酶的改造方法进展讲稿.ppt

关于酶的改造方法进展第一页，讲稿共六十四页哦为什么要进行酶改造？温和的自然体系：温和的自然体系：常温、常压、中性常温、常压、中性pHpH、水环境、水环境极端的工业体系：极端的工业体系：高温、高压、酸、碱、有机溶剂高温、高压、酸、碱、有机溶剂酶不适应第二页，讲稿共六十四页哦酶的改造方法r 酶的化学修饰酶的化学修饰-分子修饰分子修饰r 酶的物理修饰酶的物理修饰-固定化固定化r 酶的生物改造酶的生物改造-定向进化定向进化r 酶的人工模拟酶的人工模拟-抗体酶抗体酶第三页，讲稿共六十四页哦一、酶的化学修饰B通过制备酶单分子纳米凝胶，大大提高了酶的稳定性第四页，讲稿共六十四页哦酶分子修饰主要方法酶分子修饰主要方法 金属离子置换修饰金属离子置换修饰大分子结合修饰大分子结合修饰侧链基团修饰侧链基团修饰肽链有限水解修饰肽链有限水解修饰氨基酸置换修饰氨基酸置换修饰 第五页，讲稿共六十四页哦1 1）金属离子置换修饰实例）金属离子置换修饰实例p SODSOD的金属离子置换的金属离子置换：天然天然SODSOD中的中的铁铁原子被原子被锰锰原子取代后，重组酶对原子取代后，重组酶对H H2 2O O2 2的稳定的稳定性显著增强，对性显著增强，对NaHNaH3 3的抑制作用的敏感型显著降低。的抑制作用的敏感型显著降低。p 氨基酸酰化酶的金属离子置换氨基酸酰化酶的金属离子置换：氨基酰化酶的氨基酰化酶的锌锌被被钴钴取代后，底物专一性和最适取代后，底物专一性和最适pHpH都有改变，都有改变，锌酶对锌酶对N-N-乙酰丙氨酸的最适乙酰丙氨酸的最适pHpH是是8.5,8.5,而钴酶是而钴酶是7.0.7.0.第六页，讲稿共六十四页哦2 2）酶大分子修饰的实例）酶大分子修饰的实例每分子核糖核酸酶和每分子核糖核酸酶和6.5分子的右旋糖酐结合，酶的催化效率提高分子的右旋糖酐结合，酶的催化效率提高2.25倍；倍；用琥珀酸酐法活化的聚乙二醇对菠萝蛋白酶进行修饰，在用琥珀酸酐法活化的聚乙二醇对菠萝蛋白酶进行修饰，在55的稳定性比未修饰的提高的稳定性比未修饰的提高38%；尿激酶采用聚乙二醇尿激酶采用聚乙二醇5000修饰，在兔体内的半衰期延长修饰，在兔体内的半衰期延长913倍；倍；超氧化歧化酶采用聚乙二醇修饰后半衰期延长超氧化歧化酶采用聚乙二醇修饰后半衰期延长70350倍；倍；L-天冬酰胺酶经聚乙二醇修饰后，抗原性显著降低，天冬酰胺酶经聚乙二醇修饰后，抗原性显著降低，1994年经年经美国美国FDA批准成为治疗急性白血病的药物使用批准成为治疗急性白血病的药物使用第七页，讲稿共六十四页哦3 3）侧链基团修饰的实例）侧链基团修饰的实例用亚硝酸修饰天冬酰胺酶，使氨基末端的用亚硝酸修饰天冬酰胺酶，使氨基末端的LeuLeu和肽链中的和肽链中的LysLys残基上的残基上的-NH-NH2 2脱氨变成脱氨变成-OH-OH，酶的半衰期延长，酶的半衰期延长2 2倍；倍；葡萄糖异构酶经琥珀酰化修饰葡萄糖异构酶经琥珀酰化修饰酚基酚基后，最适后，最适pHpH下降下降0.50.5，稳定，稳定性增加，更有利于果葡糖浆生产；性增加，更有利于果葡糖浆生产；用用O-O-甲基异脲修饰溶菌酶，使酶分子中的甲基异脲修饰溶菌酶，使酶分子中的LysLys残基上的残基上的-氨基氨基结合屏蔽，稳定性显著增强；结合屏蔽，稳定性显著增强；枯草杆菌蛋白酶的第枯草杆菌蛋白酶的第104104位位TyrTyr上的上的酚羟基酚羟基经四硝基甲烷修饰经四硝基甲烷修饰后，生成后，生成3-3-硝基酪氨酸残基，使酶对带正电荷的底物结合能力硝基酪氨酸残基，使酶对带正电荷的底物结合能力显著增强；显著增强；第八页，讲稿共六十四页哦 