高中生物二轮复习选修.pptx

考点一考点一 培养基及无菌技术培养基及无菌技术1.1.培养基：培养基：(1)(1)类型：类型：划分划分标标准准种种类类特点特点用途用途按物理按物理性性质质分分固体固体培养基培养基加入凝固剂，如琼脂、加入凝固剂，如琼脂、明胶、硅胶等明胶、硅胶等常用于微生物分离、常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种鉴定、计数和菌种保存等方面保存等方面半固体半固体培养基培养基在液体培养基中加入少在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状量凝固剂而呈半固体状态态可用于观察细菌的可用于观察细菌的运动、鉴定菌种等运动、鉴定菌种等方面方面液体液体培养基培养基不加任何凝固剂不加任何凝固剂常用于发酵工业和常用于发酵工业和微生物扩大培养微生物扩大培养第1页/共57页划分划分标标准准种种类类特点特点用途用途按用按用途分途分选择选择培养基培养基根据某一种或某一根据某一种或某一类类微生物的微生物的特殊特殊营营养要求或养要求或对对一些物理、一些物理、化学抗性而化学抗性而设计设计的培养基的培养基培养、分离特定培养、分离特定的微生物的微生物鉴别鉴别培养基培养基加入某种加入某种试剂试剂或化学或化学药药品，使品，使培养后会培养后会发发生某种生某种变变化的培养化的培养基基鉴别鉴别不同不同类类型的型的微生物微生物第2页/共57页(2)(2)培养基成分：培养基成分：一般都含有一般都含有水、碳源、氮源、无机盐、生长因水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等子等，此外还要满足微生物生长对，此外还要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质以及氧气、特殊营养物质以及氧气的要求。的要求。2.2.无菌技术：无菌技术：(1)(1)灭菌的目的：灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。(2)(2)灭菌原因：灭菌原因：为了使所利用的微生物不被其他微生物污染。为了使所利用的微生物不被其他微生物污染。第3页/共57页3.实验操作过程中，应从以下几个方面注意避免外来杂菌的污染：对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁、消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。第4页/共57页(4)(4)三种常用灭菌方法的比较：三种常用灭菌方法的比较：灭灭菌菌方法方法适用材料或用具适用材料或用具灭灭菌条件菌条件灭灭菌菌时间时间灼灼烧烧灭灭菌菌接种接种环环、接种、接种针针或或其他金属用具其他金属用具在酒精灯火焰的充在酒精灯火焰的充分燃分燃烧层烧层灼灼烧烧直至直至烧红烧红干干热热灭灭菌菌玻璃器皿玻璃器皿(吸管、培吸管、培养皿养皿)和金属用具等和金属用具等干干热灭热灭菌箱内，菌箱内，160160170170加加热热1 12 h2 h高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌培养基等培养基等100 kPa100 kPa，121121151530 min30 min第5页/共57页(5)(5)消毒和灭菌：消毒和灭菌：项项目目消毒消毒灭灭菌菌理化因素的理化因素的作用作用强强度度较为温和较为温和强烈强烈方法方法煮沸消毒法、巴氏消煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒、毒法、化学药剂消毒、紫外线消毒紫外线消毒灼烧灭菌、干热灭灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌菌、高压蒸汽灭菌消消灭灭微生物微生物的数量的数量部分生活状态的微生部分生活状态的微生物物全部微生物全部微生物芽芽孢孢和和孢孢子子能否被消能否被消灭灭不能不能能能第6页/共57页【思维拓展】【思维拓展】消毒和灭菌的原理及注意事项消毒和灭菌的原理及注意事项(1)(1)高温加热灭菌，高温加热灭菌，其原理是使细菌体内的蛋白质变性，从而达其原理是使细菌体内的蛋白质变性，从而达到杀灭细菌的作用。到杀灭细菌的作用。(2)(2)化学药剂的消毒方法，化学药剂的消毒方法，其作用原理是使细菌体内的蛋白质变其作用原理是使细菌体内的蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。(3)(3)体积分数为体积分数为70%70%的酒精杀菌效果最强。的酒精杀菌效果最强。浓度过低，杀菌力弱；浓度浓度过低，杀菌力弱；浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿，则可选择内，杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿，则可选择75%75%的酒精的酒精进行消毒。进行消毒。第7页/共57页脱分化 愈伤组织 植物激素 划线分离法 共价偶联法 酵母菌 （醋化）醋杆菌 假丝酵母、乳酸菌 光电比色法 第8页/共57页（1 1）结构：）结构：原核生物原核生物（2 2）繁殖方式：）繁殖方式：（3 3）变异类型：）变异类型：（5 5）应用：）应用：1大肠杆菌：基因突变、基因重组基因突变、基因重组基因工程、遗传实验材料基因工程、遗传实验材料（4）代谢类型：异养兼性厌氧型 革兰氏阴性(红色)(G-)(p.23）第9页/共57页考点二考点二 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离1.1.