保健食品毒理和功能检验及评价.pptx

主要内容提纲主要内容提纲v 中国保健食品简介中国保健食品简介v 保健食品安全性毒理学检验与评价保健食品安全性毒理学检验与评价v 保健食品新原料安全性毒理学评价原则保健食品新原料安全性毒理学评价原则v 保健食品安全性毒理学评价中存在的问题保健食品安全性毒理学评价中存在的问题v 保健食品功能性检验与评价保健食品功能性检验与评价v 保健食品功能评价方法更改情况保健食品功能评价方法更改情况第1页/共138页第一部分第一部分中国保健食品简介第2页/共138页第二部分第二部分保健食品安全性毒理学检验及评价第3页/共138页主主 要要 内内 容容q 检验评价依据检验评价依据q 审评基本要求审评基本要求q 选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则q 实验动物的选择实验动物的选择q 样品的预处理原则样品的预处理原则q 毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 毒理学安全性评价时应考虑的问题毒理学安全性评价时应考虑的问题q 审评结论的判定审评结论的判定第4页/共138页毒性及功能检验评价依据1996年3月卫生部保健食品的管理方法 保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法1996年7月GB15193食品安全性毒理学评价程序和方法 卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法 仅包含了12项功能检验及评价方法2001年7月 卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法 可受理和评价的功能调整到31项2003年2月卫生部保健食品检验与评价技术规范 将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一第5页/共138页审评的基本要求审评的基本要求1.1.配方配方 原（辅）料、用量、理化性质原（辅）料、用量、理化性质2.2.剂量剂量 食用方法及用量食用方法及用量3.3.工艺工艺 规格化产品规格化产品 符合配方、工艺、质量标准符合配方、工艺、质量标准4.4.批号批号 注意批号是否一致注意批号是否一致,益生菌、奶制品等保质期短的除益生菌、奶制品等保质期短的除外外第6页/共138页1.毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验 经口急性毒性试验：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验 遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合Ames或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验 90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第7页/共138页2.2.无需进行毒性试验的保健食品无需进行毒性试验的保健食品q以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生产的；产的；1 1）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同的）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同的 2 2）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资料未提示具有不安全性料未提示具有不安全性q用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单的营养素用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单的营养素化合物为原料的，如其原料来源、生产工艺和产品化合物为原料的，如其原料来源、生产工艺和产品质量均符合国家有关要求；质量均符合国家有关要求；选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第8页/共138页3.3.需进行一阶段和三项致突变毒性试验的保健食品需进行一阶段和三项致突变毒性试验的保健食品 属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：用水提以外的其它常用工艺生产的：（1 1）服用量与常规用量相同）服用量与常规用量相同 急性毒性、三项致突变试验急性毒性、三项致突变试验（2 2）服用量大于常规用量）服用量大于常规用量 还需加做还需加做3030天喂养试验，必要时进行传统致天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验畸试验和第三阶段毒性试验选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第9页/共138页选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则4.4.需进行一、二阶段毒性试验的保健食品需进行一、二阶段毒性试验的保健食品r 以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保健食品的物质以外的动植物或动植物提许用作保健食品的物质以外的动植物或动植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，原则上须进行第一、二阶段的毒性试验，食品，原则上须进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。必要时进行下一阶段的毒性试验。r卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物为原料的。物为原料的。第10页/共138页5.5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：需进行一至三阶段毒性试验的情况：q一、二阶段试验结果与国外产品不一致的一、二阶段试验结果与国外产品不一致的q国外少数国家或地区食用的原料或成分国外少数国家或地区食用的原料或成分q水提取物，大于常规服用量水提取物，大于常规服用量q用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第11页/共138页6.6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分国内外均无食用先例国内外均无食用先例7.7.敏感指标及敏感试验的保健食品敏感指标及敏感试验的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第12页/共138页对受试保健食品的要求q 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质q 多种原料的配方产品，应提供配方q 配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的 q 物理和化学性质及其检测报告q 提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使q 用说明书等有关资料q 受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品第13页/共138页实验动物的选择及给样量实验动物的选择及给样量1.1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.2.