胰蛋白酶原（胰蛋白酶原（trypsinogentrypsinogen）的激活）的激活 4 4）肽链有限水解修饰实例）肽链有限水解修饰实例第九页，讲稿共六十四页哦5 5）氨基酸置换修饰实例）氨基酸置换修饰实例 Bender Bender等成功地利用化学修饰法将枯草杆菌蛋白酶活性中心等成功地利用化学修饰法将枯草杆菌蛋白酶活性中心的丝氨酸转换为半胱氨酸，修饰后，该酶失去对的丝氨酸转换为半胱氨酸，修饰后，该酶失去对蛋白质和多肽蛋白质和多肽的水解能力，却出现了催化的水解能力，却出现了催化硝基苯酯硝基苯酯等底物水解的活性。等底物水解的活性。评价评价：化学修饰法难度大，成本高，专一性差，而且要对酶：化学修饰法难度大，成本高，专一性差，而且要对酶分子逐个修饰，操作复杂，难以工业化生产；分子逐个修饰，操作复杂，难以工业化生产；发展趋势：定点突变发展趋势：定点突变 通过定点突变技术把农杆菌通过定点突变技术把农杆菌-葡萄糖苷酶催化中心的第葡萄糖苷酶催化中心的第358358位位L-GluL-GluL-AlaL-Ala，使亲核的羧基，使亲核的羧基甲基，结果使该酶失去了水甲基，结果使该酶失去了水解活性，而可以催化糖苷合成解活性，而可以催化糖苷合成第十页，讲稿共六十四页哦酶分子修饰的发展趋势酶分子修饰的发展趋势大分子修饰研究最为成功，尤其是聚乙二醇修饰；大分子修饰研究最为成功，尤其是聚乙二醇修饰；酶的侧链基团修饰已经成为酶结构研究的重要手段；酶的侧链基团修饰已经成为酶结构研究的重要手段；更为精细的酶侧链修饰往往和结构生物学紧密相关；更为精细的酶侧链修饰往往和结构生物学紧密相关；第十一页，讲稿共六十四页哦二、酶的物理改造二、酶的物理改造-固定化固定化 载体固定化：纳米材料、树脂、水凝胶、壳聚糖等 无载体固定化：细胞表面自固定化、酶聚集体等第十二页，讲稿共六十四页哦10mL 淀粉淀粉葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶(350g/mL)与与30mg 壳聚糖混合，在室壳聚糖混合，在室温放置温放置1h，不时搅拌，在，不时搅拌，在4过夜，过滤，用过夜，过滤，用600mL 蒸馏水洗涤蒸馏水洗涤,过滤即得过滤即得壳聚糖壳聚糖固定化淀粉葡萄糖苷酶固定化淀粉葡萄糖苷酶；第十三页，讲稿共六十四页哦海藻酸钠海藻酸钠先加热配成溶液，取一定量碱性蛋白酶溶液和海藻酸先加热配成溶液，取一定量碱性蛋白酶溶液和海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀后用蠕动泵将混合液滴入钠溶液混合，搅拌均匀后用蠕动泵将混合液滴入2%的的CaCl2 中形成凝胶珠，放入中形成凝胶珠，放入4 冰箱硬化冰箱硬化4h，得到海藻酸钠微球。，得到海藻酸钠微球。卡拉胶卡拉胶加热配成一定的浓度加热配成一定的浓度,50 水浴保温水浴保温,加入乳糖酶溶液，加入乳糖酶溶液，均匀搅拌后冷却，均匀搅拌后冷却，4 冰箱中硬化，得到块状固定化酶；冰箱中硬化，得到块状固定化酶；第十四页，讲稿共六十四页哦 酶与酶与1.5%的的海藻酸钠海藻酸钠溶液充分混和，通过针头滴入溶液充分混和，通过针头滴入1.1%氯化氯化钙溶液中，形成珠状的海藻酸胶颗粒。凝胶珠用钙溶液中，形成珠状的海藻酸胶颗粒。凝胶珠用0.5%的的聚聚赖氨酸赖氨酸处理，再经处理，再经0.1%的的2-N-环已胺乙基磺酸处理，用生理环已胺乙基磺酸处理，用生理盐水洗涤，再以盐水洗涤，再以0.05mol/L的柠檬酸钠水溶液液化微囊内海的柠檬酸钠水溶液液化微囊内海藻酸钙，得到近乎透明的藻酸钙，得到近乎透明的微囊化微囊化的固定化酶。