微生物的分离和纯培养精选PPT.ppt

关于微生物的分离和纯培养第1页，讲稿共56张，创作于星期日微生物:结构都相当简单，个体多数十分微小，通结构都相当简单，个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。的甚至没有细胞结构。2 2、类群、类群1 1、特点、特点第2页，讲稿共56张，创作于星期日病毒（无细胞结构、寄生生活）病毒（无细胞结构、寄生生活）第3页，讲稿共56张，创作于星期日细菌细菌 电子显微镜下的结核杆菌电子显微镜下的结核杆菌 第4页，讲稿共56张，创作于星期日放线菌放线菌第5页，讲稿共56张，创作于星期日真菌真菌青霉菌青霉菌酵母菌酵母菌第6页，讲稿共56张，创作于星期日原生生物原生生物第7页，讲稿共56张，创作于星期日病病 毒毒细细 菌菌放线菌放线菌真真 菌菌原生动物原生动物2 2、类群、类群无细胞结构无细胞结构原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞第8页，讲稿共56张，创作于星期日l微生物的分离和纯培养技术是微生微生物的分离和纯培养技术是微生物最基本的实验技术，它包括物最基本的实验技术，它包括培养培养基的制备、灭菌和消毒、接种、培基的制备、灭菌和消毒、接种、培养养等步骤等步骤第9页，讲稿共56张，创作于星期日内容提要：内容提要：微生物及其分类微生物及其分类培养基与各类营养物质培养基与各类营养物质无菌技术无菌技术菌落菌落大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养微生物数量的测定微生物数量的测定第10页，讲稿共56张，创作于星期日1 1、概念、概念二、培养基二、培养基 人们按照微生物对营养物质的不人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。基质。第11页，讲稿共56张，创作于星期日按按成成分分不不同同划划分分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基化学成分不恒定的天然有机物化学成分不恒定的天然有机物牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基。基。用于工业生产用于工业生产化学成分完全了解的物质配化学成分完全了解的物质配制而成的培养基制而成的培养基高氏高氏1 1号培养基、查氏培养基。号培养基、查氏培养基。用于分类和鉴定用于分类和鉴定2 2、分类、分类第12页，讲稿共56张，创作于星期日按按物物理理状状态态不不同同划划分分固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基在液体培养基中加入在液体培养基中加入一定量凝固剂一定量凝固剂，使，使其成为固体状态，其成为固体状态，琼脂琼脂含量一般为含量一般为1.5%-1.5%-2.0%2.0%，固体培养基常用来进行微生物的，固体培养基常用来进行微生物的分分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏离、鉴定、活菌计数及菌种保藏 琼脂含量一般为琼脂含量一般为0.2%-0.7%0.2%-0.7%，观察微观察微生物的运动特征生物的运动特征、分类鉴定及噬菌、分类鉴定及噬菌体效价滴定体效价滴定 不加任何凝固剂不加任何凝固剂，大规模工业大规模工业生生产产及在实验室进及在实验室进行微生物的基础行微生物的基础理论和应用方面理论和应用方面的研究的研究半固体培养基半固体培养基第13页，讲稿共56张，创作于星期日按按用用途途不不同同划划分分基础培养基基础培养基鉴别培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）用来将某种或某类微生物从混杂的微生物用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中群体中分离分离出来的培养基，在培养基中加出来的培养基，在培养基中加入相应的入相应的特殊营养物质或化学物质特殊营养物质或化学物质，抑制抑制不需要不需要的微生物的生长，的微生物的生长，有利于所需有利于所需微生微生物的生长物的生长用于用于鉴别不同类型鉴别不同类型微生物的培养基，微生物微生物的培养基，微生物产生某种产生某种代谢产物代谢产物，与培养基中的特殊化与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化特征变化选择培养基选择培养基第14页，讲稿共56张，创作于星期日3 3、基本营养、基本营养碳源、氮源、能源、生长因子、水、无机盐碳源、氮源、能源、生长因子、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等含含CHONCHON的的有机物有机物是是异养异养型微生物的型微生物的碳源、氮源、能源碳源、氮源、能源(3)(3)能源能源第15页，讲稿共56张，创作于星期日（4 4）生长因子：生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物，如：微生物生长不可缺少的微量有机物，如：维生素、氨基酸、碱基等（牛肉膏、酵母膏、维生素、氨基酸、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）。