培养和分离实验步骤：培养和分离实验步骤：步步骤骤具体操作具体操作培养基培养基灭灭菌菌倒平板倒平板接种接种划划线线分离分离培养培养观观察察将将50 mL LB50 mL LB液体培养基、液体培养基、50 mL LB50 mL LB固体培养基和培固体培养基和培养皿进行养皿进行高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌在酒精灯火焰旁将固体培养基倒入在酒精灯火焰旁将固体培养基倒入4 4个灭菌的培养个灭菌的培养皿中，并水平放置使之形成平面皿中，并水平放置使之形成平面在装有液体培养基的在装有液体培养基的三角瓶三角瓶中接种大肠杆菌，在摇中接种大肠杆菌，在摇床上床上3737振荡培养振荡培养12 h12 h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一次，在固体培养基的平板上次，在固体培养基的平板上连续划线连续划线，盖好培养皿，盖好培养皿将培养皿倒置，放在将培养皿倒置，放在3737恒温箱中培养恒温箱中培养12 12 24 h24 h后，可看到在划线的末端出现不连续的后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落单个菌落第10页/共57页保存菌种保存菌种(书书P.23)P.23)用用接种环接种环取出单个菌落，用取出单个菌落，用划线法划线法接种在斜面培养基上，接种在斜面培养基上，37 37 培养培养24 h24 h后，置于后，置于4 4 冰箱中保冰箱中保存存 第11页/共57页2.2.纯化大肠杆菌的方法：纯化大肠杆菌的方法：常用的微生物接种方法有常用的微生物接种方法有划线分离法和划线分离法和涂布分离法涂布分离法。(1)(1)划线分离法：划线分离法：是通过接种环在琼脂固是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(2)(2)涂布分离法：涂布分离法：是将菌液进行一系列的是将菌液进行一系列的梯度稀释梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。培养。第12页/共57页3.3.两种纯化细菌方法的比较：两种纯化细菌方法的比较：项目项目优点优点缺点缺点适用范围适用范围划线分划线分离法离法操作方法简单，操作方法简单，可以观察菌落可以观察菌落特征，对混合特征，对混合菌进行菌进行分离分离不能不能计数计数适用于好氧菌适用于好氧菌涂布分涂布分离法离法可以可以计数计数，可，可以观察菌落特以观察菌落特征征稀释量少，操稀释量少，操作麻烦，平板作麻烦，平板不干燥效果不不干燥效果不好，容易污染好，容易污染适用于厌氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌和兼性厌氧菌第13页/共57页1 1.线条不重叠 2 2-3.从上次的末端开始，交叉23条线3 4 4.最后的划线不能与第一区相连。第14页/共57页第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域第15页/共57页【高考警示】划线分离法中接种环的使用【高考警示】划线分离法中接种环的使用(1)(1)划线分离操作中第一次划线前及划线结束后需灼烧接种环，其目划线分离操作中第一次划线前及划线结束后需灼烧接种环，其目的不同。的不同。操作操作第一次划第一次划线线前灼前灼烧烧划划线结线结束后灼束后灼烧烧目的目的避免接种避免接种环环上可能存在上可能存在的微生物的微生物污污染培养基染培养基杀杀死接种死接种环环上残留的菌种，上残留的菌种，避免避免细细菌菌污污染染环环境和感染境和感染操作者操作者第16页/共57页(2)(2)平板划线操作的注意事项。平板划线操作的注意事项。第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。菌种。划线时最后一区不要与第一区相连。划线时最后一区不要与第一区相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。第17页/共57页考点三考点三 分离以尿素为氮源的微生物分离以尿素为氮源的微生物1 1菌种特点菌种特点 含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2 2培养基培养基以以尿素尿素为唯一氮源的培养基培养，以为唯一氮源的培养基培养，以LBLB全营养全营养培养基为对照。培养基为对照。3.3.实验原理：实验原理：(1)(1)以以尿素尿素为唯一氮源的培养基培养细菌时，只有含有为唯一氮源的培养基培养细菌时，只有含有脲酶脲酶的细的细菌能够正常生长，据此可分离出以尿素为氮源的微生物。菌能够正常生长，据此可分离出以尿素为氮源的微生物。(2)(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成细菌合成的脲酶能将尿素分解成NHNH3 3，使，使pHpH升高，使升高，使酚红指示酚红指示剂变红剂变红。第18页/共57页2.2.实验步骤：实验步骤：第19页/共57页3.3.注意事项：注意事项：(1)(1)平板倒置的原因：平板倒置的原因：平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。(2)(2)防止培养基外溅：防止培养基外溅：在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。之间的培养基上滋生。第20页/共57页3.3.注意事项：注意事项：(3)(3)涂布器的灭菌：涂布器的灭菌：玻璃刮刀用玻璃刮刀用70%70%酒精消毒酒精消毒，取出时，多余酒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精灯火焰上引精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精灯火焰上引燃。燃。(4)(4)设置对照：设置对照：可排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提可排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。