的固定化酶。第十五页，讲稿共六十四页哦DEAE-纤维素固定虫漆酶纤维素固定虫漆酶 CM-纤维素酶固定虫漆酶纤维素酶固定虫漆酶 第十六页，讲稿共六十四页哦吸附交联法：吸附交联法：先将酶吸附在硅胶或树脂等载体上，再用戊二醛等先将酶吸附在硅胶或树脂等载体上，再用戊二醛等双功能试剂交联，所得固定化酶也可称为壳状固定化酶。双功能试剂交联，所得固定化酶也可称为壳状固定化酶。交联包埋法：交联包埋法：把酶液和双功能试剂（戊二醛）凝结成颗粒很细的集把酶液和双功能试剂（戊二醛）凝结成颗粒很细的集合体，然后用高分子或多糖一类物质进行包埋成颗粒。制得的合体，然后用高分子或多糖一类物质进行包埋成颗粒。制得的固定化酶稳定性好；固定化酶稳定性好；第十七页，讲稿共六十四页哦泵泵储罐反应产物离心机离心机消旋消旋反应反应器器固定化酶柱子晶体 L-AlaL-Ala A-D-AlaA-L-Ala A-D-Ala固定化氨基酰化酶制备固定化氨基酰化酶制备L-L-丙氨酸丙氨酸世界上第一种工业化生产的固定化酶世界上第一种工业化生产的固定化酶第十八页，讲稿共六十四页哦酶固定化的发展趋势酶固定化的发展趋势载体新材料层出不穷载体新材料层出不穷 介孔材料、纳米材料，磁性材料，大孔材料等；介孔材料、纳米材料，磁性材料，大孔材料等；固定化方法日新月异固定化方法日新月异 定向固定，微囊化固定，酶聚集体，静电纺丝等；定向固定，微囊化固定，酶聚集体，静电纺丝等；酶的结构与性能研究是热点酶的结构与性能研究是热点 结构模拟与计算等；结构模拟与计算等；第十九页，讲稿共六十四页哦三、酶的生物改造三、酶的生物改造-定向进化定向进化 自然界酶的进化是极其缓慢的，无法适应工业过程的需要。随自然界酶的进化是极其缓慢的，无法适应工业过程的需要。随着分子生物学技术快速发展，人们可以在试管内利用几周时间完成着分子生物学技术快速发展，人们可以在试管内利用几周时间完成自然界几万年的进化过程自然界几万年的进化过程自然进化诱变育种定向进化上万年上万年几年到十多年几年到十多年几个月几个月第二十页，讲稿共六十四页哦酶的定向进化技术发展历程酶的定向进化技术发展历程生物催化剂进化方法发展历程随机和定点突变定向进化计算机辅助设计基于序列-功能关系与统计模型的理性进化第二十一页，讲稿共六十四页哦蛋白质蛋白质稳定性活性有机溶液中的活性不同的底物的利用酸碱度蛋白质的表达亲和性 专一性1234性能代数达到目的达到目的随机突变随机突变随机杂交随机杂交筛选筛选目标蛋白目标蛋白酶定向进化的过程和应用范围酶定向进化的过程和应用范围第二十二页，讲稿共六十四页哦酶定向进化的典型例子酶定向进化的典型例子枯草杆菌蛋白酶枯草杆菌蛋白酶E热稳定性的分子进化热稳定性的分子进化第二十三页，讲稿共六十四页哦进化后的枯草杆菌蛋白酶E在在60%60%的的DMFDMF中酶催化效率提高中酶催化效率提高157157倍，最适温度提高倍，最适温度提高1717正面反面第二十四页，讲稿共六十四页哦对硝基苯酯酶的分子进化(Lori Giver等，1998）（在在30%30%的的DMFDMF中酶催化活性提高中酶催化活性提高100100倍倍）第二十五页，讲稿共六十四页哦-葡糖苷酶耐热性的提高(Mara Jesu s Arrizubieta等，2000）第二十六页，讲稿共六十四页哦酶定向进化的基本过程酶定向进化的基本过程随机突变随机突变 不同的定向进化方法不同的定向进化方法构建突变基因文库构建突变基因文库 载体的选择，基因重组，组建基因文库载体的选择，基因重组，组建基因文库突变基因的筛选突变基因的筛选 平板筛选法，荧光筛选法，表面展示法平板筛选法，荧光筛选法，表面展示法 