蛋白胨中含有）。第16页，讲稿共56张，创作于星期日牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 应用最广泛和最普通的细菌基础培养基应用最广泛和最普通的细菌基础培养基 培养基组分培养基组分作用琼脂琼脂 20g 20g 牛肉膏牛肉膏 5g5g蛋白胨蛋白胨 10g10gNaCl 5gNaCl 5gH H2 2O O 定容至定容至1000ml1000ml1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方凝固剂凝固剂提供碳源、氮源、能源、生长因子提供碳源、氮源、能源、生长因子碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子无机盐无机盐水、溶剂水、溶剂第17页，讲稿共56张，创作于星期日选择培养基选择培养基应用应用加入加入青霉素青霉素加入加入高浓度食盐高浓度食盐不加氮源不加氮源不加含碳有机物不加含碳有机物的无碳培的无碳培养基养基加入加入青霉素等抗生素青霉素等抗生素延伸：延伸：分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离固氮菌分离自养型微生物分离自养型微生物分离导入了目的基因的分离导入了目的基因的受体细胞受体细胞第18页，讲稿共56张，创作于星期日鉴别培养基鉴别培养基:l加入伊红美蓝琼脂培养基（加入伊红美蓝琼脂培养基（EMS培养基）培养基）l鉴别大肠杆菌鉴别大肠杆菌l现象：蓝紫色金属光泽现象：蓝紫色金属光泽第19页，讲稿共56张，创作于星期日4.培养基要满足微生物对环境条件的需求培养基要满足微生物对环境条件的需求：真菌真菌 微酸性（微酸性（5.0-6.05.0-6.0）细菌细菌 中性（中性（6.5-7.56.5-7.5）放线菌放线菌 微碱性（微碱性（7.5-8.57.5-8.5）大多数微生物适宜生长的温度在大多数微生物适宜生长的温度在25-4025-40之间之间厌氧菌需提供无氧条件厌氧菌需提供无氧条件pH：温度：温度：氧气：氧气：第20页，讲稿共56张，创作于星期日1.1.灭菌：灭菌：使用使用强烈强烈的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外所所有有的微生物，包括芽孢和孢子。的微生物，包括芽孢和孢子。三三.无菌技术：无菌技术：泛指在培养微生物的操作中，泛指在培养微生物的操作中，防止外来杂菌的污染的方法防止外来杂菌的污染的方法第21页，讲稿共56张，创作于星期日灼烧灼烧灭菌灭菌干热灭菌箱干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅第22页，讲稿共56张，创作于星期日2 2、消毒、消毒使用较为使用较为温和温和的物理或化学方法杀死的物理或化学方法杀死物体表面或内部的物体表面或内部的部分部分微生物（微生物（不包括芽不包括芽孢和孢子孢和孢子）。）。煮沸消毒法：煮沸消毒法：100 5-6min巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-75 30min或或80 15min化学药剂消毒法：酒精、氯气化学药剂消毒法：酒精、氯气紫外线消毒：实验前紫外线消毒：实验前30min超净台超净台第23页，讲稿共56张，创作于星期日煮沸煮沸消毒消毒法法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂（化学药剂（70%酒精等）酒精等）紫外线紫外线针对不耐高温的液体针对不耐高温的液体接种室、超净工作台接种室、超净工作台能耐高温的，需要保持干燥的物品能耐高温的，需要保持干燥的物品灼烧法灼烧法干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌接种工具（接种环等）接种工具（接种环等）实验操作者的双手实验操作者的双手培养皿等玻璃器皿培养皿等玻璃器皿培养基培养基消毒方法消毒方法灭菌方法灭菌方法实验操作者的衣服实验操作者的衣服第24页，讲稿共56张，创作于星期日单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定义：定义：四、菌落四、菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体第25页，讲稿共56张，创作于星期日五、微生物的分离和纯培养五、微生物的分离和纯培养分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单个菌落1 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（大肠杆菌分离和纯培养）（大肠杆菌分离和纯培养）计算、称量（配制固体培养基要加入琼脂）计算、称量（配制固体培养基要加入琼脂）溶化溶化调调pH(pH(注意：灭菌前调注意：灭菌前调PH)PH)分装、包扎分装、包扎灭菌（高压蒸汽灭菌）灭菌（高压蒸汽灭菌）倒平板倒平板第26页，讲稿共56张，创作于星期日倒平板技术倒平板技术1234使瓶口迅速使瓶口迅速通过火焰通过火焰在火焰旁打开在火焰旁打开锥形瓶锥形瓶打开一条稍大于打开一条稍大于瓶口的缝隙，向培养皿中瓶口的缝隙，向培养皿中倒入倒入 约约10-20ml倒入培养倒入培养皿，立即盖上皿盖。