜型、离子半透膜型电渗析器2.发酵液的过滤和离心发酵液的过滤和离心 微生物发酵液中含有大大量量菌菌体体、细细胞胞或或细细胞胞碎碎片片以及残残余余的的固固体体培培养养基基成成分分。过过滤滤就是将悬浮在发酵液中的固体颗粒与液体进行分离固体颗粒与液体进行分离的过程。(1)影响过滤速度的因素影响过滤速度的因素 过滤速度和菌种、发酵条件（培养基的组成，未过滤速度和菌种、发酵条件（培养基的组成，未用完培养基的数量，消沫油，发酵周期）等有关。用完培养基的数量，消沫油，发酵周期）等有关。菌种对过滤速度影响很大。一般，真菌真菌的菌丝比较粗大，发酵液容易过滤，常不需特殊处理。其滤渣呈紧密饼状物，很容易从滤布上刮下来，故可采用鼓式真空过滤机过滤鼓式真空过滤机过滤。放放线线菌菌发发酵酵液液菌丝细而分枝，交织成网网络络状状。还含含有有很很多多多多糖糖类类物物质质，粘性强，过滤较困难，一般需经预处理预处理，以凝固蛋白质等胶体凝固蛋白质等胶体。细细菌菌发发酵酵液液的菌体更细小，因此，过滤十分困难，如不用絮絮凝凝等等方方法法预预处处理理发酵液，往往难以采用常规过滤的设备来完成过滤操作完成过滤操作。培培养养基基的的组组成成对对过过滤滤速速度度影影响响也也很很大大。用黄豆粉、花生粉作氮源、淀粉作碳源会使过滤困难。此外，发酵后后期期加加消消沫沫油油或剩剩余余大大量量未未用用完完的的培培养养基基，都都会会使使过滤困难过滤困难。正正确确选选择择发发酵酵终终了了时时间间对对过过滤滤影影响响很很大大。在菌丝自自溶溶前前必必须须放放罐罐，因为细胞自溶后的分解产物一般很难过滤。有时延长发酵周期虽能使发酵单位有所提高，但严重影响发酵液质量，使色色素素和胶胶状状杂杂质质增增多多、过滤困难，最终造成成品质量降低成品质量降低。(2)改善过滤性能的方法改善过滤性能的方法 采用等等电电点点，蛋蛋白白质质变变性性、吸吸附附以以及及凝凝聚聚和和絮絮凝凝等方法预预处处理理发酵液，以改变发酵液的性状和过滤性能。除此以外，改善过滤性能的方法还有：加加入入助助滤滤剂剂，直接在发酵液中形成填充凝固剂、媒介作用填充凝固剂、媒介作用等。改改善善过过滤滤性性能能较较好好的的方方法法是加加入入一一些些反反应应剂剂，它们能相相互互作作用用，或和某些溶解性盐类发发生生反反应应生生成成不不溶溶解解的的沉沉淀淀。生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，沉淀本身即可作为助滤剂，并且还能使胶状物和悬浮物凝固胶状物和悬浮物凝固。如发酵液中有不溶解的多糖存在，则最好用酶将它转转化化为为单单糖糖，以提高过滤速度。加加入入淀淀粉粉酶酶后，能使过滤速度加快。发酵液染菌后，会含很多细菌菌体，杂质也增多，给边滤造成很大困难。处理方法有：升高温度，增加升高温度，增加纯化剂用量、加助滤剂等纯化剂用量、加助滤剂等。常压过滤 靠悬浮液的液位差来进行过滤的，推动力的大小由液位高决定，麦芽法过滤槽和沙滤即属此类设备。推动力不大，过滤缓慢，生产能力低。但设备简单，滤液质量稳定，对于生产能力不大厂的或固体含量小而易过滤的悬浮液仍然采用。加压过滤 它是利用压缩空气或往复泵、离心泵等输送悬浮液所形成的压力作为过滤的推动力。在待过滤悬浮液中，固形物含量为50%左右，而要求滤液较清亮的情况下都可采用这种方法过滤。由于加压过滤的推动力大，所以过滤速度快，适用于滤液黏度大、颗粒度细、可压缩性的各类物料，如发酵液的除菌便可用此法。板框过滤机、气压式过滤机和加压叶片过滤机等都属于这一种。(3)常用的过滤方法常用的过滤方法.真空过滤 在过滤介质的滤液一侧建立适当的真 空，以 增 大 推 动 力，压 力 差 通 常 不 超 过8.34104Pa，使滤液通过过滤介质，固体微粒滤机，真空叶片过滤机等，可用于某些发酵液如柠檬酸发酵液的除菌处理。.离心过滤 此类设备有三足式离心机等、锥兰式离心机、活塞浆冲卸料离心机等。对于一些高度分散的悬浮液或悬浊液(由两种重度相近的液体组成)，如酵母液和氨基酸发酵液的菌体分离可用高速离心机或超高速离心机，如酵母分离机、管式离心机等。