第二十七页，讲稿共六十四页哦随机突变方法：定向进化的核心随机突变方法：定向进化的核心无性进化方法：易错无性进化方法：易错PCRPCR法，盒式诱变法，盒式诱变有性进化方法有性进化方法 1 1）DNADNA改组法（改组法（DNA Shuffling)DNA Shuffling)2 2）体外随机重组法（）体外随机重组法（RPR)RPR)3 3）交错延伸法）交错延伸法(StEP)(StEP)基因家族的同源重组基因家族的同源重组外显子的改组外显子的改组杂合进化杂合进化第二十八页，讲稿共六十四页哦易错易错PCRPCR方法方法第二十九页，讲稿共六十四页哦有性进化：有性进化：DNADNA改组方法（改组方法（19941994，Stemmer)第三十页，讲稿共六十四页哦有性进化有性进化：体外随机重组法（体外随机重组法（19981998，Arnold)第三十一页，讲稿共六十四页哦有性进化有性进化:交错延伸法（交错延伸法（19971997，Arnold)Arnold)第三十二页，讲稿共六十四页哦基因家族的同源重组基因家族的同源重组无性进化方法：易错无性进化方法：易错PCRPCR法，盒式诱变法，盒式诱变有性进化方法有性进化方法 1 1）DNADNA改组法（改组法（DNA Shuffling)DNA Shuffling)2 2）体外随机重组法（）体外随机重组法（RPR)RPR)3 3）交错延伸法）交错延伸法(StEP)(StEP)基因家族的同源重组基因家族的同源重组外显子的改组外显子的改组杂合进化杂合进化第三十三页，讲稿共六十四页哦基因突变库的筛选方法基因突变库的筛选方法u目标目标 根据定向进化要求，在一定的环境要求下进行筛选，从突变基因根据定向进化要求，在一定的环境要求下进行筛选，从突变基因文库中得到所需的突变基因。文库中得到所需的突变基因。u难点难点 突变库容量大，一般达到突变库容量大，一般达到10106 6，工作量巨大，工作量巨大u关键关键 高通量筛选：通量大，效率高高通量筛选：通量大，效率高u方法方法 平板筛选法，荧光筛选法，噬菌体表面展示法，细胞表面平板筛选法，荧光筛选法，噬菌体表面展示法，细胞表面展示法展示法第三十四页，讲稿共六十四页哦平板筛选方法平板筛选方法u依据细胞生长情况筛选依据细胞生长情况筛选热热稳定性：温度梯度和高温环境稳定性：温度梯度和高温环境抗生素耐受性：抗生素浓度梯度抗生素耐受性：抗生素浓度梯度pHpH稳定性：稳定性：pHpH梯度梯度极端环境：高盐、低温、高浓毒物质极端环境：高盐、低温、高浓毒物质第三十五页，讲稿共六十四页哦平板筛选方法平板筛选方法u依据颜色变化筛选依据颜色变化筛选大肠杆菌大肠杆菌-半乳糖苷酶基因显色：噬菌体半乳糖苷酶基因显色：噬菌体DNADNA载体（蓝色）载体（蓝色）反应产物显色：磷酸酯酶水解硝基酚磷酸生成黄色硝基酚反应产物显色：磷酸酯酶水解硝基酚磷酸生成黄色硝基酚脂肪酶筛选脂肪酶筛选海因酶筛选海因酶筛选第三十六页，讲稿共六十四页哦平板筛选方法平板筛选方法u依据透明圈大小筛选依据透明圈大小筛选淀淀粉酶的进化：淀粉平板培养基粉酶的进化：淀粉平板培养基豆鼓纤溶酶的进化：血纤维蛋白培养基豆鼓纤溶酶的进化：血纤维蛋白培养基第三十七页，讲稿共六十四页哦荧光筛选方法荧光筛选方法u利用自身荧光激发特性利用自身荧光激发特性 生成产物本身是具有荧光激发特性的物质生成产物本身是具有荧光激发特性的物质u利用荧光报告基因利用荧光报告基因辣根过氧化合物酶和单加氧酶的融合基因：辣根过氧化合物酶和单加氧酶的融合基因：原理：萘原理：萘萘酚萘酚醌类化合物（能激发荧光）醌类化合物（能激发荧光）绿色荧光蛋白基因：获绿色荧光蛋白基因：获20082008年诺贝尔化学奖年诺贝尔化学奖 