杂环类药物的分析讲稿.ppt

关于杂环类药物的分析第一页，讲稿共九十九页哦基本要求基本要求 一一、掌掌握握二二氢氢吡吡啶啶类类、喹喹啉啉类类、托托烷烷类类、吩吩噻噻嗪嗪类类、苯苯并并二二氮氮杂杂卓卓类类药药物物的的鉴鉴别别和和含含量量测测定定的的基基本原理与方法。本原理与方法。二二、熟熟悉悉本本类类药药物物中中典典型型药药物物国国外外药药典典收收载载的的鉴鉴别和含量测定方法。别和含量测定方法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。返 回第二页，讲稿共九十九页哦杂环杂环：环状有机化合物的碳环中夹杂有其它非碳：环状有机化合物的碳环中夹杂有其它非碳原子的环状结构。原子的环状结构。非碳原子（杂原子）：非碳原子（杂原子）：N、S、O等等杂环类药物共性：杂环类药物共性：（1）是合成药物中所占比例最大的一类药物；）是合成药物中所占比例最大的一类药物；（2）多为五元环或六元环，单环或合并环；）多为五元环或六元环，单环或合并环；（3）杂环结构较稳定，不易开环，其它性质受）杂环结构较稳定，不易开环，其它性质受杂原子种类杂原子种类、数目、位置影响；、数目、位置影响；（4）杂环上取代基性质较活泼，常用于分析；）杂环上取代基性质较活泼，常用于分析；（5）含含N杂环，其碱性的强弱往往用于分析杂环，其碱性的强弱往往用于分析。第三页，讲稿共九十九页哦第一节第一节 二氢二氢吡啶类药物吡啶类药物（钙通道阻滞剂）（钙通道阻滞剂）苯基苯基-1,4-二氢吡啶母核二氢吡啶母核吡啶吡啶（一）结构（一）结构第四页，讲稿共九十九页哦硝苯地平（硝苯地平（nifedipine)第五页，讲稿共九十九页哦（二）主要理化性质（二）主要理化性质1）二氢吡啶环的还原性）二氢吡啶环的还原性2）硝基的氧化性：）硝基的氧化性：硝基硝基芳伯胺基芳伯胺基重氮化重氮化-偶合偶合3）二氢吡啶的解离：）二氢吡啶的解离：与与碱碱作用，二氢吡啶环上作用，二氢吡啶环上1,4-氢均可氢均可发生解离，形成发生解离，形成p-共轭共轭而发生颜色变化而发生颜色变化4）遇光不稳定）遇光不稳定5）旋光性：）旋光性：C4手性碳手性碳6）UV、IR：苯环、取代基苯环、取代基第六页，讲稿共九十九页哦（三）鉴别试验（三）鉴别试验化学鉴别法化学鉴别法1）与亚铁盐反应：）与亚铁盐反应：-NO2Fe(OH)2 Fe(OH)3灰绿色灰绿色 红棕色红棕色2）与）与NaOH试液反应：试液反应：二氢吡啶类药物的二氢吡啶类药物的丙酮丙酮溶液溶液+NaOH 橙红色橙红色3）沉淀反应：）沉淀反应：与重金属盐与重金属盐尼莫地平尼莫地平+HgCl2 白色沉淀白色沉淀4）重氮化）重氮化-偶合反应偶合反应苯环硝基苯环硝基 芳伯胺基芳伯胺基Zn，H+第七页，讲稿共九十九页哦二、分光光度法二、分光光度法1）UV尼群地平胶囊的鉴别（尼群地平胶囊的鉴别（ChP 2010）2）IR原料药与部分制剂；原料药与部分制剂；尼群地平片的鉴别（尼群地平片的鉴别（ChP 2010）二、色谱法二、色谱法1）TLC硝苯地平（硝苯地平（BP 2010）2）HPLC尼莫地平片的鉴别（尼莫地平片的鉴别（ChP 2010）第八页，讲稿共九十九页哦 (四四)硝苯地平中有关物质检查硝苯地平中有关物质检查 硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为4-4-（2-2-硝硝基苯基）基苯基）-2,6-2,6-二甲基吡啶二甲基吡啶-3,5-3,5-二羧酸二甲酯（二羧酸二甲酯（I I）和和4-4-（2-2-亚亚硝基苯基）硝基苯基）-2,6-2,6-二甲基吡啶二甲基吡啶-3,5-3,5-二羧酸二甲酯（二羧酸二甲酯（IIII）。）。III第九页，讲稿共九十九页哦溶液配制溶液配制l供试品液供试品液:硝苯地平硝苯地平1 mg/mLl对照品贮备液对照品贮备液:杂质杂质I、II各各10 ug/mLl 供试品液供试品液 对照品贮备液对照品贮备液方法方法对照溶液对照溶液1硝苯地平硝苯地平2 ug/mL杂质杂质A、B各各1 ug/mL硝苯地平对照品硝苯地平对照品杂质杂质I杂质杂质II硝苯地平硝苯地平1 mg/mL杂质杂质A、B各各10 ug/mL对照溶液对照溶液2第十页，讲稿共九十九页哦检测l对照溶液对照溶液2进样测定分离度、灵敏度进样测定分离度、灵敏度l供试品液供试品液l对照溶液对照溶液1判断l供试品液中若有与杂质供试品液中若有与杂质I、II保留时间一致的色谱峰，保留时间一致的色谱峰，其峰面积均其峰面积均0.1%（峰面积外标法）（峰面积外标法）l供试液中其他杂质峰面积供试液中其他杂质峰面积对照溶液液对照溶液液1中硝苯地中硝苯地平峰平峰面积的面积的0.2%；杂质总量；杂质总量0.5%。分别进样，记录至主峰分别进样，记录至主峰tR的的2倍倍第十一页，讲稿共九十九页哦第一节第一节 吡啶类药物吡啶类药物一、典型药物的结构与主要化学性质一、典型药物的结构与主要化学性质（一）典型药物的结构（一）典型药物的结构 吡啶（吡啶（pyridinepyridine）异烟肼异烟肼（isoniazidisoniazid）尼可刹米尼可刹米（nikethamidenikethamide）第十二页，讲稿共九十九页哦 （二）主要化学性质（二）主要化学性质 1.1.