高实验结果的可信度。第21页/共57页【归纳比较】微生物筛选过程中必要的两种对照培【归纳比较】微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用养基及其作用对照组对照组作用作用现象现象结论结论未接种培未接种培养基养基有无杂菌污染有无杂菌污染的判断的判断未接种的培养皿未接种的培养皿中无菌落生长中无菌落生长未被杂菌污染未被杂菌污染接种的接种的LBLB全营养全营养培养基培养基选择培养基筛选择培养基筛选作用的确选作用的确认认LBLB全营养培养基全营养培养基上的菌落数大上的菌落数大于选择培养基于选择培养基上的数目上的数目选择培养基具有选择培养基具有筛选作用筛选作用第22页/共57页【思维拓展】【思维拓展】选择培养基的选择方法选择培养基的选择方法(1)1)在培养基中加入某种化学物质。在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌，加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。出酵母菌和霉菌，加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的化学物质是在主要营养成分完整的基础上加入的。这里的化学物质是在主要营养成分完整的基础上加入的。(2)(2)改变培养基中的营养成分。改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离出固例如，缺乏氮源时可以分离出固氮微生物，石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染氮微生物，石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。的微生物。(3)(3)改变微生物的培养条件。改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。养，可以得到耐高温的微生物。第23页/共57页类型一类型一 培养基及无菌技术培养基及无菌技术【典例【典例1 1】(2015(2015绍兴模拟绍兴模拟)请回答下列与大肠杆菌有关的问题。请回答下列与大肠杆菌有关的问题。(1)(1)从生态系统的成分上看，从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于大肠杆菌属于。分解者分解者第24页/共57页成分成分含量含量蛋白蛋白胨胨10.0 g10.0 g乳糖乳糖5.0 g5.0 g蔗糖蔗糖5.0 g5.0 gK K2 2HPOHPO4 42.0 g2.0 g显显色色剂剂0.2 g0.2 g琼琼脂脂12.0 g12.0 g将上述物将上述物质质溶解后，用蒸溶解后，用蒸馏馏水定容到水定容到1 000 mL1 000 mL(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。第25页/共57页根据物理状态划分，该培养基属于根据物理状态划分，该培养基属于(固体、液体固体、液体)培养基。培养基。该培养基中的碳源是该培养基中的碳源是。(3)(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行皿进行(填填“消毒消毒”或或“灭菌灭菌”)；操作者的双手需要进；操作者的双手需要进行清洗和行清洗和。空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外。空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能线能使蛋白质变性，还能 。(2)(2)固体乳糖、蔗糖、蛋白胨固体乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)(3)灭菌消毒损伤灭菌消毒损伤DNADNA的结构的结构第26页/共57页(4)(4)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入上牛皮纸并用皮筋勒紧放入中灭菌，温中灭菌，温度为度为，时间为，时间为。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到大气压时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管力自然降到大气压时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应应。(5)(5)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入。把锅内。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将锅密闭。若在灭菌前，水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将锅密闭。若在灭菌前，没有排尽锅内的冷空气会导致没有排尽锅内的冷空气会导致 。(4)(4)高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅12112115 min15 min废弃废弃(5)(5)适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底第27页/共57页(6)(6)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯(选填选填“内焰内焰”或或“外焰外焰”)灭菌，并且待接种环灭菌，并且待接种环后后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适宜温蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适宜温度下培养，长成菌落后放入度下培养，长成菌落后放入冰箱中保存。