菊花的组织培养经典讲稿.ppt

关于菊花的组织培养经典第一页，讲稿共四十五页哦第二页，讲稿共四十五页哦菊花的组织培养菊花的组织培养第三页，讲稿共四十五页哦有丝分裂有丝分裂受精卵受精卵细细胞胞分分化化 在个体发育中，由一个或一种细在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。生理功能上发生稳定性差异的过程。1、细胞分化的概念、细胞分化的概念知识回顾（一）知识回顾（一）第四页，讲稿共四十五页哦 黑色素细胞在体外培养黑色素细胞在体外培养30多代后仍能合成黑多代后仍能合成黑色素；离体培养的上皮细胞，始终保持为上皮细色素；离体培养的上皮细胞，始终保持为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。胞，而不会变成其他类型的细胞。2、稳定性、稳定性3、不可逆性、不可逆性细胞分化发生在整个生命进程中。细胞分化发生在整个生命进程中。1、持久性、持久性2、细胞分化的特点、细胞分化的特点 造血干细胞造血干细胞 原红细胞原红细胞 早幼红细胞早幼红细胞 中幼红细胞中幼红细胞 晚幼红细胞晚幼红细胞 成熟红细胞成熟红细胞 死亡死亡4、普遍性、普遍性第五页，讲稿共四十五页哦 细胞分化是细胞分化是否意味着细胞否意味着细胞中遗传物质的中遗传物质的改变？改变？遗传物质遗传物质没有改变没有改变，不同组织的细胞共同来不同组织的细胞共同来源于受精卵，经有丝分源于受精卵，经有丝分裂产生。裂产生。第六页，讲稿共四十五页哦3、细胞分化的实质、细胞分化的实质A AB BD DC CE EEDCA BEDCA BEDCA BEDCA B基因基因在个体发育过程中，不同细胞中遗传在个体发育过程中，不同细胞中遗传信息的执行情况不同即基因的选择性信息的执行情况不同即基因的选择性表达的过程表达的过程第七页，讲稿共四十五页哦 红细胞红细胞合成血红蛋白合成血红蛋白 (不不合成肌动蛋白合成肌动蛋白)肌细胞肌细胞肌动蛋白基因开启肌动蛋白基因开启合成肌动蛋白合成肌动蛋白 (不不合成血红蛋白合成血红蛋白)肌动蛋白基因关闭肌动蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因开启血红蛋白基因开启4、细胞分化的结果、细胞分化的结果细胞产生了不同种类的蛋白质即出现了不同细胞产生了不同种类的蛋白质即出现了不同的结构和功能的结构和功能第八页，讲稿共四十五页哦愈伤组织愈伤组织胚状体胚状体19581958，美国，斯图，美国，斯图尔德尔德 植物组织培养植物组织培养离体回顾知识（二）第九页，讲稿共四十五页哦（一）、植物组织培养概念（一）、植物组织培养概念关键词：关键词：外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组织 在在无菌无菌和和人工控制人工控制条件下，将离体条件下，将离体的植物的植物器官、组织、细胞器官、组织、细胞，培养在人工，培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生愈伤组织再分化形成诱导其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽，最终形成丛芽，最终形成完整的植株完整的植株。又称：又称：植物离植物离体培养体培养第十页，讲稿共四十五页哦脱分化（或去分化）脱分化（或去分化）：由高度分化的植物组织或细由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。胞产生愈伤组织的过程。再分化再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。又可以重新分化成根或芽等器官的过程。外植体外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段用于离体培养的植物器官或组织片段。愈伤组织愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度：细胞排列疏松、无规则、高度 液泡化的无定形的薄壁细胞。液泡化的无定形的薄壁细胞。第十一页，讲稿共四十五页哦切取切取形成层形成层无菌无菌接种接种诱导愈伤组织诱导愈伤组织的形成的形成试管苗的形成试管苗的形成培养室培养室移栽移栽脱分化脱分化再分化再分化（二）、植物组织培养的基本过程（二）、植物组织培养的基本过程第十二页，讲稿共四十五页哦植物组织培养过程植物组织培养过程:离离体体组组织织或或细细胞胞植植植植物物物物体体体体脱分化脱分化细胞分细胞分裂素裂素生长素生长素愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织芽芽根根根根细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细细细细胞胞胞胞分分分分裂裂裂裂素素素素 生长素生长素生长素生长素细细细细胞胞胞胞分分分分裂裂裂裂素素素素有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长第二十三页，讲稿共四十五页哦思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素生长素生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素高高高高 利于根的形成利于根的形成利于根的形成利于根的形成适中适中适中适中 利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成第二十四页，讲稿共四十五页哦供参考的配方1、诱导菊花愈伤组织：在在MS培养基中加入培养基中加入BA和和NAA，质量浓度均，质量浓度均为为0.5mg、诱导菊花从芽：在在MS培养基中加入培养基中加入BA和和NAA，质量浓度分，质量浓度分别为别为2-3mg和和0.020.03mg3、诱导菊花生根：在在MS培养基各成分用量减半，并添加入培养基各成分用量减半，并添加入NAA或或IAA，质量浓度均为，质量浓度均为0.1mg第二十五页，讲稿共四十五页哦(4)(4)、pHpH、温度、光照、温度、光照（菊花组织培养为例）（菊花组织培养为例）pHpH=5.8 =5.8 温度控制在温度控制在1822 1822 每日光照每日光照1212h h第二十六页，讲稿共四十五页哦制备制备MS固体固体培养基培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽冲洗冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯氯化汞化汞无菌水冲洗至少三次无菌水冲洗至少三次之上之上配制各种母液配制各种母液配制培养基配制培养基灭菌灭菌第二十七页，讲稿共四十五页哦（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4保存保存配制好的培养基配制好的培养基母液母液来制备来制备来制备来制备1 