金黄色葡萄球菌检验与计数.ppt

金黄色葡萄球菌检验与计数现在学习的是第1页，共46页概况概况葡萄球菌属微球菌科，本菌有葡萄球菌属微球菌科，本菌有1919个菌种，从个菌种，从人体上可检出人体上可检出1212个种。个种。葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。性炎症，又称为化脓性球菌。现在学习的是第2页，共46页金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌的生物学特性形态与染色：形态与染色：金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.40.41.2m1.2m，大小不一，平均直径约为，大小不一，平均直径约为0.8m0.8m。革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、无芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转无芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。为革兰氏阴性。现在学习的是第3页，共46页培养特性：培养特性：易培养，对营养要求不高，在普通培养基中易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。生长良好。需氧或兼性厌氧。需氧或兼性厌氧。最适生长温度最适生长温度37C37C，最适生长，最适生长pH 7.4pH 7.4。耐。耐盐性强，在含盐性强，在含101015%15%的氯化钠培养基中仍的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。能生长，可用于筛选菌种。在普通营养琼脂平板上培养在普通营养琼脂平板上培养18182424，可形，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。色素只局限于菌落内，不渗至培养中。现在学习的是第4页，共46页在血平板上可形成明显透明的溶血环。为在血平板上可形成明显透明的溶血环。为型溶血。型溶血。可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。围有白色沉淀环的菌落。大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、酸不产气。甲基红试验、VPVP试验多为阳性，试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。不产生靛基质。触酶阳性。现在学习的是第5页，共46页金黄色葡萄球菌的酶金黄色葡萄球菌的酶金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNADNA酶。酶。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌关。一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。否则为无致病力的菌株。血浆凝菌株有致病力。否则为无致病力的菌株。血浆凝固酶对热稳定，能抵抗固酶对热稳定，能抵抗6030min6030min甚至甚至10030min10030min后，仍能保存大部分活性。后，仍能保存大部分活性。耐热耐热DNADNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球菌致病力的指标之一。该酶的最适球菌致病力的指标之一。该酶的最适pHpH为为9.09.0。现在学习的是第6页，共46页金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。量肠毒素而导致的。近年报导表明，近年报导表明，50%50%以上的金黄色葡萄球菌菌株以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且在实验室条件下可产生肠毒素，并且1 1个菌株能个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。产生两种或两种以上的肠毒素。肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为肽链组成。分子量约为30003000左右。易溶于水，左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。难溶于有机溶剂。金黄色葡萄球菌的肠毒素金黄色葡萄球菌的肠毒素现在学习的是第7页，共46页耐热，经耐热，经100100煮沸煮沸30min30min不被破坏，也不受胰蛋不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般白酶的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般烹调温度不能将其破坏。烹调温度不能将其破坏。218248 218248 的油中需的油中需30min30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。才能被破坏。可引起急性胃肠炎。根据肠毒素的血清型，可分根据肠毒素的血清型，可分A A、B B、C C（C C1 1、C C2 2）、）、D D、E 5 E 5 个型。个型。A A型肠毒素引起的食物中毒较多，型肠毒素引起的食物中毒较多，约占约占50%50%左右。其他依次为左右。其他依次为D D、C C、B B和和E E型。也有型。也有A AD D、A AB B、A AC C、B BC C等。等。