冰箱中保存。(6)(6)外焰冷却外焰冷却44第28页/共57页【解析】【解析】(1)(1)大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆菌属于分解者。菌属于分解者。(2)(2)表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)(3)微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能损伤损伤DNADNA的结构。的结构。第29页/共57页(4)(4)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为1 kg/cm1 kg/cm2 2、温度为、温度为121121条件下，灭菌条件下，灭菌15 min15 min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应废弃。应废弃。(5)(5)使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还有可能损坏设备。有可能损坏设备。(6)(6)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，否则会杀死菌种造成实验失败。否则会杀死菌种造成实验失败。第30页/共57页【互动探究】【互动探究】(1)(1)培养大肠杆菌除用题中所给培养基外，还可用何种培养基？培养大肠杆菌除用题中所给培养基外，还可用何种培养基？提示：提示：LBLB液体培养基。液体培养基。(2)(2)表中的培养基在配制时应如何操作？表中的培养基在配制时应如何操作？提示：提示：表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引起琼脂糊底而使烧杯炸裂。起琼脂糊底而使烧杯炸裂。第31页/共57页【加固训练】【加固训练】(2015(2015嘉兴模拟嘉兴模拟)下面是肺炎双球菌离体转化实验的主下面是肺炎双球菌离体转化实验的主要步骤：要步骤：第32页/共57页(1)(1)实验用的器皿必须是无菌的，常用实验用的器皿必须是无菌的，常用法灭菌。用此法对培法灭菌。用此法对培养基灭菌时，常将培养基装在养基灭菌时，常将培养基装在(器皿器皿)中进行。中进行。(2)(2)实验操作需在超净工作台上进行。工作台上，实验前一段时间需实验操作需在超净工作台上进行。工作台上，实验前一段时间需打开，而实验中需关闭的是打开，而实验中需关闭的是。A.A.酒精灯酒精灯 B.B.照明灯照明灯C.C.过滤风过滤风 D.D.紫外灯紫外灯(3)(3)平面培养基与悬浮培养所用的培养基相比，应增加的成分是平面培养基与悬浮培养所用的培养基相比，应增加的成分是。答案：答案：(1)(1)高压蒸汽灭菌三角瓶高压蒸汽灭菌三角瓶(2)D(2)D(3)(3)琼脂琼脂第33页/共57页(4)(4)常用涂布法给平面培养基接种。下列叙述错误的是常用涂布法给平面培养基接种。下列叙述错误的是()A.A.接种的目的是使细菌相互分离接种的目的是使细菌相互分离B.B.接种需过滤除去杂菌后进行接种需过滤除去杂菌后进行C.C.接种工具需灼烧后使用接种工具需灼烧后使用D.D.接种需在酒精灯火焰旁进行接种需在酒精灯火焰旁进行(5)(5)在在3737恒温箱中培养时，培养皿需恒温箱中培养时，培养皿需，主要目的是避免水，主要目的是避免水滴影响滴影响的形成。的形成。(6)(6)培养后，如果观察到菌落重叠，则在涂布法接种之前需进行培养后，如果观察到菌落重叠，则在涂布法接种之前需进行操作。操作。B B(5)(5)倒置单菌落倒置单菌落(6)(6)稀释菌液稀释菌液第34页/共57页【解析】【解析】(1)(1)微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。法进行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。(2)(2)在超净工在超净工作台上操作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。作台上操作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。(3)(3)平面平面培养基因含有琼脂而呈固体或半固体状态。培养基因含有琼脂而呈固体或半固体状态。(4)(4)接种的目的是为接种的目的是为了得到所需要的细菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌了得到所需要的细菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌大小差不多，所以用过滤的方法是不能除去杂菌的。大小差不多，所以用过滤的方法是不能除去杂菌的。(5)(5)培养皿培养皿在培养箱中应倒置，防止水滴滴落污染培养基，影响单菌落的在培养箱中应倒置，防止水滴滴落污染培养基，影响单菌落的形成。形成。(6)(6)如果菌落重叠，说明菌液浓度过高，需要稀释。如果菌落重叠，说明菌液浓度过高，需要稀释。第35页/共57页类型二类型二 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离【典例【典例2 2】大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有中含有10109 9个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：此回答下列问题：第36页/共57页(1)(1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。该方法首先配制定。