弱碱性弱碱性 吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的pKpKb b 值为值为8.88.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环氮外，（水中）。尼可刹米除了吡啶环氮外，位位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。可以进行鉴别。第十三页，讲稿共九十九页哦 3 3吡吡啶啶环环的的特特性性 异异烟烟肼肼和和尼尼可可刹刹米米的的吡吡啶啶环环、位位未未取取代代，而而或或位位被被羧羧基基衍衍生生物物所所取取代代；硝硝苯苯地地平平的的吡吡啶啶环环、位位被被甲甲酸酸甲甲酯酯所所取取代代，其其吡吡啶啶环环可可发发生生开开环反应环反应。2还原性还原性 异烟肼异烟肼的吡啶环的吡啶环位上被具有位上被具有还原性还原性酰肼取代酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合物，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合物发生缩合反应。发生缩合反应。第十四页，讲稿共九十九页哦二、鉴别试验二、鉴别试验（一）吡啶环的开环反应（一）吡啶环的开环反应 适用于吡啶环的适用于吡啶环的、位无取代基的位无取代基的异异 烟肼和尼可刹米。烟肼和尼可刹米。1.1.戊烯二醛反应（戊烯二醛反应（kning kning 反应）反应）尼可刹米尼可刹米+溴化氰溴化氰H2O戊烯二醛衍生物戊烯二醛衍生物苯胺苯胺黄色黄色第十五页，讲稿共九十九页哦CNBr第十六页，讲稿共九十九页哦（黄色（黄色黄棕色黄棕色）衍生物的颜色随芳伯胺胺的不同而不同衍生物的颜色随芳伯胺胺的不同而不同第十七页，讲稿共九十九页哦2 2二硝基氯苯反应（二硝基氯苯反应（VongerichtenVongerichten反应）反应）吡啶及其衍生物吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫红色紫红色无水条件无水条件第十八页，讲稿共九十九页哦 采用本法鉴别采用本法鉴别异烟肼异烟肼、尼可刹米尼可刹米时，需适当处时，需适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。后进行鉴别。如异烟肼鉴别：如异烟肼鉴别：第十九页，讲稿共九十九页哦异烟肼不经处理的反应：异烟肼不经处理的反应：异烟肼异烟肼+2+2，4-4-二硝基氯苯二硝基氯苯乙醇乙醇OH-紫红色紫红色第二十页，讲稿共九十九页哦（二）酰肼基团的反应（二）酰肼基团的反应 1 1还原反应还原反应异烟肼异烟肼+AgNOAgNO3 3N2+Ag银镜银镜异烟肼异烟肼+亚硒酸亚硒酸硒硒（红色红色）第二十一页，讲稿共九十九页哦2 2缩合反应缩合反应 异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可用以鉴别。点，可用以鉴别。ChPChP和和BPBP均采用本法鉴别均采用本法鉴别.黄色结晶黄色结晶 mpmp为为228228231231 第二十二页，讲稿共九十九页哦 -NHNH2 2活性活性-CHCH2 2-+1+1，2-2-萘醌萘醌-4-4-磺酸磺酸OHOH-红色红色第二十三页，讲稿共九十九页哦（三）形成沉淀的反应（三）形成沉淀的反应 具具有有吡吡啶啶环环的的结结构构，可可与与重重金金属属盐盐类类及及苦苦味味酸酸等等试试剂剂形形成成沉淀。沉淀。尼可刹米尼可刹米+CuSOCuSO4 4+硫氰酸铵硫氰酸铵草绿色草绿色尼可刹米尼可刹米异烟肼异烟肼+HgClHgCl2 2白色白色第二十四页，讲稿共九十九页哦 （四）分解产物的反应四）分解产物的反应使湿润的红色石蕊试纸变蓝使湿润的红色石蕊试纸变蓝尼可刹米尼可刹米异烟肼异烟肼+无水无水NaNa2 2COCO3 3Ca(OH)Ca(OH)2 2吡啶臭吡啶臭尼可刹米尼可刹米+NaOHNaOH二乙胺二乙胺第二十五页，讲稿共九十九页哦 （五）紫外吸收光谱特征（五）紫外吸收光谱特征 本本类类药药物物的的分分子子结结构构中中均均含含有有芳芳杂杂环环，在在紫紫外外光光区区有有特特征征吸吸收收，其其最最大大、最最小小吸吸收收波波长长及及百分吸收系数百分吸收系数可供鉴别。可供鉴别。