第三十八页，讲稿共六十四页哦绿色荧光蛋白的应用绿色荧光蛋白的应用 分子标记：分子标记：FISH分析菌株（a）未加探针；（）未加探针；（b）DAPI染色（染色（c）-探针杂交（探针杂交（d）Msint-1268探针杂交菌株探针杂交菌株Y1；（；（e）Msint-1268探针杂交探针杂交M.trichosporium OB3b第三十九页，讲稿共六十四页哦噬菌体显示筛选模式噬菌体显示筛选模式第四十页，讲稿共六十四页哦噬菌体显示的几种类型噬菌体显示的几种类型第四十一页，讲稿共六十四页哦核糖体显示技术核糖体显示技术第四十二页，讲稿共六十四页哦RNA-RNA-蛋白质融合技术蛋白质融合技术第四十三页，讲稿共六十四页哦RNA-RNA-蛋白质的融合蛋白质的融合第四十四页，讲稿共六十四页哦酶定向进化的发展趋势酶定向进化的发展趋势定向进化方法发展迅猛定向进化方法发展迅猛 方法均有知识产权；方法更有针对性和特征性；方法均有知识产权；方法更有针对性和特征性；高通量筛选方法是关键高通量筛选方法是关键 新方法（荧光显示新方法（荧光显示/表面展示）在涌现，技术交叉是趋势；表面展示）在涌现，技术交叉是趋势；定向进化是近定向进化是近2020年中最成功的酶改造方法年中最成功的酶改造方法 新的实例越来越多；新的实例越来越多；第四十五页，讲稿共六十四页哦 酶对热，酸，碱以及有机溶剂的不酶对热，酸，碱以及有机溶剂的不稳定性，限制了其在工业中的应用。稳定性，限制了其在工业中的应用。四、酶的人工模拟四、酶的人工模拟模模 拟拟 酶酶-模拟酶的生物催化模拟酶的生物催化功能，用化学半合功能，用化学半合成法或化学全合成成法或化学全合成法合成的酶。法合成的酶。固固 定定 化化 酶酶-结合到特定的支持物结合到特定的支持物上并能发挥作用的一上并能发挥作用的一类酶。类酶。第四十六页，讲稿共六十四页哦根据酶的作用原理来模根据酶的作用原理来模拟酶的活性中心和催化拟酶的活性中心和催化机制，用化学方法制成机制，用化学方法制成的高效、高选择性、结的高效、高选择性、结构较简单、稳定性较高构较简单、稳定性较高的新型催化剂。的新型催化剂。模拟酶模拟酶利用现有的酶或蛋白质利用现有的酶或蛋白质做母体，引入相应的催做母体，引入相应的催化机团，形成酶的化学化机团，形成酶的化学修饰物。修饰物。以合成的高分子聚合物为以合成的高分子聚合物为母体，根据酶的活性部位母体，根据酶的活性部位结构，连接上所需的功能结构，连接上所需的功能机团或金属配合物。机团或金属配合物。第四十七页，讲稿共六十四页哦主客体酶模型：环糊精、冠醚等；主客体酶模型：环糊精、冠醚等；胶束酶模型胶束酶模型;肽酶；肽酶；抗体酶抗体酶：分子印迹酶；分子印迹酶；半合成酶；半合成酶；杂化酶杂化酶;模拟酶的分类模拟酶的分类第四十八页，讲稿共六十四页哦环糊精模拟酶环糊精模拟酶侧链上接上羟基、咪唑基和羧基，模拟胰凝乳蛋白酶侧链上接上羟基、咪唑基和羧基，模拟胰凝乳蛋白酶结果：催化对叔丁基苯乙酸酯的水解速度比天然酶一倍结果：催化对叔丁基苯乙酸酯的水解速度比天然酶一倍第四十九页，讲稿共六十四页哦分子印迹模拟酶实例分子印迹模拟酶实例模拟结果：以模拟结果：以R-1-苯乙醇与月桂酸的酯化反应为模型反应，获得了高效的非水相脂苯乙醇与月桂酸的酯化反应为模型反应，获得了高效的非水相脂肪酶，印迹酶在有机相中对新构象的记忆时间达几周，极大提高了脂肪酶的对映肪酶，印迹酶在有机相中对新构象的记忆时间达几周，极大提高了脂肪酶的对映体选择性。体选择性。