小麦萌发前后淀粉酶活性的比较.ppt

小麦萌发前后淀粉酶活性的比较小麦萌发前后淀粉酶活性的比较一、实验目的及要求：一、实验目的及要求：1 1，学习分光光度法测定酶活力的原理与方法；，学习分光光度法测定酶活力的原理与方法；2 2，了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。，了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。二、实验的基本原理二、实验的基本原理 淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。实验证明，淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。实验证明，在某些植物如小麦、大麦的休眠种子中只含有在某些植物如小麦、大麦的休眠种子中只含有淀粉酶，淀粉酶，-淀淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。麦芽糖是还原性糖，能使力。麦芽糖是还原性糖，能使3，5-二硝基水杨酸还原成棕色的二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基氨基5-硝基水杨酸，后者在硝基水杨酸，后者在500 nm处有最大吸光度，而进行处有最大吸光度，而进行定量测定。定量测定。三、主要仪器设备及实验耗材：三、主要仪器设备及实验耗材：小麦种子、可见分光光度计、离心机、恒温水浴，小麦种子、可见分光光度计、离心机、恒温水浴，研钵等。研钵等。标准麦芽糖、标准麦芽糖、0.2%淀粉、淀粉、3，5-二硝基水杨酸二硝基水杨酸溶液、溶液、1%氯化钠溶液、氯化钠溶液、0.02 mol/L 磷酸缓冲液、石英磷酸缓冲液、石英沙。沙。四、实验内容或步骤：四、实验内容或步骤：1麦芽糖标准曲线制作麦芽糖标准曲线制作 取取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按表支干净的具塞刻度试管，编号，按表 35 1 加入加入试剂：试剂：表表 1 制作麦芽糖标准曲线配方表制作麦芽糖标准曲线配方表 试剂试剂管号管号 1 2 3 4 5 6 7麦芽糖标准液麦芽糖标准液（ml）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水（蒸馏水（ml）2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 03,5-二硝基水杨酸二硝基水杨酸 2 2 2 2 2 2 2摇匀摇匀，置于沸水浴中煮沸摇匀摇匀，置于沸水浴中煮沸 5 min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至 20 m L。以。以 1 号管作为空白调零点，在号管作为空白调零点，在 500 nm 波长下比色测定。以麦芽波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2、萌发小麦种子、萌发小麦种子 浸泡小麦种子浸泡小麦种子24h，入，入25C恒温箱或在室温下发芽。恒温箱或在室温下发芽。3、提取小麦萌发前后的酶液、提取小麦萌发前后的酶液 （1）幼苗酶的提取：取萌发的幼苗）幼苗酶的提取：取萌发的幼苗10株，入研钵加石英砂株，入研钵加石英砂0.2 g，1%NaCl 3 ml，研磨成匀浆，研磨成匀浆，0-4 C下放置下放置20 min。离离心，心，2000 r/min 10 min.测定上清酶液的总体积。测定上清酶液的总体积。（2）种子酶的提取：取干燥种子）种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。粒作对照，操作方法同上。4、二硝基水杨酸法测定酶活力、二硝基水杨酸法测定酶活力 量取待测酶液量取待测酶液1 ml，pH6.9的的0.02mol/L磷酸缓冲液稀释磷酸缓冲液稀释10倍，作为酶活倍，作为酶活力测定物。取力测定物。取6根试管按下表加各物质：根试管按下表加各物质：表表2 试剂试剂 试管编号试管编号1/2（种子酶稀释液）（种子酶稀释液）3/4（幼苗酶稀释液）（幼苗酶稀释液）5/6（空白管）（空白管）V（0.2淀粉溶液）淀粉溶液）/ml 1 1 1V(蒸馏水蒸馏水)/ml -0.5V(稀释酶液稀释酶液)/ml 0.5 0.5 -混匀各管，混匀各管，40 C恒温水浴，水解恒温水浴，水解3 min，加入加入1%3，5-二硝基水杨酸溶液二硝基水杨酸溶液2 ml。入。入沸水浴，准确加热沸水浴，准确加热5 min，迅速冷却至室温，加水稀释至，迅速冷却至室温，加水稀释至20 ml，混匀。，混匀。测定各管的测定各管的A500nm值值、计算酶活力单位、计算酶活力单位 总酶活力单位总酶活力单位=(C酶酶C0)n V酶酶 式中：式中：C酶酶为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度（mg/ml）；）；C0为表为表2中空白管的麦芽糖浓度；中空白管的麦芽糖浓度；n为酶溶液稀释的倍数；为酶溶液稀释的倍数；V酶酶为提取酶液的总体积（为提取酶液的总体积（ml）。）。设在设在40 C、pH 6.9的条件下，的条件下，3 min内水解淀粉释放内水解淀粉释放1 mg麦麦芽糖所需要的酶量为芽糖所需要的酶量为1个活力单位（个活力单位（U）。）。五、思考题五、思考题1、为什么提取酶液的过程应该在、为什么提取酶液的过程应该在0-4 下进行？测定淀粉酶活性下进行？测定淀粉酶活性时为什么要在时为什么要在40 条件下水解淀粉？条件下水解淀粉？2、小麦萌发过程中淀粉酶活性升高的原因和意义是什么？、小麦萌发过程中淀粉酶活性升高的原因和意义是什么？