皿，立即盖上皿盖。等待平板冷却凝固等待平板冷却凝固后倒置后倒置第27页，讲稿共56张，创作于星期日 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。烫手时，就可以进行倒平板了。第28页，讲稿共56张，创作于星期日 2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。生物污染培养基。第29页，讲稿共56张，创作于星期日3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。第30页，讲稿共56张，创作于星期日 4.4.在倒平板的过程中，如果不小心在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？么？空气中的微生物可能在皿盖与皿空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。要用这个平板培养微生物。第31页，讲稿共56张，创作于星期日2 2、接种、接种平板划线法平板划线法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法第32页，讲稿共56张，创作于星期日1 1、将接种环放在、将接种环放在火焰上灼烧，直到火焰上灼烧，直到接种环接种环_2 2、在、在_旁冷却旁冷却接种环，并打开棉接种环，并打开棉塞塞 3 3、将试管口通过火焰、将试管口通过火焰 4 4、将已、将已_的接种环伸的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划划_条平行线，盖上皿盖。注条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。意不要划破培养基。5 5、将试管通过火焰，、将试管通过火焰，并塞上棉塞并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却三至五三至五7 7、灼烧接种环，待其冷却后，从第、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的一区域划线的_开始往第二区开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。五区域内划线。注意不要将最后注意不要将最后一区的划线与第一区相连。一区的划线与第一区相连。末端末端烧红烧红8、将平板、将平板_放入培养箱中培养。放入培养箱中培养。倒置倒置第33页，讲稿共56张，创作于星期日 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。在的微生物污染培养物。杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。境和感染操作者。第34页，讲稿共56张，创作于星期日6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法稀释涂布平板法a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液第35页，讲稿共56张，创作于星期日b.b.涂布平板：涂布平板：滴滴灼灼试试涂涂取取0.1ml0.1ml菌悬液菌悬液微量微量 移液器移液器第36页，讲稿共56张，创作于星期日Pour plate(3)(3)稀释混合平板法（课本稀释混合平板法（课本P14)P14)第37页，讲稿共56张，创作于星期日 将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基，放入的培养基，放入3737恒温箱中恒温箱中倒置倒置培养培养12h-24h,12h-24h,直到长出菌落为止。直到长出菌落为止。3 3、培养、培养第38页，讲稿共56张，创作于星期日4 4、实实验验结结果果观观察察第39页，讲稿共56张，创作于星期日5 5、菌株的保存方法、菌株的保存方法（1）临时保藏：）临时保藏：接种到接种到固体斜面固体斜面培养基，菌落培养基，菌落长成后置于长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。（2）长期保存：）长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法搁置斜面搁置斜面第40页，讲稿共56张，创作于星期日六、微生物数量的计算直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法第41页，讲稿共56张，创作于星期日（一）直接计数法（一）直接计数法 显微镜直接计数法显微镜直接计数法 将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出体积内的微生物总数。