第五十页，讲稿共六十四页哦抗体酶抗体酶抗体的特性抗体的特性1）蛋白质特性蛋白质特性2）能高选择配体，专一性与抗原结合能高选择配体，专一性与抗原结合3）种类达千万种种类达千万种酶的特性酶的特性1）大部分为蛋白质大部分为蛋白质2）能高选择性结合底物，催化反应高效进行能高选择性结合底物，催化反应高效进行 1.1.抗体酶的理论基础抗体酶的理论基础第五十一页，讲稿共六十四页哦第五十二页，讲稿共六十四页哦12第五十三页，讲稿共六十四页哦抗体酶催化的应用实例抗体酶催化的应用实例重排反应重排反应模拟结果模拟结果模拟结果模拟结果：以椅式构象的氧杂双环化合物为反应的过渡态类似物，制备了以椅式构象的氧杂双环化合物为反应的过渡态类似物，制备了以椅式构象的氧杂双环化合物为反应的过渡态类似物，制备了以椅式构象的氧杂双环化合物为反应的过渡态类似物，制备了催化分支酸为预苯酸的抗体酶，比原反应速度快催化分支酸为预苯酸的抗体酶，比原反应速度快催化分支酸为预苯酸的抗体酶，比原反应速度快催化分支酸为预苯酸的抗体酶，比原反应速度快10102 2-10-104 4倍，而且仅催化（倍，而且仅催化（倍，而且仅催化（倍，而且仅催化（）分支）分支）分支）分支酸。酸。酸。酸。第五十四页，讲稿共六十四页哦缩合反应缩合反应第五十五页，讲稿共六十四页哦转酯基反应转酯基反应第五十六页，讲稿共六十四页哦酰胺键的形成酰胺键的形成第五十七页，讲稿共六十四页哦酯解反应酯解反应第五十八页，讲稿共六十四页哦胺解和脱羧反应胺解和脱羧反应第五十九页，讲稿共六十四页哦消除和金属取代反应消除和金属取代反应第六十页，讲稿共六十四页哦抗体酶的发展前景抗体酶的发展前景抗抗体体酶酶已已成成为为研研究究酶酶的的作作用用机机制制的的一一个个有有力力的的工工具具。抗抗体体酶酶的的研研究究过过程程中中，可可以以直直接接观观察察到到过过渡渡态态理理论论对对抗抗体体酶酶设设计计所所起起到到的的重重要要作作用用。这这也也就就为为酶酶的的过过渡渡理理论论的的正正确确性性提提供供了一个有力的实验证据。了一个有力的实验证据。抗抗体体酶酶在在有有机机合合成成和和有有机机反反应应机机制制研研究究方方面面，也也引引起起了了有有机机化化学学家家的的广广泛泛兴兴趣趣。抗抗体体酶酶使使过过去去很很多多不不能能应应用用酶酶促促反反应应的的有有机机合合成成得得以以实现实现。第六十一页，讲稿共六十四页哦酶人工模拟的发展趋势酶人工模拟的发展趋势人工模拟方法较多，但进展不平衡人工模拟方法较多，但进展不平衡 环糊精模拟发展最早，杂合方法是新趋势；环糊精模拟发展最早，杂合方法是新趋势；抗体酶是发展最快的模拟方法抗体酶是发展最快的模拟方法 抗体酶制备技术成熟，应用渐入佳境，值得重视！抗体酶制备技术成熟，应用渐入佳境，值得重视！人工模拟的机理研究有待深入人工模拟的机理研究有待深入第六十二页，讲稿共六十四页哦10.10.磁性材料在酶固定化中的应用磁性材料在酶固定化中的应用1111、定向共价固定化酶的研究进展、定向共价固定化酶的研究进展 1212、介孔材料在酶固定化中的应用、介孔材料在酶固定化中的应用1313、纳米材料在酶固定化中的应用、纳米材料在酶固定化中的应用1414、大孔聚合物在酶固定化中的应用、大孔聚合物在酶固定化中的应用1515、微囊化技术在酶、微囊化技术在酶/细胞固定化中的应用细胞固定化中的应用4747、固体表面的酶固定研究进展固体表面的酶固定研究进展4949、金属氧化物在酶固定化领域中的应用金属氧化物在酶固定化领域中的应用讨论题安排（讨论题安排（10.2110.21和和10.2810.28）第六十三页，讲稿共六十四页哦2023/4/9感感谢谢大大家家观观看看第六十四页，讲稿共六十四页哦