1、配制各种母液、配制各种母液无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩10101010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩100100100100倍，倍，常温保存常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml1mg/ml1mg/ml1mg/ml的质量浓度的质量浓度单独单独配制成母液配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量数，计算用量第二十八页，讲稿共四十五页哦2 2、配制培养基、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素必添加植物激素3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌汽灭菌第二十九页，讲稿共四十五页哦1 1 1 1、选材：、选材：、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2 2 2、消毒、消毒、消毒、消毒流水冲洗流水冲洗流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在刷洗，刷洗后在流水流水下冲洗下冲洗下冲洗下冲洗20min20min20min20min左右左右 酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分体积分数为数为7070的酒精的酒精中摇动中摇动中摇动中摇动2 2 2 23 3次，持续次，持续6 67s7s7s7s，立即将，立即将，立即将，立即将外植体取出，在外植体取出，在外植体取出，在外植体取出，在无菌水无菌水中清洗中清洗 消毒液处理消毒液处理消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质质质质量分数为量分数为量分数为量分数为0.10.10.10.1的氯化汞溶液的氯化汞溶液中中1 1 1 12min2min2min2min，取出后在，取出后在，取出后在，取出后在无无无无菌水菌水菌水菌水中至少清洗中至少清洗3 3次，漂净次，漂净次，漂净次，漂净消毒液消毒液第三十页，讲稿共四十五页哦（三）接种（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用重要的。用重要的。用重要的。用7070的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20202020分钟分钟分钟分钟1 1、接种室消毒、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在操作要在操作要在操作要在酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火完成，每次使用器械后，都需要用火完成，每次使用器械后，都需要用火完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种第三十一页，讲稿共四十五页哦4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为7070的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种冷却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜形瓶的大小确定，一般胡萝卜形瓶的大小确定，一般胡萝卜形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 3 3 34 4 4 4块，菊的茎或叶块，菊的茎或叶6 68 8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件光照条件插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分培养基利于吸收水分和养分第三十三页，讲稿共四十五页哦正常苗正常苗污染苗污染苗第三十四页，讲稿共四十五页哦1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种器、培养基及接种器具灭菌不彻底具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径第三十五页，讲稿共四十五页哦思考：你打算做几组重复？你打算设置对思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第三十六页，讲稿共四十五页哦（四）培养（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒期间应定期消毒培养温度控制在培养温度控制在18-22每日用日光灯光照每日用日光灯光照12h第三十七页，讲稿共四十五页哦（五）移栽（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间3 3、移栽、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中第三十八页，讲稿共四十五页哦固体基质型，含水量高、固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培蓄水性强、透性好，适合栽培珍珠岩珍珠岩,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩被命名为珍珠岩。蛭石蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。第三十九页，讲稿共四十五页哦（六）栽培（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花第四十页，讲稿共四十五页哦1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？第四十一页，讲稿共四十五页哦结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格第四十二页，讲稿共四十五页哦五、课题延伸五、课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养进行组织培养2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季第四十三页，讲稿共四十五页哦练习练习1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。好，容易诱导脱分化和再分化。第四十四页，讲稿共四十五页哦感感谢谢大大家家观观看看第四十五页，讲稿共四十五页哦