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法本类药物的紫外特征吸收鉴别方法 药药 物物 溶溶 剂剂 maxmax（nmnm）min min（nmnm）E E1cm1cm1%1%异烟肼异烟肼 HClHCl（0.01mol/L0.01mol/L）265 265 约约420420 水水 266 234 378 266 234 378 尼可刹米尼可刹米 HClHCl（0.01mol/L0.01mol/L）263 285 263 285 NaOH NaOH（0.1mol/L0.1mol/L）255 840 255 840 260 860 260 860 硝苯地平硝苯地平 无水乙醇无水乙醇 333 140 333 140第二十六页，讲稿共九十九页哦 （一）异烟肼中游离肼的检查（一）异烟肼中游离肼的检查 三、有关物质检查三、有关物质检查pTLC（ChP、BP）p比浊法（比浊法（JP）p差示分光光度法（文献）差示分光光度法（文献）第二十七页，讲稿共九十九页哦1.TLC法法 异烟肼及其注射液异烟肼及其注射液,采用采用TLC法中杂质对照法法中杂质对照法。对照品：对照品：硫酸肼硫酸肼薄层板：薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备）硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备）展开剂：展开剂：异丙醇异丙醇-丙酮（丙酮（3：2）显色剂：显色剂：乙醇制对乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液二甲氨基苯甲醛试液规定：规定：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点供试品主斑点前方，不得显黄色斑点样品液：样品液：50 mg异烟肼异烟肼/mL，点样，点样10 uL杂质对照液：杂质对照液：50 ug游离肼游离肼/mL，点样，点样2 uL 杂质限量：杂质限量：Ch.P5025010310100%=0.02%第二十八页，讲稿共九十九页哦 BPBP的检查方法：的检查方法：供试品溶液制备供试品溶液制备:取异烟肼取异烟肼1.0g1.0g，加丙酮，加丙酮-水水(1:1)(1:1)制成制成10ml.10ml.对照溶液制备对照溶液制备:取硫酸肼取硫酸肼50mg50mg，加水，加水50ml50ml使溶解后，加丙使溶解后，加丙酮稀释至酮稀释至100ml100ml；量取；量取10ml10ml，加供试品溶液，加供试品溶液0.2ml0.2ml，加丙酮加丙酮-水水(1:1)(1:1)稀释至稀释至100ml100ml。薄层板：薄层板：硅胶硅胶GFGF254254薄层板薄层板 展开剂：展开剂：醋酸乙酯醋酸乙酯-丙酮甲醇水丙酮甲醇水(50:20:20:10)(50:20:20:10)显色剂：显色剂：乙醇制对乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液二甲氨基苯甲醛试液第二十九页，讲稿共九十九页哦 检测结果：检测结果：于于254nm254nm紫紫外外光光下下检检测测，供供试试品品中中的的杂杂质质斑斑点点强强度度应应小小于于对对照照溶溶液液中中异异烟烟肼肼色色谱谱斑斑点点；再再喷喷以以对对-二二甲甲氨氨基基苯苯甲甲醛醛溶溶液液，并并在在日日光光下下检检视视，对对照照溶溶液液中中硫硫酸酸肼肼斑斑点点的的强强度度大大于于供供试试液中的液中的杂质杂质斑点斑点。第三十页，讲稿共九十九页哦 2 2比浊法比浊法(JP)(JP)原理：游离肼原理：游离肼+水杨醛水杨醛 水杨醛腙（浑浊）水杨醛腙（浑浊）规定：异烟肼样品规定：异烟肼样品+水杨醛水杨醛 5 min 5 min内不得浑浊内不得浑浊 此法专属性差，因异烟肼此法专属性差，因异烟肼(慢慢)和硫酸肼和硫酸肼均生成腙而析出沉淀均生成腙而析出沉淀。第三十一页，讲稿共九十九页哦3.3.差示分光光度法差示分光光度法 肼肼异烟肼异烟肼+对对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛黄色缩合物黄色缩合物对对-二甲氨基苯甲醛连氮二甲氨基苯甲醛连氮 (maxmax=456nm =456nm 有最大吸收有最大吸收)形成的缩合产物对形成的缩合产物对-二甲氨基苄叉二甲氨基苄叉(于于maxmax=456456nmnm波长处无吸收波长处无吸收)可在可在456456nmnm波长处测定并计算二者的差示吸收度波长处测定并计算二者的差示吸收度AA456456，同时以同时以 对照品比较法计算游离肼含量。对照品比较法计算游离肼含量。第三十二页，讲稿共九十九页哦 具体测定法：具体测定法：对照品溶液：对照品溶液：硫酸肼硫酸肼C CR R1g/ml1g/ml 5 ml+5 ml+丙酮丙酮 maxmax=456nm=456nm 测测A A1 1 +对对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛(AA456456A A2 2A A1 1)AAR R 5 5 ml ml maxmax=456nm=456nm 测测A A2 2 供试品溶液：供试品溶液：异烟肼异烟肼C C2mg/ml2mg/ml 游离肼游离肼 C CX X=AAs s/A/AR RCCR R 1 1份份+丙酮丙酮 maxmax=456nm=456nm 测测A A1 1 +对对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛 (AA456456A A2 2A A1 1)AAs s 2 2份份 maxmax=456nm=456nm 测测A A2 2第三十三页，讲稿共九十九页哦(二二)尼可刹米中有关杂质检查尼可刹米中有关杂质检查 因有关杂质的化学结构不明，故因有关杂质的化学结构不明，故Ch.pCh.p采用采用TLCTLC法中的法中的高低浓度对比法高低浓度对比法进行检查。