现在学习的是第8页，共46页A A型肠毒素毒力较强，摄入型肠毒素毒力较强，摄入1g1g即可引起中即可引起中毒；毒；B B型毒力较弱摄入型毒力较弱摄入25g25g，才引起中毒。，才引起中毒。一般认为引起人中毒的最小剂量是一般认为引起人中毒的最小剂量是1.07.2g/kg1.07.2g/kg。现在学习的是第9页，共46页金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验现在学习的是第10页，共46页金黄色葡萄球菌的检测程序金黄色葡萄球菌的检测程序检样检样检样检样25g(mL)25g(mL)25g(mL)25g(mL)225mL225mL225mL225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液生理盐水或磷酸盐缓冲液生理盐水或磷酸盐缓冲液生理盐水或磷酸盐缓冲液7.5%7.5%7.5%7.5%氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或10%10%10%10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤氯化钠胰酪胨大豆肉汤氯化钠胰酪胨大豆肉汤氯化钠胰酪胨大豆肉汤361361361361Baird-ParkerBaird-ParkerBaird-ParkerBaird-Parker平板，血平板平板，血平板平板，血平板平板，血平板涂片染色涂片染色涂片染色涂片染色观察溶血观察溶血观察溶血观察溶血血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验报告报告报告报告血平板血平板血平板血平板1824h1824h1824h1824h，Baird-ParkerBaird-ParkerBaird-ParkerBaird-Parker平板平板平板平板1824h1824h1824h1824h或或或或4548h4548h4548h4548h。BHIBHIBHIBHI肉汤和营养琼脂小斜面肉汤和营养琼脂小斜面肉汤和营养琼脂小斜面肉汤和营养琼脂小斜面3613613613611824h1824h1824h1824h现在学习的是第11页，共46页增菌培养基增菌培养基7.5%7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐海洋菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。所抑制。胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%10%，以胰酪，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡萄球菌的生长。葡萄糖促进葡萄球菌的生长。现在学习的是第12页，共46页样品的稀品的稀释固体和半固体样品：称取固体和半固体样品：称取25g25g样品至盛有样品至盛有225 225 mLmL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，杯内，8000r/min8000r/min10000 r/min10000 r/min均质均质1min1min2min2min，或放入盛有，或放入盛有225 mL225 mL稀释液的无菌均质稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打袋中，用拍击式均质器拍打1min1min2min2min，制，制成成1:101:10的样品匀液。的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取液体样品：以无菌吸管吸取25mL25mL样品至盛有样品至盛有225mL225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，中，充分混匀，制成充分混匀，制成1:101:10的样品匀液。的样品匀液。现在学习的是第13页，共46页增菌与分离培养增菌与分离培养增菌培养：吸取增菌培养：吸取5mL5mL上述样品匀液，接种于上述样品匀液，接种于50mL 7.5%50mL 7.5%氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或10%10%胰酪胨大豆肉汤胰酪胨大豆肉汤培养基内，培养基内，361361培养培养18h18h24h24h。金黄色。金黄色葡萄球菌在葡萄球菌在7.5%7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在污染严重时在10%10%胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。长。将上述培养物，分别划线接种到将上述培养物，分别划线接种到Baird-Baird-ParkerParker平板和血平板，血平板平板和血平板，血平板361361培养培养18h18h24h24h。Baird-ParkerBaird-Parker平板平板361361培养培养18h18h24h24h或或45h45h48h48h。现在学习的是第14页，共46页分离培养基分离培养基Baird-ParkerBaird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能促进酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色和晕圈。金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄色葡萄球菌的生长。色葡萄球菌的生长。