动物应符合动物应符合实验动物管理条例实验动物管理条例 清洁级或清洁级以上清洁级或清洁级以上 动物合格证号及动物实验室合格证号动物合格证号及动物实验室合格证号3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（若以水为溶剂，推荐（若以水为溶剂，推荐 20 20 ml/kgml/kgBWBW）小鼠：小鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW第14页/共138页样品的预处理原则1.介质的选择 应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.液体类 受试物浓缩倍数应符合试验要求。浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有6070减压或常压蒸发、冷冻干燥。按工艺要求。第15页/共138页样品的预处理原则3.袋泡茶类 处理方法与产品推荐饮用方法相同 推荐用：80-90 常压用水浸泡30min 水量为受试物的10倍，提取2次，2次提取液合并浓缩至所需浓度 标明该浓缩液与受试物的比例第16页/共138页样品的预处理原则4.含乙醇类（1）不需浓缩的受试物 乙醇浓度15 乙醇浓度应调至15（2）需浓缩的受试物 乙醇浓度15 浓缩后调至15乙醇浓度 在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基第17页/共138页样品的预处理原则5.膨胀系数较高的受试物 选择可溶性介质 给受试物的方法：灌胃 其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100倍，按采用实际达到的倍数 标明受试物的膨胀系数第18页/共138页样品的预处理原则6.益生菌等微生物类保健食品 在进行 Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。7.以食品为载体的受试物（1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。（2）大豆蛋白、乳清蛋白 如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。第19页/共138页毒理学试验项目要点介绍q 急性经口毒性试验q 鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验q 骨髓细胞微核试验q 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验q 小鼠精子畸形试验q 小鼠睾丸染色体畸变试验q 30天喂养试验第20页/共138页急性经口毒性试验目的：测定LD50，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：急性毒性：经口一次性、24h内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数致死剂量LD50表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。第21页/共138页急性经口毒性试验时间周期：一般为3周 3-5天，大、小鼠适应期 7-14天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统的异常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物第22页/共138页急性毒性（LD50）剂量分级表级 别大鼠口服LD50，mg/kg相当于人的致死量mg/kgg/人极毒150005000002500第23页/共138页急性经口毒性试验试验结果的判定：1.LD50人可能摄入量的100倍，放弃；反之继续下一步试验。2.LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验。第24页/共138页鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。时间周期：一般为2周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养48h，菌落计数剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为皿；最高剂量为5mg/皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过5倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。第25页/共138页鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验观察及评价指标：各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分别在加和不加S9情况下的菌落计数。结果评价（掺入法）：受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数2未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。第26页/共138页骨髓细胞微核试验目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。第27页/共138页骨髓细胞微核试验时间周期：一般为2周 3-5天适应期 小鼠经口染毒，30h给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计：至少设置3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取LD50的1/2、1/4、1/8作为三个剂量。当受试物的时，最高剂量通常采用。同时设阳性对照组和溶剂对照组。第28页/共138页骨髓细胞微核试验观察及评价指标：每只动物计数1000个嗜多染红细胞，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。同时观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。第29页/共138页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。原理：当受试物作用于细胞周期G1期和S期时，可诱发染色体型畸变，而作用于G2期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。第30页/共138页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期：一般为3周 3-5天适应期 小鼠或大鼠经口染毒2-4次，每次间隔24h，在末次染毒18-24h进行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验第31页/共138页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，每个剂量组不少于1000个。记录染色体数目及结构的改变。结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。