进行检查。第三十四页，讲稿共九十九页哦第二节第二节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物一、基本结构与化学性质一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物（一）结构特点与典型药物第三十五页，讲稿共九十九页哦第三十六页，讲稿共九十九页哦第三十七页，讲稿共九十九页哦奋乃静奋乃静第三十八页，讲稿共九十九页哦癸氟奋乃静癸氟奋乃静第三十九页，讲稿共九十九页哦盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静第四十页，讲稿共九十九页哦盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪第四十一页，讲稿共九十九页哦（二）主要化学性质（二）主要化学性质 1.1.UVUV和和IRIR：硫氮杂蒽母核为共轭三环硫氮杂蒽母核为共轭三环体系体系 三个最大吸收峰别：三个最大吸收峰别：205nm205nm、254nm254nm、300nm300nm 由于由于2 2位、位、1010位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。硫氮杂蒽母核的硫氮杂蒽母核的硫硫为为二价二价，易氧化为砜和亚砜，其，易氧化为砜和亚砜，其UVUV光谱有明显不同，光谱有明显不同，有四个峰值。有四个峰值。另外，另外，取代基取代基R R和和RR不同，不同，IRIR不同。不同。第四十二页，讲稿共九十九页哦2.2.易易氧氧化化呈呈色色：二二价价硫硫易易氧氧化化，遇遇H H2 2SOSO4 4、HNOHNO3 3、FeClFeCl3 3、H H2 2O O2 2等等氧氧化化剂剂易被氧化，随着取代基的不同，而呈不同的颜色。易被氧化，随着取代基的不同，而呈不同的颜色。3.3.与金属离子络合呈色：与金属离子络合呈色：本类药物中本类药物中未被氧化的硫未被氧化的硫，可与，可与钯离钯离 子子形形成成有有色色配配合合物物，其其氧氧化化产产物物则则无无此此反反应应。可可用用于于鉴鉴别别和和含含量量测测定定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。4.4.弱弱碱碱性性：硫硫氮氮杂杂蒽蒽母母核核中中的的N N原原子子碱碱性性极极弱弱；1010位位取取代代的的脂脂烃烃氨氨基基、哌哌嗪嗪及及哌哌啶啶的的衍衍生生物物的的N N原原子子碱碱性性较较强强，可可用用于于鉴鉴别别与与含含量量测定测定第四十三页，讲稿共九十九页哦（一）紫外特征吸收和红外吸收光谱一）紫外特征吸收和红外吸收光谱 可用可用UV和和IR鉴别，鉴别，Ch.P中中UV鉴别实例如下：鉴别实例如下：药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml）maxmax（nmnm）A E A E1%1%1cm1cm盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 盐酸（盐酸（9 10009 1000）5 254 0.46 915 5 254 0.46 915 306 306 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 盐酸（盐酸（0.010.01mol/Lmol/L）6 249 883937 6 249 883937奋乃静奋乃静 无水乙醇无水乙醇 7 258 0.65 7 258 0.65 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 乙醇乙醇 10 260 10 260 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 盐酸（盐酸（9 10009 1000）10 255 553593 10 255 553593 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 盐酸（盐酸（1 201 20）10 256 630 10 256 630盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 乙醇乙醇 8 264 8 264与与315 315 二、鉴别试验二、鉴别试验第四十四页，讲稿共九十九页哦 （二）显色反应二）显色反应 1.