金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润，直径约起、湿润，直径约23mm23mm，颜色呈灰色到黑，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈的树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈的非典型菌落。非典型菌落。现在学习的是第15页，共46页长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。粗糙并干燥。现在学习的是第16页，共46页金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌空白培养基空白培养基培养基培养基 用途用途 测试菌株菌株参考培养基参考培养基控制方法控制方法判定判定标准准特性反特性反应Baird-Parker生生长率率金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC6538；金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC25923 TSA 定量定量PR0.5黑色黑色/灰色菌落灰色菌落带透明透明带选择性性大大肠埃希氏菌埃希氏菌ATCC25922或或8739 -定性定性全部全部抑制抑制特异性特异性表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌ATCC12228 -定性定性-黑色黑色/灰色菌落灰色菌落无透明无透明带现在学习的是第17页，共46页分离培养基分离培养基血琼脂：是一种基础培养基，含有血琼脂：是一种基础培养基，含有5%5%的脱纤的脱纤维血维血(羊血或兔血羊血或兔血)。用于观察金黄色葡萄球。用于观察金黄色葡萄球菌的溶血现象。金黄色葡萄球菌在血琼脂平菌的溶血现象。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上呈板上呈溶血。溶血。金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的面光滑，周围有透明的溶血环。溶血环。现在学习的是第18页，共46页金黄色葡萄球菌的重要鉴定金黄色葡萄球菌的重要鉴定-血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤维蛋白，附着于细菌表面维蛋白，附着于细菌表面 ，产生凝固。，产生凝固。金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与细胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；另与细胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固一种是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。二者的抗原性不同。酶。二者的抗原性不同。现在学习的是第19页，共46页血血浆凝固凝固酶试验 挑取挑取BairdBairdParkerParker平板或血平板上可疑菌落平板或血平板上可疑菌落1 1个或以上，分别接种到个或以上，分别接种到5mL BHI5mL BHI和营养琼脂和营养琼脂小斜面，小斜面，361361培养培养18 h18 h24 h24 h。取新鲜配置兔血浆取新鲜配置兔血浆0.5mL0.5mL，放入小试管中，再，放入小试管中，再加入可疑菌落的加入可疑菌落的BHIBHI培养物培养物0.2mL0.2mL0.3mL0.3mL，振，振荡摇匀，置荡摇匀，置361361温箱或水浴箱内，每半温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察小时观察一次，观察6h6h，如呈现凝固（即将，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，判定为阳性结果。大于原体积的一半，判定为阳性结果。现在学习的是第20页，共46页同时以血浆凝固酶试验阳性和阴同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。为对照。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到面的菌落到5mL BHI5mL BHI，361361培养培养18h18h48h48h，重复实验。，重复实验。现在学习的是第21页，共46页结果果报告告如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌萄球菌 。报告在报告在25g25g（mLmL）样品中检出或未检出金黄色）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。葡萄球菌。现在学习的是第22页，共46页影响血浆凝固酶试验的因素影响血浆凝固酶试验的因素血浆：血浆凝固酶试验可选用人血浆或兔血血浆：血浆凝固酶试验可选用人血浆或兔血浆。用人血浆出现凝固的时间短，约浆。用人血浆出现凝固的时间短，约93.6%93.6%的阳性菌在的阳性菌在1h1h内出现凝固。用兔血浆内出现凝固。用兔血浆1h1h内出内出现凝固的阳性菌株仅达现凝固的阳性菌株仅达86%86%，大部分菌株可，大部分菌株可在在6h6h内出现凝固。内出现凝固。若被检菌为陈旧的培养物（超过若被检菌为陈旧的培养物（超过1824h1824h），），或生长不良，可能造成凝固酶活性低，出现或生长不良，可能造成凝固酶活性低，出现假阴性。假阴性。现在学习的是第23页，共46页不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落做血浆不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落做血浆凝固酶的实验，因所有高盐培养基都可以抑凝固酶的实验，因所有高盐培养基都可以抑制制A A蛋白的产生，造成假阴性结果。