该方法首先配制LBLB培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至6060，在，在旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取定倍数的稀释，取0.1 mL0.1 mL奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用用涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中数目；该数据比实际数值要数目；该数据比实际数值要 (填填“高高”或或“低低”)，原因是原因是 。实验完成后需要对培养基进行。实验完成后需要对培养基进行处理，然后处理，然后才能倒掉。才能倒掉。(1)(1)固体酒精灯火焰玻璃刮刀固体酒精灯火焰玻璃刮刀(涂布棒涂布棒)菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落灭菌个菌落灭菌第37页/共57页(2)(2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制LBLB 培养基，灭菌后，将培养基，灭菌后，将在酒精灯火焰上烧红后冷却，然在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养养h h即可。即可。(2)(2)液体接种环液体接种环12 12 第38页/共57页【解析】【解析】(1)(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。(2)(2)对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种取带菌的培养物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种培养培养12 h12 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。，每毫升培养基中就有几亿个细菌。第39页/共57页【加固训练】【加固训练】(2015(2015杭州模拟杭州模拟)大肠杆菌是生活在人和高等动物体大肠杆菌是生活在人和高等动物体内的一种常见细菌，在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污内的一种常见细菌，在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污染的指示菌，在遗传学上常作为实验材料，在基因工程中常用它作染的指示菌，在遗传学上常作为实验材料，在基因工程中常用它作为受体细胞，为人类的健康和科学技术的发展作出了许多贡献。为受体细胞，为人类的健康和科学技术的发展作出了许多贡献。请回答下列有关大肠杆菌的问题：请回答下列有关大肠杆菌的问题：(1)(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、易和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、易培养、培养、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。第40页/共57页(2)(2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是分离大肠杆菌时常用的接种方法是法和法和法。前者操作简单，后者法。前者操作简单，后者更易分开，更易分开，但操作复杂些。但操作复杂些。(3)(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察宜的温度下放置适当的时间，观察。第41页/共57页(4)(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是()A.A.严格操作、多次重复严格操作、多次重复B.B.保证待测样品稀释的浓度比较合适保证待测样品稀释的浓度比较合适C.C.倒平板培养倒平板培养D.D.计数所有菌落，取其平均值计数所有菌落，取其平均值(5)(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等等对细菌进行初步的鉴定对细菌进行初步的鉴定(或分类或分类)。第42页/共57页【解题指南】【解题指南】解答本题的关键有两个方面：解答本题的关键有两个方面：(1)(1)在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。(2)(2)菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不能用单个的细菌进行菌种鉴定。能用单个的细菌进行菌种鉴定。第43页/共57页【解析】【解析】(1)(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜的温度、酸碱度的温度、酸碱度(pH)(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。(2)(2)分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方法简单；后者单菌落更易分开，但操作复杂些。法简单；后者单菌落更易分开，但操作复杂些。第44页/共57页(3)(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根据菌落数量的多少判断污染程度。据菌落数量的多少判断污染程度。第45页/共57页(4)(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；保证待测样品稀释的浓度比较合适。保证待测样品稀释的浓度比较合适。(5)(5)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。进行初步的鉴定。