与氧化剂的显色反应与氧化剂的显色反应 药物名称药物名称 硫硫 酸酸 硝硝 酸酸 过氧化氢过氧化氢 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 显红色显红色,渐变淡黄色渐变淡黄色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 显樱桃红色显樱桃红色,放置放置 生成红色沉淀生成红色沉淀,加热即溶解加热即溶解,后颜色渐变深后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色溶液由红色转变为橙黄色 奋乃静奋乃静 显深红色显深红色;放置后放置后 红色渐褪去红色渐褪去 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 显淡红色显淡红色,温热温热 后变成红褐色后变成红褐色 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀生成微带红色的白色沉淀;放放 置后置后,红色变深红色变深,加热后变黄色加热后变黄色 盐盐酸硫利达嗪酸硫利达嗪 显蓝色显蓝色 第四十五页，讲稿共九十九页哦 2.与钯离子络合显色反应（与钯离子络合显色反应（ChP 2010）利用分子结构中利用分子结构中未被氧化的硫未被氧化的硫与金属与金属钯离子钯离子络合形成有色络络合形成有色络 合物，如与癸氟奋乃静形成合物，如与癸氟奋乃静形成红色红色络合物。络合物。第四十六页，讲稿共九十九页哦第四十七页，讲稿共九十九页哦（三）分解产物的反应三）分解产物的反应 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 碳酸钠及碳酸钾碳酸钠及碳酸钾 F F-+酸性茜素锆试液酸性茜素锆试液 ZrFZrF6 6 2-2-配位离子，茜素游离使溶液由配位离子，茜素游离使溶液由红红色变为色变为黄黄色。色。600600炽灼炽灼第四十八页，讲稿共九十九页哦三、三、特殊杂质检查特殊杂质检查HPLC、TLCP300-305返 回药物与有关物质在结构和性质上具有相似性药物与有关物质在结构和性质上具有相似性第四十九页，讲稿共九十九页哦第三节第三节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物一、结构特征与典型药物一、结构特征与典型药物NNClH3CO地西泮地西泮第五十页，讲稿共九十九页哦阿普唑仑阿普唑仑第五十一页，讲稿共九十九页哦奥沙西泮奥沙西泮第五十二页，讲稿共九十九页哦氯氮卓氯氮卓NNNCH3OClH第五十三页，讲稿共九十九页哦主要理化性质：主要理化性质：弱碱性弱碱性：二氮杂卓环为七元环，环上：二氮杂卓环为七元环，环上N原子具碱性原子具碱性，苯基，苯基的取代使碱性下降，可用的取代使碱性下降，可用非水滴定法非水滴定法测定。测定。UV吸收吸收共轭体系；含量测定共轭体系；含量测定水解性：水解性：环比较稳定，在强酸下水解，生成相应的环比较稳定，在强酸下水解，生成相应的二苯二苯甲酮甲酮衍生物，可用于衍生物，可用于鉴别鉴别和和比色比色测定测定溶解性：溶解性：多为游离碱，多为游离碱，不溶于水不溶于水，溶于甲醇、乙醇和氯，溶于甲醇、乙醇和氯仿中。仿中。第五十四页，讲稿共九十九页哦 (一一)化学鉴别试验化学鉴别试验 1.1.沉淀反应沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿普唑仑 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 KBiIKBiI4 4 橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，放置后，沉淀颜色变深，二、鉴别试验二、鉴别试验阿普唑仑阿普唑仑+硅钨酸硅钨酸 白色沉淀白色沉淀第五十五页，讲稿共九十九页哦2.2.水解后呈芳伯胺反应水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮氯氮卓和奥沙西泮第五十六页，讲稿共九十九页哦3.3.硫酸硫酸-荧光反应荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm365nm）下，显）下，显不同颜色的荧光。不同颜色的荧光。地西泮地西泮 黄绿色黄绿色 黄色黄色 氯氮卓氯氮卓 黄色黄色 紫色紫色 艾司唑仑艾司唑仑 +H H2 2SOSO4 4 亮绿色亮绿色 +稀硫酸稀硫酸 天蓝色天蓝色 硝西泮硝西泮 淡蓝色淡蓝色 蓝绿色蓝绿色 奥沙西泮奥沙西泮 淡黄绿色淡黄绿色第五十七页，讲稿共九十九页哦4.4.分解产物的反应分解产物的反应 本类药物多为有本类药物多为有机氯化机氯化合物，合物，氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。Ch.PCh.P用于地西泮鉴别。用于地西泮鉴别。