蛋白的产生，造成假阴性结果。不要用力振摇试管，以免凝块振碎。不要用力振摇试管，以免凝块振碎。实验必需设阳性实验必需设阳性(标准金黄色葡萄球菌标准金黄色葡萄球菌)、阴、阴性性(白色葡萄球菌白色葡萄球菌)、空白、空白(肉汤肉汤)对照。对照。玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检测两种凝固酶。因此，两种试验所得结果可测两种凝固酶。因此，两种试验所得结果可完全不同。完全不同。玻片法只用于筛选。玻片法只用于筛选。现在学习的是第24页，共46页 金黄色葡萄球菌计数金黄色葡萄球菌计数现在学习的是第25页，共46页第一法第一法 Baird Parker Baird Parker 平板法平板法第二法第二法MPNMPN法法第三法第三法PetrifilmPetrifilmTMTM测试片法测试片法现在学习的是第26页，共46页第一法第一法:平板计数法平板计数法现在学习的是第27页，共46页检验程序检验程序检样检样检样检样25g(mL)25g(mL)25g(mL)25g(mL)225mL225mL225mL225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液生理盐水或磷酸盐缓冲液生理盐水或磷酸盐缓冲液生理盐水或磷酸盐缓冲液10101010倍稀释倍稀释倍稀释倍稀释选择三个连续的适宜浓度的样品匀液，选择三个连续的适宜浓度的样品匀液，选择三个连续的适宜浓度的样品匀液，选择三个连续的适宜浓度的样品匀液，接种接种接种接种Baird-ParkerBaird-ParkerBaird-ParkerBaird-Parker平板平板平板平板计数及血浆酶试验计数及血浆酶试验计数及血浆酶试验计数及血浆酶试验报告报告报告报告3613614548h4548h现在学习的是第28页，共46页样品的接种、培养与典型菌落的确认样品的接种、培养与典型菌落的确认 根据对样品污染状况的估计，选择根据对样品污染状况的估计，选择根据对样品污染状况的估计，选择根据对样品污染状况的估计，选择23232323个适宜稀释度的的个适宜稀释度的的个适宜稀释度的的个适宜稀释度的的样品匀液样品匀液样品匀液样品匀液(液体样品可包括原液液体样品可包括原液液体样品可包括原液液体样品可包括原液)，每个稀释度分别吸取，每个稀释度分别吸取1ml1ml1ml1ml，以，以，以，以0.30.3，0.30.30.30.3，0.4ml0.4ml0.4ml0.4ml接种量，分别加入三块接种量，分别加入三块Baird-ParkerBaird-Parker平板，用平板，用L L棒涂布整个平板，棒涂布整个平板，(注意不要触注意不要触注意不要触注意不要触及平板的边缘及平板的边缘及平板的边缘及平板的边缘)。接种前应注意保持平板的干燥接种前应注意保持平板的干燥(可在可在20502050的培养箱的培养箱中干燥中干燥)，通常情况下涂布后，将平板静置，通常情况下涂布后，将平板静置10min10min，如样，如样液不易吸收，可将平板置液不易吸收，可将平板置361361361361培养培养1h1h1h1h后，再反转平板，后，再反转平板，后，再反转平板，后，再反转平板，倒置于培养箱培养。倒置于培养箱培养。倒置于培养箱培养。倒置于培养箱培养。培养温度与时间：培养温度与时间：361361361361，4548h4548h4548h4548h。典型菌落确认：从典型菌落中任选五个菌落（小于五个典型菌落确认：从典型菌落中任选五个菌落（小于五个全选），分别接种到全选），分别接种到5mLBHI5mLBHI和营养琼脂小斜面，和营养琼脂小斜面，361361361361培养培养1818181824h24h24h24h后进行血浆凝固酶试验。后进行血浆凝固酶试验。现在学习的是第29页，共46页典型菌落典型菌落计数与数与计算公式的算公式的应用用n n计数范围要求：选择合计菌落数在计数范围要求：选择合计菌落数在2020020200的的平板，计数典型菌落。平板，计数典型菌落。现在学习的是第30页，共46页公式一的使用范围：公式一的使用范围：-最低稀释度平板的菌落小于最低稀释度平板的菌落小于20 cfu20 cfu，计数该，计数该稀释度平板上的典型菌落；稀释度平板上的典型菌落；-某一稀释度平板的菌落大于某一稀释度平板的菌落大于200 cfu200 cfu且有典且有典型菌落，但上一稀释度平板上没有典型菌落，型菌落，但上一稀释度平板上没有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；计数该稀释度平板上的典型菌落；-某一稀释度平板的菌落大于某一稀释度平板的菌落大于200 cfu200 cfu且有典且有典型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落，型菌落，且上一稀释度平板上有典型菌落，其平板上的菌落数不在其平板上的菌落数不在20 cfu20 cfu200 cfu200 cfu之间，之间，计数该稀释度平板上的典型菌落；计数该稀释度平板上的典型菌落；现在学习的是第31页，共46页公式一公式一T=AB/Cd T=AB/Cd T:T:样品中金黄色葡萄球菌落数；样品中金黄色葡萄球菌落数；A:A:某一稀释度典型菌落的总数某一稀释度典型菌落的总数 ；B:B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 ；C:C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；d:d:某一稀释度。某一稀释度。