一般适用于纯培数目来计算出体积内的微生物总数。一般适用于纯培养液悬浮液中单细胞菌体的计数。养液悬浮液中单细胞菌体的计数。l优点：优点：直观、快速、操作简单直观、快速、操作简单l缺点：缺点：l不能区分死菌与活菌，所得为总数，结果往往偏高不能区分死菌与活菌，所得为总数，结果往往偏高l不适于对运动细菌的计数不适于对运动细菌的计数l需要相对高的细菌浓度需要相对高的细菌浓度l个体小的细菌在显微镜下难以观察个体小的细菌在显微镜下难以观察第42页，讲稿共56张，创作于星期日1 1、血球计数板、血球计数板 计数板是一块特制的厚计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网。有一小方格网。每个方格网共分九个大每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。用，称为计数室。第43页，讲稿共56张，创作于星期日*#血球计数板计数室有两种刻度血球计数板计数室有两种刻度1大格大格=16中格中格2516=400小格小格1大格大格=25中格中格16 25=400小格小格第44页，讲稿共56张，创作于星期日 计数室边长为计数室边长为1mm，则计数区的，则计数区的面积为面积为l11 mm2，盖上盖玻片，盖上盖玻片后计数室高度为后计数室高度为0.1mm，所以一，所以一个计数室的体积为个计数室的体积为l0.10.1mm3。(注意：注意：1 ml 1000 mm3)计数室容积第45页，讲稿共56张，创作于星期日1 1、稀释、稀释 用无菌生理盐水将待测菌稀释成适当浓度的菌悬液。用无菌生理盐水将待测菌稀释成适当浓度的菌悬液。2 2、镜检计数室、镜检计数室 加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则用自来水冲洗，加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则用自来水冲洗，95%95%乙醇棉球乙醇棉球轻轻擦洗，然后用吸水纸吸干或电吹风吹干。轻轻擦洗，然后用吸水纸吸干或电吹风吹干。3 3、加样、加样 取洁净的血球计数板一块，盖上盖玻片。将菌悬液摇匀，用无菌滴管吸取少许，沿盖玻片取洁净的血球计数板一块，盖上盖玻片。将菌悬液摇匀，用无菌滴管吸取少许，沿盖玻片边缘滴入一小滴，让菌液利用液体的表面张力充满计数区，静置边缘滴入一小滴，让菌液利用液体的表面张力充满计数区，静置5min5min。注：取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生注：取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生2、操作步骤第46页，讲稿共56张，创作于星期日4 4、显微镜计数（以、显微镜计数（以1616小格小格 2525中格的中格的 规格为例）规格为例）在高倍下在高倍下(40X)(40X)计数对两个计数室记数，方法：每个计数室选计数对两个计数室记数，方法：每个计数室选5 5个中格个中格(4(4个角和中央的一个中格个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数，求得每个中方格的平均值，中的菌体进行计数，求得每个中方格的平均值，再乘上再乘上2525即为大方格中的总菌数，最后换算成即为大方格中的总菌数，最后换算成1ml1ml菌液中的总菌数。菌液中的总菌数。注：依照注：依照“数上不数下，数左不数右数上不数下，数左不数右“的原则进行计数的原则进行计数 计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体 一般样品稀释度要求每小格内约有一般样品稀释度要求每小格内约有510510个菌体为宜个菌体为宜 计数的结果是两个计数室所记菌数的平均值计数的结果是两个计数室所记菌数的平均值5 5、清洗血球计数板、清洗血球计数板 计数完毕，将血球计数板在水龙头下流水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完计数完毕，将血球计数板在水龙头下流水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后电吹风吹干，镜检确认计数区无残留菌体或其它沉淀。若不干净，则必须重后电吹风吹干，镜检确认计数区无残留菌体或其它沉淀。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。复洗涤至干净为止。