第五十八页，讲稿共九十九页哦 （二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml）maxmax（nmnm）地西泮地西泮 0.5%0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液 10 284 440-468 10 284 440-468 氯氮卓氯氮卓 盐酸溶液盐酸溶液(0.1 M)7 245,308 309-329(308nm)(0.1 M)7 245,308 309-329(308nm)氯硝西泮氯硝西泮 0.5%0.5%硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液 10 252,307 10 252,307 奥沙西泮奥沙西泮 乙醇乙醇 10 229,315(10 229,315(较弱较弱)红外吸收光谱红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西 泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。第五十九页，讲稿共九十九页哦（三）（三）TLC法法 1.1.硝西泮片的硝西泮片的TLCTLC鉴别法鉴别法对照法对照法 第六十页，讲稿共九十九页哦2.2.酸水解产物的酸水解产物的TLCTLC法法 利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的的二苯甲酮衍生物二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性专属性较差较差。第六十一页，讲稿共九十九页哦 （一）有关物质检查（一）有关物质检查 多采用多采用TLCTLC、HPLCHPLC法。法。三唑仑三唑仑USPUSP采用采用GCGC法法三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查第六十二页，讲稿共九十九页哦 1.1.地西泮中有关物质的检查地西泮中有关物质的检查 地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-N-去甲基苯甲二氮卓去甲基苯甲二氮卓及及化学结构不清的有关物质化学结构不清的有关物质，可采用可采用TLCTLC法中的高低浓度对比法进行检查。法中的高低浓度对比法进行检查。2.2.氯氮卓中有关物质的检查氯氮卓中有关物质的检查 USP(24)USP(24)用用TLCTLC法检查氯氮卓中的有关物质，并法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物规定其分解产物2-2-氨基氨基-5-5-氯氯-2-2-苯甲酮苯甲酮含量不含量不得过得过0.01%0.01%；中间体；中间体7-7-氯氯-1-1，3-3-二氢二氢-5-5-苯基苯基-2H-12H-1，4-4-苯并二氮杂卓苯并二氮杂卓-2-2-酮酮-4-4-氧化物氧化物含量不含量不得过得过0.1%0.1%。第六十三页，讲稿共九十九页哦 3.3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为250250mm2.6mmmm2.6mm（i.d.i.d.）Nucleosil10CNucleosil10C1818柱；柱；n=3000n=3000；流流动相为甲醇动相为甲醇-磷酸液磷酸液(0.05(0.05mol/L)(60:40),40%mol/L)(60:40),40%氢氧化钠氢氧化钠溶液调溶液调pHpH为为6.06.0；流速为；流速为1 1ml/min;ml/min;紫外检测器波长为紫外检测器波长为254254nmnm。检测结果：检测结果：氨基物（氨基物（）的）的t tR R为为12.012.0minmin、氧化物氧化物（）的）的t tR R为为4.34.3minmin，痕量杂质（痕量杂质（、）的）的t tR R为为13.813.8、3.63.6、4.74.7minmin。第六十四页，讲稿共九十九页哦 (二二)降解产物的检查降解产物的检查 地地西西泮泮注注射射液液列列入入此此项项检检查查，因因本本品品在在贮贮藏藏过过程程中中有有可可能能分分解解成成2-2-甲甲氨氨基基-5-5-氯氯-二二苯苯甲甲酮酮等等杂杂质质。采采用用HPLCHPLC法法进进行检查行检查。返 回第六十五页，讲稿共九十九页哦一、非水溶液滴定法一、非水溶液滴定法(一一)基本原理基本原理第四节第四节 含量测定含量测定当当HAHA酸性较强时，反应不能定量完成，酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低必须除去或降低HAHA的酸性，使反应顺利的酸性，使反应顺利地完成。地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游离碱类盐游离碱类盐被置换出的弱酸被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。因此，要根据不同情况采用相应测定条件。