现在学习的是第32页，共46页公式公式应用例一用例一 公式一：公式一：T=AB/Cd T=AB/Cd T=65450.1=520 T=65450.1=520样样品稀品稀品稀品稀释释度度度度10101 110102 2典型菌落数典型菌落数典型菌落数典型菌落数6666，64646 6，6 6用于做血用于做血用于做血用于做血浆浆凝固凝固凝固凝固酶酶菌落数菌落数菌落数菌落数5 55 5血血血血浆浆凝固凝固凝固凝固酶酶阳性菌落数阳性菌落数阳性菌落数阳性菌落数4 44 4高、低稀释度平板均有典型菌落，但其中高稀释高、低稀释度平板均有典型菌落，但其中高稀释度二平板的菌落数均不在度二平板的菌落数均不在2020020200之间，选择低稀释之间，选择低稀释度的平板进行计数。度的平板进行计数。现在学习的是第33页，共46页N=T/1.1d N=T/1.1d TT：两个稀释度平板上确认的金黄色葡萄球菌：两个稀释度平板上确认的金黄色葡萄球菌菌落总数之和；菌落总数之和；d d：稀释因子：稀释因子(第一稀释度第一稀释度)。公式二的使用范围：平板菌落数均在公式二的使用范围：平板菌落数均在20 cfu20 cfu200 cfu200 cfu之间。之间。公式引用于公式引用于ISO 6888-1:1999(E)ISO 6888-1:1999(E)公式二公式二现在学习的是第34页，共46页公式公式应用例二用例二 公式二：公式二：N=T/1.1dN=T/1.1d T T1 1=18335=110 T=18335=110 T2 2=2145=17=2145=17 T=T1+T2=110+17=127 T=T1+T2=110+17=127 N=T/1.1d=1271.10.1=1200 N=T/1.1d=1271.10.1=1200 样样品稀品稀品稀品稀释释度度度度10101 110102 2典型菌落数典型菌落数典型菌落数典型菌落数185185，1801802020，2222用于做血用于做血用于做血用于做血浆浆凝固凝固凝固凝固酶酶菌落数菌落数菌落数菌落数5 55 5血血血血浆浆凝固凝固凝固凝固酶酶阳性菌落数阳性菌落数阳性菌落数阳性菌落数3 34 4所有稀释度平板合计菌落数均在所有稀释度平板合计菌落数均在2020020200间：间：现在学习的是第35页，共46页结果报告结果报告单位：单位：cfu/gcfu/g或者或者cfu/mLcfu/mL；若；若T T或者或者N N为为0 0，报告，报告1d1100MPN/g1100MPN/g或或mlml的出现。的出现。-方便方便MPNMPN表的查找。表的查找。现在学习的是第41页，共46页第三法第三法PetrifilmPetrifilmTMTM测试片法测试片法现在学习的是第42页，共46页适用范适用范围PetrifilmPetrifilmTMTM测试片法适用于肉及其制品，奶测试片法适用于肉及其制品，奶制品等。制品等。现在学习的是第43页，共46页PetrifilmPetrifilmTMTM测试片法检验程序测试片法检验程序检样检样检样检样25g(mL)+225mL25g(mL)+225mL25g(mL)+225mL25g(mL)+225mL稀释，匀质，稀释，匀质，稀释，匀质，稀释，匀质，10101010倍系列稀释倍系列稀释倍系列稀释倍系列稀释选择适宜稀释度的样品匀液，各取选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL1mL分别加入纸片分别加入纸片361361361361242h242h242h242h判读判读判读判读没有菌落没有菌落没有菌落没有菌落只有典型紫红色菌落只有典型紫红色菌落只有典型紫红色菌落只有典型紫红色菌落将所有紫红色菌落计数为将所有紫红色菌落计数为将所有紫红色菌落计数为将所有紫红色菌落计数为金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌除典型紫红色菌落外其他颜色的除典型紫红色菌落外其他颜色的除典型紫红色菌落外其他颜色的除典型紫红色菌落外其他颜色的菌落菌落菌落菌落加入确认反应片，加入确认反应片，加入确认反应片，加入确认反应片，361361361361，培养培养培养培养13h13h13h13h有粉红色菌晕的菌落计数为金有粉红色菌晕的菌落计数为金有粉红色菌晕的菌落计数为金有粉红色菌晕的菌落计数为金黄色葡萄球菌黄色葡萄球菌黄色葡萄球菌黄色葡萄球菌报告报告报告报告现在学习的是第44页，共46页第三法第三法 PetrifilmPetrifilmTMTM测试片法测试片法金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌PetrifilmPetrifilmTMTM测试片，含具测试片，含具有显色功能、经改良的有显色功能、经改良的Baird-ParkerBaird-Parker培养基，对培养基，对金黄色葡萄球菌的生长有金黄色葡萄球菌的生长有很强的选择。金黄色葡萄很强的选择。金黄色葡萄球菌在测试片上生成为暗球菌在测试片上生成为暗紫红色的菌落，可以直接紫红色的菌落，可以直接完成鉴定和计数。完成鉴定和计数。现在学习的是第45页，共46页金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌PetrifilmPetrifilmTMTM确认反应片确认反应片金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌PetrifilmPetrifilmTMTM确认反应片含有确认反应片含有显色剂和耐热去氧核糖核酸显色剂和耐热去氧核糖核酸(DNA)(DNA)，金黄色葡，金黄色葡萄球菌可生产耐热萄球菌可生产耐热DNADNA酶，此酶与反应片上的酶，此酶与反应片上的显色剂反应，形成粉红色环。而其他细菌因显色剂反应，形成粉红色环。而其他细菌因不产生耐热不产生耐热DNADNA酶没有该反应。但在葡萄球菌酶没有该反应。但在葡萄球菌属中，猪葡萄球菌、中间葡萄球菌也会产生属中，猪葡萄球菌、中间葡萄球菌也会产生阳性反应。阳性反应。现在学习的是第46页，共46页