碟式离心机结构及工作原理碟式离心机结构及工作原理进料进料轻液出口轻液出口菌体及固体杂质菌体及固体杂质干燥处理干燥处理机械法机械法非机械法非机械法固体剪切作用固体剪切作用流体剪切作用流体剪切作用破碎方法破碎方法溶胞处理溶胞处理珠磨法珠磨法压榨法压榨法超声法超声法化学法化学法物理法物理法高压匀浆高压匀浆酶溶法酶溶法3、细胞的破碎、细胞的破碎 细胞破碎细胞破碎就是通过采用不同手段破坏细胞外围使细胞内含物释放出来，转入液相中，以便于进行产物的分离纯化。细胞破碎的方法有很多，按照是否存在在外加作用力可分为机械法和非机械法两大类。细胞破碎方法序序号号方方 法法原原 理理设备设备特特 点点缺缺 点点1压力破碎法利用压力释放时的液固剪切进行破碎压力破碎机操作简便，可连续操作，适用于不同的细胞加压放热，需要冷却，否则生物活性物质会失活；破碎率较低，压力不稳定，需要进行反复破碎2珠磨破碎法利用固体的剪切进行破碎细胞珠磨破碎机操作简便、稳定，可连续批式操作，破碎率可以控制，容易放大，适用于工业放大珠磨时会放热，需要高效冷却，不同细胞的破碎条件差异大3超声波破碎法利用超声波形成空穴产生压力冲击使进行破碎超声破碎机操作简便，可连续或批式操作超声波处理会产热，需要冷却，破碎率较低，需反复进行破碎，应用面较窄4渗透压法利用渗透压的突变，造成细胞内压力差而引起细胞的破碎适用于位于胞内质的产物释放，细胞的破碎率低，但产物的释放较好，纯度较高 操作比较复杂，条件要求严格，只适用于少量榈的处理，费用高5有机溶剂或表面活性剂法利用有机溶剂或表面活性剂改变细胞壁或膜的通透性，使胞内产物得以释放方法简单，细胞内含物释放少，产物较纯，可大规模应用 适用性有限，只适合于对有机溶剂或表面活性剂稳定的产物6碱或酶处理法经碱或酶的处理使细胞壁或膜破坏，使产物释放出来方法简单，可大规模应用适用性有限，只适合于对碱或酶稳定的产物JJ-2组织捣碎匀浆机 Ultrasonication 超声波超声波超声波破碎仪 WSK卧式高效全能珠磨机Crushing in ball mill 珠磨法珠磨法 ZM系列系列卧式密卧式密闭珠珠(砂砂)磨机磨机6.5.3、发酵产品的分离纯化方法、发酵产品的分离纯化方法 发酵产物的提取和精制过程发酵产物的提取和精制过程也就是也就是浓缩浓缩和和纯化纯化过过程，其中第一步操作从发酵液中分离提取发酵产物最程，其中第一步操作从发酵液中分离提取发酵产物最为重要，称为为重要，称为提取提取。而以后几步操作所处理的体积小。而以后几步操作所处理的体积小了，操作要容易些，主要将发酵产物部分除去杂质、了，操作要容易些，主要将发酵产物部分除去杂质、浓缩、提纯及精炼，这过程统称浓缩、提纯及精炼，这过程统称精制精制。用于生物物质分离、纯化的方法除了用于生物物质分离、纯化的方法除了传统的传统的沉淀法、吸附沉淀法、吸附法、离子交换、萃取法等之外，还有法、离子交换、萃取法等之外，还有超滤、反渗透、电渗析、超滤、反渗透、电渗析、凝胶电泳、离子交换层析、新和层析、疏水层析、等电聚焦、凝胶电泳、离子交换层析、新和层析、疏水层析、等电聚焦、双水相萃取、超临界萃取、反胶团萃取、凝胶层析双水相萃取、超临界萃取、反胶团萃取、凝胶层析等。等。工业生产工艺中的分离纯化步骤工业生产工艺中的分离纯化步骤:总是将最容易分离的物质放在前面总是将最容易分离的物质放在前面，而将，而将难以分离的物质难以分离的物质留在后面进行分离留在后面进行分离。一般第一步应当是非特异性的一般第一步应当是非特异性的低分辨率低分辨率的的分离技术，如沉淀、粗的吸附分离技术，如沉淀、粗的吸附.第二步采用第二步采用高分辨、较高选择性高分辨、较高选择性的分离技的分离技术术.最后选择兼有最后选择兼有高选择性分离纯化、又有澄高选择性分离纯化、又有澄清、脱盐等作用的凝胶层析清、脱盐等作用的凝胶层析.1、分离纯化工艺应遵循的原则、分离纯化工艺应遵循的原则 1）具有良好的稳定性和重复性；）具有良好的稳定性和重复性；2）尽可能减少组成工艺的步骤；）尽可能减少组成工艺的步骤；3）组成工艺的各技术或步骤之间要能相互适应和协调）组成工艺的各技术或步骤之间要能相互适应和协调,工艺和设备相适工艺和设备相适 应。