第六十六页，讲稿共九十九页哦(二二)一般方法一般方法供供试试品品+冰冰醋醋酸酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再若供试品为氢卤酸盐再加加5%5%醋酸汞的冰醋酸液醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结结果果高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定以空白试以空白试验校正验校正第六十七页，讲稿共九十九页哦 1.1.适用范围适用范围 主要用于主要用于K Kb b1010-8-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱 的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使可使pKpKb b为为8 81313的弱碱性药物采用本法滴定。的弱碱性药物采用本法滴定。一般来说：一般来说：K Kb b为为1010-8-81010-10-10时，宜选时，宜选冰醋酸冰醋酸作为溶剂；作为溶剂；药物的药物的 K Kb b为为1010-10-101010-12-12时，宜选时，宜选冰醋酸与醋酐冰醋酸与醋酐的混合溶液；的混合溶液；K Kb b1010-12-12时，应用时，应用醋酐醋酐作为溶剂。作为溶剂。另外，另外，在冰醋酸中加入不同量的在冰醋酸中加入不同量的甲酸甲酸，也能使滴定突跃显著增，也能使滴定突跃显著增 大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。(三三)问题讨论问题讨论第六十八页，讲稿共九十九页哦 2.2.酸根的影响：酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：HClOHClO4 4HBrHBrH H2 2SOSO4 4HClHClHNOHNO3 3过量过量(1(13 3倍倍)不不影响测定结果影响测定结果 消除消除HX干扰的方法：干扰的方法：加加Hg(Ac)2 量不足终点不明显，结果偏低。量不足终点不明显，结果偏低。2BHX +Hg(Ac)2 2BHAc +HgX2 第六十九页，讲稿共九十九页哦3.3.滴滴定定剂剂的的稳稳定定性性 非非水水溶溶液液滴滴定定法法所所用用的的溶溶剂剂为为醋醋酸酸，具具有有挥挥发发性性，膨膨胀胀系系数数较较大大，温温度度和和贮贮存存条条件件都都影影响响滴滴定定剂剂的的浓浓度度。若若滴滴定定样样品品与与标标定定HClOHClO4 4溶溶液液时时的的温温度度不不一一致致，温温差差未未超超过过1010时时，应应将将高高氯氯酸酸滴滴定定液液的的浓浓度度用用下下列列公公式式加加以校正：以校正：N1=N0/1+0.0011(t1-t0)4.终点指示方法终点指示方法 常用电位法和指示剂法。常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本收载的本类药物大多采用类药物大多采用结晶紫结晶紫指示剂指示指示剂指示终点终点，少数采用电位法，少数采用电位法指示终点指示终点。第七十页，讲稿共九十九页哦(四四)应用实例应用实例 1.1.游离弱碱性药物测定游离弱碱性药物测定 异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中构中氮原子的弱碱性氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。点的方法也不尽相同。药物名称药物名称 取样量取样量(g)g)溶溶 剂剂 指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 尼可刹米尼可刹米 0.15 0.15 冰醋酸冰醋酸1010ml ml 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 地西泮地西泮 0.2 0.2 冰醋酸、酸酐冰醋酸、酸酐1010ml ml 结晶紫结晶紫 绿色绿色 氯氮卓氯氮卓 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸1010ml ml 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色第七十一页，讲稿共九十九页哦 2.2.氢卤酸盐类药物测定氢卤酸盐类药物测定 2BHX +Hg(Ac)2 2BHAc +HgX2 药物名称药物名称 取样量取样量(g)溶溶 剂剂 加入醋酸汞试液加入醋酸汞试液(ml)指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 0.2 醋酐醋酐10ml 5 橙黄橙黄 玫瑰红色玫瑰红色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 0.3 冰醋酸冰醋酸10ml 4 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 0.3 冰醋酸冰醋酸20ml 5 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星 0.2 冰醋酸冰醋酸25ml 5 橙黄橙黄 粉红色粉红色 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱 0.3 冰醋酸冰醋酸20ml 5 结晶紫结晶紫 纯蓝色纯蓝色 盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 0.3 丙酮丙酮100ml 5 电位滴定法电位滴定法 第七十二页，讲稿共九十九页哦3.3.