第32页/共138页小鼠精子畸形试验目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。第33页/共138页小鼠精子畸形试验时间周期：一般为7周 3-5天适应期 小鼠经口连续染毒5天，于首次给样后的35天处死动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验第34页/共138页小鼠精子畸形试验观察及评价指标：每只动物检查1000个精子，记录精子畸形数目及类型。结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。第35页/共138页小鼠睾丸染色体畸变试验目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期处理。第1214d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。第36页/共138页小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期：一般为7周 3-5天适应期 小鼠经口连续染毒5天，与首次给样后的12-14天处死动物取材，（取材前6h，腹腔注 射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验第37页/共138页小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。第38页/共138页遗传毒性试验组合试验结果的判定：如三项致突变试验（Ames试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。第39页/共138页30天喂养试验目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。原理：以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续30天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。第40页/共138页30天喂养试验时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为2月 3-5天，大鼠适应期 30天，染毒及实验观察期 再进行大体解剖、血液、生化、器官病 理检查。第41页/共138页30天喂养试验剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。对于能获得LD50的受试物：最高剂量为1025的LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的3倍。对于不能获得LD50的受试物：最高剂量为人可能摄入量的100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。第42页/共138页30天喂养试验观察及评价指标：一般情况观察：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1次体重及2次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检查：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。第43页/共138页30天喂养试验试验结果的判定：对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量人可能摄入量的100倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。最小观察到有害作用剂量人可能摄入量的100倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例10，放弃。在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。第44页/共138页其它试验结果判断q 传统致畸试验：需大于或等于人摄入量的100倍。在50倍至100倍之间需进行安全性评价，小于50倍需放弃。q 90天喂养试验、繁殖试验：1.仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的100倍。2.国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的300倍。在100倍至300倍之间需进行慢性毒性试验，小于100倍需放弃。第45页/共138页其它试验结果判断q 慢性毒性试验：以LD50或30天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。q 致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。第46页/共138页安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性：1.动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；2.安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；3.安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。第47页/共138页应综合考虑的问题1.试验指标的统计学意义和生物学意义 在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则,来综合考虑指标差异有无生物学意义。2.生理作用与毒性作用 对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。第48页/共138页应综合考虑的问题3.时间-毒性效应关系 对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。4.特殊人群和敏感人群 对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。第49页/共138页应综合考虑的问题5.人的可能摄入量较大的保健食品 应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致。6.含乙醇的保健食品 对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。第50页/共138页应综合考虑的问题7.动物年龄对试验结果的影响 对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致。8.安全系数 鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为100。第51页/共138页应综合考虑的问题9.人体资料 在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料。10.综合评价 在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性。第52页/共138页应综合考虑的问题11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可 能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。12.若受试物掺入饲料的最大加入量（10）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安全性评价。