第46页/共57页答案：答案：(1)(1)温度酸碱度温度酸碱度(pH)(pH)生活周期短生活周期短(或繁殖快或繁殖快)(2)(2)划线分离涂布分离单菌落划线分离涂布分离单菌落(3)(3)培养基上是否有菌落产生培养基上是否有菌落产生(4)D(4)D(5)(5)菌落特征菌落特征第47页/共57页类型三类型三 分离以尿素为氮源的微生物分离以尿素为氮源的微生物【典例【典例3 3】(2012(2012浙江高考浙江高考)幽门螺杆菌幽门螺杆菌(Hp)(Hp)感染是急慢性胃炎和消感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：分离培养。实验基本步骤如下：第48页/共57页请回答：请回答：(1)(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为HpHp含含有有，它能以尿素作为氮源；若有，它能以尿素作为氮源；若有HpHp，则菌落周围会出，则菌落周围会出现现 色环带。色环带。(2)(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。灭菌。A.A.高压蒸汽高压蒸汽 B.B.紫外灯照射紫外灯照射C.70%C.70%酒精浸泡酒精浸泡 D.D.过滤过滤脲酶脲酶红红D D第49页/共57页(3)(3)步骤步骤X X表示表示。在无菌条件下操作时，先将菌液稀。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液释，然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得为了获得菌落。菌落。(4)(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在在培养时，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置中。若不倒置培养，将导致培养，将导致 。(5)(5)临床上用临床上用1414C C呼气实验检测人体是否感染呼气实验检测人体是否感染HpHp，其基本原理是，其基本原理是HpHp能将能将1414C C标记的标记的分解为分解为NHNH3 3和和1414COCO2 2。接种接种涂布涂布单单恒温培养箱恒温培养箱无法形成单菌落无法形成单菌落尿素尿素第50页/共57页【解析】【解析】(1)(1)幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为NHNH3 3和和COCO2 2，故，故尿素为氮源。尿素为氮源。NHNH3 3为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色环为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色环带。带。(2)(2)尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。(3)(3)由细菌和真菌培养操作步骤可知，由细菌和真菌培养操作步骤可知，X X为接种。接种时，应将菌种均为接种。接种时，应将菌种均匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。(4)(4)为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。(5)(5)用用1414C C标记尿素，分解后标记物全部在标记尿素，分解后标记物全部在COCO2 2中。中。第51页/共57页【加固训练】【加固训练】尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：第52页/共57页(1)(1)上图是利用上图是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。分散到培养基的表面。(2)(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行行 。划线划线稀释稀释灭菌灭菌第53页/共57页(3)(3)下表是一种培养基配方：下表是一种培养基配方：制备培养基的操作步骤是制备培养基的操作步骤是()a.a.倒平板倒平板b.b.计算计算c.c.溶化溶化d.d.称量称量e.e.灭菌灭菌A.abcdeA.abcde B.ebdcaB.ebdcaC.bdcaeC.bdcae D.bdceaD.bdceaK K2 2HPOHPO4 4NaClNaClH H2 2O O葡萄糖葡萄糖尿素尿素酚酚红红琼琼脂糖脂糖0.12 g0.12 g0.12 g0.12 g15 mL15 mL0.025 g0.025 g2.0 g2.0 g0.25 mg0.25 mg0.5 g0.5 gD D第54页/共57页该培养基属于该培养基属于培养基培养基(多选多选)()A.A.液体液体B.B.固体固体C.C.鉴定鉴定D.D.选择选择E.E.天然天然使用该培养基的目的是使用该培养基的目的是 。在培养基中加入在培养基中加入指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。素。(4)(4)在进行分离分解尿素的细菌实验时，在进行分离分解尿素的细菌实验时，A A同学从培养基上筛选出大约同学从培养基上筛选出大约150150个菌落，而其他同学只选择出大约个菌落，而其他同学只选择出大约5050个菌落。个菌落。A A同学的实验结果产同学的实验结果产生的原因可能有生的原因可能有(多选多选)()A.A.由于土样不同由于土样不同B.B.由于培养基污染由于培养基污染C.C.由于操作失误由于操作失误D.D.没有设置对照没有设置对照B B、D D筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌A A、B B、C C 酚红酚红第55页/共57页【解析】【解析】(1)(1)图中的接种方法是划线法，该方法随着划线次数的增多