Ⅱ微生物发酵产酶.pptx
收集、筛选菌种收集、筛选菌种1.用钱购买菌种用钱购买菌种2.收集土样筛选菌种收集土样筛选菌种 收集土样收集土样 初筛：初筛：单菌落单菌落培养，用培养，用透明圈法透明圈法选出选出产产 目的酶的目的酶的微生物微生物（使用鉴定培（使用鉴定培养基）养基）复筛：复筛：单菌落单菌落培养，选出培养，选出符合优良菌符合优良菌种种 要求的要求的菌落菌落（使用选择培养（使用选择培养基）基）单菌落培养单菌落培养优良菌种要求与常用菌种优良菌种要求与常用菌种透明圈法透明圈法第1页/共11页菌种保藏菌种保藏菌种保藏方法：菌种保藏方法：(1)(1)斜面培养法斜面培养法(2)(2)(3)(3)(4)(4)(5)(5)(6)(6)第2页/共11页细胞活化细胞活化保藏的菌种通常以保藏的菌种通常以芽孢芽孢形式存在（形式存在（保藏时保藏时营养缺乏营养缺乏），需放入营养充足的营养环境中），需放入营养充足的营养环境中活化活化：芽孢芽孢营养细胞营养细胞第3页/共11页扩大培养扩大培养1.1.定义：定义：根据菌种特点配制培养基，使菌种根据菌种特点配制培养基，使菌种 大量繁殖用于发酵大量繁殖用于发酵2.2.方法：方法：种子罐培养；实验室培养种子罐培养；实验室培养 （工业生产工业生产）（实验室实验室）3.3.目的：目的：使菌种大量繁殖，用于发酵使菌种大量繁殖，用于发酵培养基配制：培养基配制：碳源、氮源、生长因子、无碳源、氮源、生长因子、无 机盐、水机盐、水CCN N：碳源碳源：糖糖加碳源加碳源加加C/NC/N酸性酸性利于菌种利于菌种 保存（保存（作保存培养基作保存培养基）氮源氮源：有机、无机有机、无机加氮源加氮源减减C/NC/N碱性碱性 利于酶制剂生产利于酶制剂生产（产酶需（产酶需N N元素）元素）第4页/共11页 产酶微生物产酶微生物1.1.菌种要求：菌种要求：繁殖力强繁殖力强(繁殖周期短繁殖周期短)产酶稳定，产酶能力强产酶稳定，产酶能力强 安全安全(不用病菌不用病菌)利于发酵管理利于发酵管理(易于发酵易于发酵)2.2.常用产酶微生物：常用产酶微生物：略略单菌落培养法：单菌落培养法：稀释涂平板，长单菌落，易稀释涂平板，长单菌落，易 于分离于分离透明圈法：透明圈法：例如例如:明胶作培养基可鉴别出产蛋白酶明胶作培养基可鉴别出产蛋白酶 的菌落的菌落(明胶是蛋白质明胶是蛋白质,蛋白酶可分解明胶蛋白酶可分解明胶)CaCOCaCO3 3作培养基可鉴别出产酸菌落作培养基可鉴别出产酸菌落(产生产生 的酸可分解的酸可分解CaCOCaCO3,3,形成透明圈形成透明圈)第5页/共11页发酵管理发酵管理1.1.温度、温度、PHPH：最适最适生长生长温度、温度、PHPH与与最适最适产酶产酶温度、温度、PHPH不同不同,要实时监控、要实时监控、调节调节温度、温度、PH PH 温度：温度：0-100-10o oC C;PH:;PH:酶活力范围内酶活力范围内，防酶变性防酶变性调调PHPH方法：方法：CaCOCaCO3 3（备用碱）（备用碱）磷酸缓冲液：磷酸缓冲液：维持维持PHPH稳定稳定 调调C/NC/N：只工业上适用，只工业上适用，C/NC/N酸酸，C/NC/N碱碱2.2.增大溶氧量增大溶氧量：(1)(1)搅拌，使大气泡变为很多小气搅拌，使大气泡变为很多小气 泡泡 (2)(2)加大通入氧气量加大通入氧气量 第6页/共11页3.3.气泡气泡：产生：产生：搅拌发酵液增大溶氧量搅拌发酵液增大溶氧量 危害：危害：阻碍阻碍COCO2 2排出，排出，使使PHPH减减 小，小，使发酵液变酸，使发酵液变酸，影影 响微生物生长、产酶响微生物生长、产酶 气泡过多会使菌液漫气泡过多会使菌液漫 出，出，造成菌种污染造成菌种污染 消除方法：消除方法：机械消泡、化学试剂机械消泡、化学试剂 消泡、表面活性剂消消泡、表面活性剂消 泡泡4.4.湿度湿度开始：开始：低低后来：后来：高高第7页/共11页5.5.提高酶产量的方法提高酶产量的方法加诱导物加诱导物减阻遏物减阻遏物转基因转基因（获得产酶能力强的微生物去产酶）（获得产酶能力强的微生物去产酶）加表面活性剂加表面活性剂加产酶促进剂加产酶促进剂微生物生长与产酶模式微生物生长与产酶模式第8页/共11页微生物生长与产酶模式微生物生长与产酶模式微生物生长模式：微生物生长模式：调整期、对数期、平衡期、衰亡期调整期、对数期、平衡期、衰亡期产酶模式：产酶模式：1.1.同步合成型：同步合成型：调整期始产酶，平衡期始停产调整期始产酶，平衡期始停产 2.2.中期合成型：中期合成型：对数期始产酶，平衡期始对数期始产酶，平衡期始停产停产 3.3.滞后合成型：滞后合成型：平衡期始产酶，衰退期始平衡期始产酶，衰退期始停产停产 4.4.延续合成型：延续合成型：调整期始产酶，衰退期始调整期始产酶，衰退期始停产停产提高产酶能力的方法提高产酶能力的方法（变为延续合成型）（变为延续合成型）1.1.非调整期始产酶（非调整期始产酶（中期、滞后中期、滞后）：）：有营养物阻遏效应，有营养物阻遏效应，减减少营少营 养阻遏物浓度养阻遏物浓度2.2.平衡期始停产（平衡期始停产（同步、中期同步、中期）：）：mRNAmRNA不稳水解，不稳水解，降温使降温使mRNAmRNA稳稳第9页/共11页第10页/共11页
