酶的分离纯化 (5).ppt

关于酶的分离纯化关于酶的分离纯化(5)现在学习的是第1页，共11页n n抽提是要将酶从原料中抽提出来作成酶溶液；n n纯化则是要将酶和杂质分离开来，或者选择地将酶从包含杂质的溶液中分离出来，或者选择地将杂质从酶溶液中移除出去；n n制剂则是要将纯化的酶作成一定形式的制剂。现在学习的是第2页，共11页为了能够成功地进行酶的分离纯化，应为了能够成功地进行酶的分离纯化，应注意以下问题。注意以下问题。n n1防止酶变性失效n n2选择有效的纯化方法n n3酶活性的测定贯穿纯化过程的始终现在学习的是第3页，共11页二酶的抽提二酶的抽提n n一预处理和破细胞n n二抽提n n1pH 首先应考虑的是酶的酸碱稳定性，选择的pH不能超过酶的稳定范围。n n2盐 抽提液一般采用等渗盐溶液，最普通的有0.0200.050mol/L的磷酸缓冲液，0.15mol/LNaCl溶液等。n n3温度 抽提温度一般控制在04.现在学习的是第4页，共11页n n三浓缩n n1蒸发n n2超过滤n n3胶过滤n n4反复冻融现在学习的是第5页，共11页三酶的纯化原理与方法三酶的纯化原理与方法n n1根据溶解度的不同进行的纯化n nA盐析法n nB有机溶剂沉淀法n nC共沉淀法n nD选择性沉淀法现在学习的是第6页，共11页n n2按照分子大小进行的纯化n nA胶过滤（层析）法n nB 超过滤法n nC超离心法现在学习的是第7页，共11页三根据电学解离性质进行纯化三根据电学解离性质进行纯化n nA吸附层析法n nB离子交换层析法n nC电泳法n nD聚焦层析法n nE快速液相层析法n nF疏水层析法现在学习的是第8页，共11页四利用专一亲和作用进行纯化四利用专一亲和作用进行纯化n n1亲和层析法n n2亲和电泳法n n3融合蛋白亲和分离法n n4其他相关的亲和分离法n nA金属螯合层析法n nB共价层析法现在学习的是第9页，共11页n n五高效液相层析法n n六根据稳定性差别建立的纯化n n1选择性热变性n n2选择性酸碱变性法n n3表面变性法n n七结晶n n八纯化方法的排列顺序现在学习的是第10页，共11页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第11页，共11页