第53页/共138页审评结论的判定审评结论的判定1.1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明受试物的安全性。试验结果能够证明受试物的安全性。2.2.属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：（1 1）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告。告毒理学试验报告。（2 2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。释。（3 3）未提供某些试验数据，需要补充提供。）未提供某些试验数据，需要补充提供。第54页/共138页审评结论的判定审评结论的判定3.3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：（1 1）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安全性，需要做除无法评价产品的安全性，需要做除3030天天/90/90天喂养试验以外的毒理学试验；天喂养试验以外的毒理学试验；（2 2）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。下结论，需要重复试验。第55页/共138页（1 1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在安全性问题。体具有一定的毒性，存在安全性问题。（2 2）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有配方含有“可用于保健食品的原料可用于保健食品的原料”名单以外名单以外的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。价。（3 3）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验。成相应阶段的毒理学试验。4.4.对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：第56页/共138页（4 4）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致。品的批号不一致。（5 5）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。（6 6）3030天天/90/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信。异常，结果不可信。4.4.对产品的安全性不予认可的情况如下对产品的安全性不予认可的情况如下(二二)：第57页/共138页第三部分第三部分保健食品新原料安全性毒理学评价原则第58页/共138页 保健食品新原料（以下简称新原料）是指不保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料。品的范围内，拟用于保健食品的原料。国家食品药品监督管理局和国家有关部门规国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。得作为新原料。保健食品新原料定义保健食品新原料定义第59页/共138页 在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：行管理：q未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；食品的物品名单；q尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；食品名单内；q卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。中载明的申报单位不一致。保健食品新原料定义保健食品新原料定义第60页/共138页评价新原料安全性的基本原则评价新原料安全性的基本原则v符合国家标准和卫生要求，无国家标准的应符合国家标准和卫生要求，无国家标准的应当提供行业标准或自行制定并在相关部门备当提供行业标准或自行制定并在相关部门备案的质量标准；案的质量标准；v新原料的名称、物种（基源）、生物学或生新原料的名称、物种（基源）、生物学或生态学特征、来源及使用部位应确切；态学特征、来源及使用部位应确切；v加工工艺安全合理，质量稳定、可控；主要加工工艺安全合理，质量稳定、可控；主要成分（或组成）、化学结构明确，含量稳定；成分（或组成）、化学结构明确，含量稳定；v适宜人群范围和可能摄入量明确，确定依据适宜人群范围和可能摄入量明确，确定依据充分；充分；第61页/共138页评价新原料安全性的基本原则评价新原料安全性的基本原则v国内外安全性毒理学文献资料、人体食用情况的检索报告及流行病国内外安全性毒理学文献资料、人体食用情况的检索报告及流行病学资料显示，该新原料无食用中毒或有害作用史；学资料显示，该新原料无食用中毒或有害作用史；v安全性毒理学试验结果显示，该原料在可能摄入量下对人体不产生安全性毒理学试验结果显示，该原料在可能摄入量下对人体不产生急性、慢性或其它潜在的健康危害；急性、慢性或其它潜在的健康危害；v微生物类新原料必须有食用习惯和安全食用历史，培养基、菌种及微生物类新原料必须有食用习惯和安全食用历史，培养基、菌种及其代谢产物必须无毒无害。其代谢产物必须无毒无害。第62页/共138页新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 无食用史无食用史 需做四阶段试验需做四阶段试验 局部地区有食用史局部地区有食用史 需做三阶段试验需做三阶段试验 可只做一、二阶段实验的包括可只做一、二阶段实验的包括 1 1）推荐食用量未超过人群常规用量的新原料，若根据有关文献资料及成分分析，未发现有毒或毒性甚微不至对健康构成损害，或者较大数量人群有长期食用历史且未发现有害作用的 2）已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价，且有资料证明所用原料与其一致 如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验试验新原料安全性毒理学试验要新原料安全性毒理学试验要求求 第63页/共138页新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 多个国家或国内多数地区广泛食用 1）推荐食用量未超过人群常规用量：先进行第一、二阶段毒性试验，根据试验结果决定是否进行下一阶段毒理学试验 2）推荐食用量超过人群常规用量：进行第一、二、三阶段的毒性试验，根据试验结果决定是否进行第四阶段毒性试验。新原料安全性毒理学试验要新原料安全性毒理学试验要求求第64页/共138页新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 根据新原料的特性、作用机制、已有的试验资料及产品的适宜人群等信息，有针对性地选择敏感试验、敏感动物、敏感指标，以全面了解新原料的毒性。