硫酸盐类药物测定硫酸盐类药物测定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成离，生成SOSO4 42-2-，但在，但在非水介质中非水介质中，只显示一元，只显示一元酸解离为酸解离为HSOHSO4 4-，即只供给一个，即只供给一个H H+，所以硫酸盐，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。此可以用高氯酸滴定液直接滴定。第七十三页，讲稿共九十九页哦（1 1）硫酸阿托品测定：）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的阿托品为碱性较强的 一元碱一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以 简写为简写为(BH(BH+)2 2SOSO4 42-2-，用，用HClOHClO4 4直接滴定时的反直接滴定时的反 应式为：应式为：(BHBH+)2 2SOSO4 42-2-+HClO +HClO4 4 (BH (BH+)ClO)ClO4 4-+(BH +(BH+)HSO)HSO4 4-n n硫酸阿托品硫酸阿托品:n:n高氯酸高氯酸 =1:1=1:1第七十四页，讲稿共九十九页哦（2 2）硫酸奎宁测定：）硫酸奎宁测定：奎宁为奎宁为二元碱二元碱，其中喹核，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1mol1mol的硫酸的硫酸奎宁消耗奎宁消耗3mol3mol的高氯酸的高氯酸。其反应式如下：。其反应式如下：(C(C2020H H2424N N2 2 H H+)2 2SOSO4 4+3HClO+3HClO4 4 (C C2020H H2424N N2 2 2H 2H+)2ClO)2ClO4 4-+(C C2020H H2424N N2 2 2H 2H+)HSO)HSO4 4-ClOClO4 4-Ch.P Ch.P和和USP(24)USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。奎尼丁的含量。第七十五页，讲稿共九十九页哦(3)(3)硫酸奎宁片的测定：硫酸奎宁片的测定：硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时1 1摩摩尔的硫酸奎宁尔的硫酸奎宁可可消耗消耗4 4摩尔摩尔的的高氯酸高氯酸，因此片剂分，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。第七十六页，讲稿共九十九页哦4.4.硝酸盐的测定硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可滴定反应可以进行完全以进行完全。硝酸具氧化性可破坏指示剂使其变色，无硝酸具氧化性可破坏指示剂使其变色，无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般定硝酸盐时，一般用电位法指示终点用电位法指示终点。第七十七页，讲稿共九十九页哦5.5.磷酸盐与有机酸盐磷酸盐与有机酸盐 磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，极弱，不影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接滴定。可以按常规方法直接滴定。第七十八页，讲稿共九十九页哦（一）硝苯地平的测定（一）硝苯地平的测定 基本原理基本原理 硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：终点时终点时:微过量的微过量的CeCe4+4+将指示剂中的将指示剂中的FeFe2+2+氧化成氧化成FeFe3+3+，使使 橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终 点的到达。点的到达。二、铈量法二、铈量法第七十九页，讲稿共九十九页哦（二）吩噻嗪类药物的测定（二）吩噻嗪类药物的测定药物药物Ce(SO4)2,-e红色红色Ce(SO4)2,-2e红色消退红色消退自身指示终点或电位法、永停法指示终点自身指示终点或电位法、永停法指示终点第八十页，讲稿共九十九页哦(一）酸性染料比色法一）酸性染料比色法 1.1.基本原理基本原理 三、比色法三、比色法第八十一页，讲稿共九十九页哦 2.2.影响因素影响因素 (1)(