第47页，讲稿共56张，创作于星期日3、计数方法l所统计的中格的总菌数所统计的中格的总菌数A A，菌液的稀释倍数为，菌液的稀释倍数为B B，则，则1ml1ml菌液中：菌液中：(1)25(1)25个中方格的计数板计算公式个中方格的计数板计算公式(2)162)16个中方格的计数板计算公式个中方格的计数板计算公式第48页，讲稿共56张，创作于星期日（二）间接计数法（二）间接计数法 稀释平板计数法稀释平板计数法 将待测样品按比例做一系列稀释后，将其中的微生物充分分散成单个将待测样品按比例做一系列稀释后，将其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定稀释度、一定量的稀释样液接种到平板上，使其均匀分布于细胞，取一定稀释度、一定量的稀释样液接种到平板上，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至4545左右的左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养，由单个微生物生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个菌经过培养，由单个微生物生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个菌落代表样品中的一个微生物个体。统计培养基中的出现的菌落，即可推算落代表样品中的一个微生物个体。统计培养基中的出现的菌落，即可推算出样品中的活菌数。出样品中的活菌数。第49页，讲稿共56张，创作于星期日l能检测活菌数和杂菌数能检测活菌数和杂菌数l时间长，繁琐，测定值时常受各种因素影响时间长，繁琐，测定值时常受各种因素影响l由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成一个单菌落也可能来自样品中的成一个单菌落也可能来自样品中的2-32-3或更多个细胞。或更多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往偏低因此，平板菌落计数的结果往往偏低优缺点：第50页，讲稿共56张，创作于星期日编号编号 稀释菌样稀释菌样 吸取菌样吸取菌样倾注平板倾注平板 恒温培养恒温培养 计数计数1、操作步骤第51页，讲稿共56张，创作于星期日104 105 106原样 101 102 103 104 105 1060.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.2ml0.2ml0.2ml0.5ml0.5ml6支试管，分别加支试管，分别加入入4.5ml无菌水无菌水第52页，讲稿共56张，创作于星期日2、计数原则（1 1）细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有）细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30-30030-300个菌落为宜，个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有霉菌以每个培养皿内有10-10010-100个菌落为宜。个菌落为宜。（2 2）每个稀释度取）每个稀释度取3 3个平板平均值，同稀释度的三个重复对个平板平均值，同稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大。照的菌落数不应相差很大。（3 3）由）由1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6稀释度计算出的总活菌数也不能相差悬稀释度计算出的总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。殊，如相差较大，表示实验不精确。第53页，讲稿共56张，创作于星期日注：注：只有一个稀释度，平均菌落数在只有一个稀释度，平均菌落数在30-30030-300之间，以平均菌落数计算之间，以平均菌落数计算若有两个稀释度，平均菌落数均在若有两个稀释度，平均菌落数均在30-30030-300之间时，应按两者菌落总数之之间时，应按两者菌落总数之比值决定：比值决定：若其比值小于等于若其比值小于等于2 2应计算两者的平均数应计算两者的平均数 若大于若大于2 2则以稀释倍数小的菌落平均数计算则以稀释倍数小的菌落平均数计算稀释倍数稀释倍数同一稀释度同一稀释度3 3次重复菌落平均数次重复菌落平均数培养菌类时所用的稀释液体积培养菌类时所用的稀释液体积活菌数活菌数/ml/ml第54页，讲稿共56张，创作于星期日3、注意事项l稀释菌液与取样时，每支移液管只能用于一个稀释度稀释菌液与取样时，每支移液管只能用于一个稀释度l倾注平板时的培养基温度要合适倾注平板时的培养基温度要合适l混匀样品时，注意勿用力过猛，以免培养基与含菌混合液溅到培养皿盖混匀样品时，注意勿用力过猛，以免培养基与含菌混合液溅到培养皿盖与皿壁上。与皿壁上。l样品要充分混匀，操作熟练快速（样品要充分混匀，操作熟练快速（151520min20min完成），严格无菌操作，尽量减完成），严格无菌操作，尽量减小操作误差。小操作误差。第55页，讲稿共56张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第56页，讲稿共56张，创作于星期日