新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求第65页/共138页新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 微生物类新原料除按上述要求进行安全性毒理学试验外，还应微生物类新原料除按上述要求进行安全性毒理学试验外，还应进行以下试验：进行以下试验：1 1）菌种毒力试验；）菌种毒力试验；2 2）耐药性试验；）耐药性试验；3 3）有可能产生抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的菌种，应进行有关）有可能产生抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的菌种，应进行有关抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的检测；抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的检测；4 4）菌种代谢产物分析及其不产生有毒有害作用的试验。）菌种代谢产物分析及其不产生有毒有害作用的试验。第66页/共138页新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求毒性试验的剂量设计毒性试验的剂量设计1 1、高剂量组应出现毒性作用但不引起动物死亡，低剂量组应不、高剂量组应出现毒性作用但不引起动物死亡，低剂量组应不出现毒性作用，并求出未观察到有害作用剂量（出现毒性作用，并求出未观察到有害作用剂量（NOAELNOAEL）。）。2 2、若根据已掌握的资料（包括第一、二阶段的毒性试验及预试、若根据已掌握的资料（包括第一、二阶段的毒性试验及预试验的结果等）判定新原料毒性较小，或人体推荐量较大，则验的结果等）判定新原料毒性较小，或人体推荐量较大，则试验最高剂量应为可给予的最大剂量（即：饲料中最大掺入试验最高剂量应为可给予的最大剂量（即：饲料中最大掺入量或最大灌胃浓度下一次最大灌胃量）。量或最大灌胃浓度下一次最大灌胃量）。第67页/共138页新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求毒理学试验结果毒理学试验结果新原料的未观察到有害作用剂量（新原料的未观察到有害作用剂量（NOAELNOAEL）应大于或等于人群可能摄入量的）应大于或等于人群可能摄入量的100100倍；倍；如果人体推荐摄入量较大，试验中可给予的最大剂量小于人群可能摄入量的如果人体推荐摄入量较大，试验中可给予的最大剂量小于人群可能摄入量的100100倍，则在可给予倍，则在可给予的最大剂量下不应观察到有害作用。的最大剂量下不应观察到有害作用。第68页/共138页第四部分第四部分保健食品安全性毒理学评价中存在的问题第69页/共138页存在的问题存在的问题 鉴鉴于于制制订订此此程程序序的的历历史史背背景景与与目目前前情情况况有有所所不不同同，因因此此，对对保保健健食食品品的的安安全全性性评评价价时时，出出现现了了选选择择毒毒理理试试验验的的项项目目、剂剂量量、样样品品前前处处理理等等问题，现就上述问题一并提出供讨论。问题，现就上述问题一并提出供讨论。第70页/共138页存在的问题存在的问题q 充分了解受试物充分了解受试物1.1.要要求求提提供供规规格格化化产产品品，至至少少是是中中试试产产品品。符符合既定的配方，生产工艺和质量标准。合既定的配方，生产工艺和质量标准。2.2.仔仔细细阅阅读读配配方方以以了了解解受受试试物物的的物物理理、化化学学性性质（包括化学结构、纯度、稳定性等）。质（包括化学结构、纯度、稳定性等）。3.3.了解生产工艺。了解生产工艺。4.4.按按产产品品说说明明书书的的最最大大人人体体推推荐荐量量进进行行剂剂量量设设计。计。第71页/共138页存在的问题存在的问题q 动物年龄动物年龄 主主要要指指3030天天和和9090天天喂喂养养试试验验，“程程序序”中中规规定定用用离离乳乳大大鼠鼠，而而保保健健食食品品应应视视具具体体情情况况而而异异。最最典典型型的的是是人人参参、鹿鹿茸茸、减减肥肥产产品品，并并非非受受试试物物本本身身有有毒毒影影响响了了动动物物的的生生长长发发育育，而而是是因因为为这这类类产品的服用对象是成人，所用的动物是离乳大鼠。产品的服用对象是成人，所用的动物是离乳大鼠。第72页/共138页存在的问题存在的问题q实验项目的选择实验项目的选择q配配方方中中含含有有仅仅限限局局部部地地区区人人群群食食用用而而又又不不在在“5151号号”名名单单上上的的原原料料，只只对对产产品品进进行行了了两两阶阶段段毒毒理理试试验验，而而未未对对原原料料本本身身按按要要求求进进行行毒毒理理学学评评价价，有有的的进进行行了了评评价价但但给给予予动动物物受受试试物物的的方方式式与与实实际际食用方式不一样，如袋泡茶掺在饲料中给予动物。食用方式不一样，如袋泡茶掺在饲料中给予动物。q含含“5151号号”文文附附录录二二名名单单上上原原料料的的产产品品只只做做了了LD50LD50和三项致空变试验。和三项致空变试验。第73页/共138页存在的问题存在的问题q实验项目的选择实验项目的选择q药药食食同同源源产产品品经经有有机机溶溶剂剂提提取取未未做做毒毒理理试试验验，或只做或只做LD50LD50和微核试验。和微核试验。q从从食食品品中中提提取取某某一一成成分分的的粗粗提提物物只只做做了了LD50LD50和三项致突变试验，如大豆异黄酮。和三项致突变试验，如大豆异黄酮。q配配方方中中仅仅有有单单一一成成分分，如如人人参参、西西洋洋参参、蜂蜂王浆不必进行全部二阶段毒理试验。王浆不必进行全部二阶段毒理试验。第74页/共138页存在的问题存在的问题q样品前处理样品前处理（一）液体类（一）液体类（二）酒类（二）酒类（三）固体类（三）固体类（四）菌类（四）菌类（五五）以以某某些些食食品品为为载载体体的的保保健健食食品品：如如富富含含微微量元素的鸡蛋、南瓜粉等量元素的鸡蛋、南瓜粉等第75页/共138页存在的问题存在的问题qLDLD5050中存在的问题中存在的问题 1.1.经口经口LD50LD50还用对照组。还用对照组。2.2.不写禁食时间。不写禁食时间。3.3.做到了做到了21.5g/KgBW,21.5g/KgBW,结论是结论是10g/KgBW10g/KgBW。4.4.将受试物掺入饲料吃将受试物掺入饲料吃2424小时。小时。第76页/共138页存在的问题存在的问题qAmesAmes实验实验 1.1.以油为载体的产品直接倒入平皿以油为载体的产品直接倒入平皿 2.2.工工艺艺是是低低温温提提取取或或低低温温冷冷冻冻干干燥燥的的产产品品用用8 8磅磅1515分钟高压灭菌。分钟高压灭菌。3.3.有溶剂对照而无自发回变对照。有溶剂对照而无自发回变对照。4.4.菌菌落落回回变变数数随随剂剂量量的的增增加加而而增增多多已已超超过过正正常值而不是二倍而出具了合格的报告常值而不是二倍而出具了合格的报告第77页/共138页存在的问题存在的问题qAmesAmes实验实验 5.5.有有抑抑菌菌作作用用的的产产品品不不进进行行预预试试验验找找出出抑抑菌菌剂剂量量而出具了而出具了5mg/5mg/皿菌落回变数正常的报告。皿菌落回变数正常的报告。6.6.产产品品中中明明显显含含有有组组氨氨酸酸，而而不不进进行行除除组组氨氨酸酸的的前处理。前处理。7.7.应该用应该用XAD-2XAD-2树脂对样品进行前处理树脂对样品进行前处理 8.8.没没有有理理解解5mg/5mg/皿皿含含义义：系系指指有有效效成成份份，如如某某些些产产品品含含有有80%80%的的糖糖，没没进进行行样样品品前前处处理理或或向向送送样样方方提提出出要要求求，直直接接用用产产品品做做5mg/5mg/皿皿，实实际际上上是是1mg/1mg/皿。皿。第78页/共138页存在的问题存在的问题q 微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验 1.1.微微核核试试验验：几几份份报报告告中中都都有有阳阳性性对对照照的的数数据据，而这几份原始记录中皆无阳性对照。而这几份原始记录中皆无阳性对照。2.2.精精子子畸畸形形试试验验：阳阳性性对对照照组组精精子子畸畸形形率率3.4%3.4%，即即判判断断阴阴性性对对照照组