应。4）在工艺过程中尽可能少用试剂，以免增加分离纯化）在工艺过程中尽可能少用试剂，以免增加分离纯化步骤，或干扰产品质量；步骤，或干扰产品质量；5）分离纯化工艺所用的时间尽可能短，尤其是对稳定）分离纯化工艺所用的时间尽可能短，尤其是对稳定性差的产物；性差的产物；6）工艺和技术必须高效，收率高，易操作，对设备条）工艺和技术必须高效，收率高，易操作，对设备条件要求低，能耗低；件要求低，能耗低；7）具有较高的安全性。）具有较高的安全性。2.2.分离纯化原理分离纯化原理 （1）根据分子形状和大小不同进行分离。如差速离心与超离心，膜分离（透析、电渗析）与超滤法，凝胶过滤法。（2）根据分子电离性质（带电性）的差异进行分离。如离子交换法，电泳法，等电聚焦法。（3）根据分子极性大小及溶解度不同进行分离。如溶剂提取法，逆流分配法，分配层析法，盐析法，等电点沉淀法及有机溶剂分级沉淀法。（4）根据物质吸附性质的不同进行分离。如选择性吸附与吸附层析法。（5）根据配体特异性进行分离亲和层析法。3.分离纯化的主要方法分离纯化的主要方法1)沉淀法 利用某些发酵产品与某些试剂形成不溶性的盐或复合物而从发酵滤液或浓缩滤液中沉淀或结晶析出的特性，达到生物物质分离和纯化的目的。成本低、设备简单、收率高、浓缩倍数高、操作简单。等电点沉淀法 盐析法 有机溶剂法 聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 生成盐复合物沉淀法 热变性和酸变性沉淀法3.分离纯化的主要方法分离纯化的主要方法2).萃取法萃取法萃取分离法的基本原理萃取分离法的基本原理 萃取：把某组分从一个液相（水相）转移到互不相溶的另一个液 相有机相）的过程。反萃取：有机相水相萃取过程的本质萃取过程的本质:将物质由亲水性转化为疏水性的过程将物质由亲水性转化为疏水性的过程 优点：优点：(1).萃取分离法设备简单；(2).分离效果好；缺点：缺点：(1).费时，工作量较大；(2).萃取溶剂常是易挥发、易燃和有毒的物质。基本原理基本原理 固相萃取一种无需有机溶剂,简便快速，集“采样，萃取,浓缩,进样”于一体，能够与气相色谱或高效液相色谱仪连用样品前处理技术.其分离原理是溶质在高分子固定液膜和水溶液间达到分配平衡后分离 优点优点：固相微萃取(SPME)技术集萃取!富集和解吸于一体,具有无溶剂!可直接进样!操作简便快捷!灵敏的特点.固相萃取仪固相萃取仪固相萃取分离法固相萃取分离法 超声波在传递过程中存在着的正负压强交变周期，在正相位时，对介质分子产生挤压，增加介质原来的密度；负相位时，介质分子稀散，介质密度减小。超声波萃取仪超声波萃取仪 超声波并不能使样品内的分子产生极化，而是在溶剂和样品之间产生声波空化作用，导致溶液内气泡的形成、增长和爆破压缩，从而使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。超声波萃取分离法 临界萃取技术采用超临界压力，以二氧化碳流体代替有机溶剂，并发挥其在临界、超临界状态下，对弱极性物质（动植物挥发油、脂）有特殊的溶解能力的特性，在常温下对动植物的有效组份和精华进行萃取和分离，使生物活性不被破坏，产品中无溶剂残留等污染。优点：萃取用CO2气体可以回收和循环利用，成本比较低，对组份或生理活性物质极少损失或破坏，没有溶剂残留，产品质量高。超临界流体萃取分离法大型超临界流体萃取装置3.分离纯化的主要方法分离纯化的主要方法3)吸附法 物质从流动相(气体或液体)浓缩到固体表面,达到分离的过程。（1）疏水或非极性吸附剂 （2）亲水或极性吸附剂 （3）离子交换树脂吸附剂3.分离纯化的主要方法分离纯化的主要方法离子交换法 当发酵液流经离子交换树脂时，发酵液中的离子经吸附或扩散
