课题1菊花的组织培养（PPT31页)cblm.pptx

菊花的组织培养菊花的组织培养 植物的组织培养又叫植物的组织培养又叫离体培养离体培养，指植物的组织，指植物的组织、器官或细胞等在器官或细胞等在离体条件离体条件下，通过下，通过无菌无菌操作，操作，在在人工控制条件人工控制条件下（一定的营养物质、激素、下（一定的营养物质、激素、温度等其他外界条件）进行培养以获得再生的温度等其他外界条件）进行培养以获得再生的完整植株完整植株的技术。的技术。一、一、植物组织培养植物组织培养的概念的概念概念：概念：原因：原因：（回想）植物组织培养原理：（回想）植物组织培养原理：植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞的全能性是指细胞的全能性是指已分化已分化的细胞具有的细胞具有发育成完整个体的发育成完整个体的潜能潜能。生物体的每一个细胞生物体的每一个细胞都是都是由同一个受由同一个受精卵有丝分裂精卵有丝分裂而来，而来，都含有该物种所都含有该物种所特有的全套遗传物质特有的全套遗传物质高度特化的高度特化的动物动物细胞，从整个细胞来说，全能细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质遗传物质.已分化的已分化的植物植物细胞，仍具有全能性细胞，仍具有全能性.实例实例受精卵受精卵 生殖细胞生殖细胞 体细胞体细胞全能性的比较全能性的比较:1.什么叫分化？（其实质是什么什么叫分化？（其实质是什么?）2.什么是愈伤组织？愈伤组织的细胞有什么是愈伤组织？愈伤组织的细胞有什么特点？什么特点？3.什么叫脱（去）分化、再分化？什么叫脱（去）分化、再分化？4.如何控制细胞的脱分化与去分化？如何控制细胞的脱分化与去分化？（阅读（阅读32-33页解决下列问题页解决下列问题）二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程基因的选择性表达基因的选择性表达 愈伤组织愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程或胚状体三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：1、材料（外植体）的选取、材料（外植体）的选取（1）不同植物的组织培养难度不同）不同植物的组织培养难度不同 什么样的植物容易进行组织培养？什么样的植物容易进行组织培养？（2）同一种植物的不同组织培养难度不同）同一种植物的不同组织培养难度不同 什么样的组织容易进行组织培养？什么样的组织容易进行组织培养？容易进行无性生殖的植物，如烟草、胡萝卜容易进行无性生殖的植物，如烟草、胡萝卜幼龄、保存时间短的组织幼龄、保存时间短的组织菊花的组织培养一般选用何种材料？菊花的组织培养一般选用何种材料？未开花植物的茎上部新萌生的侧枝未开花植物的茎上部新萌生的侧枝2、营养成分（培养基）、营养成分（培养基）（1）植物组织培养常用的培养基？）植物组织培养常用的培养基？MS培养基培养基大量元素大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等（2）MS培养基的主要成分？培养基的主要成分？培养基中的各种成分的作用是什么？培养基中的各种成分的作用是什么？大量元素和微量元素提供植物细胞需要的各种无机大量元素和微量元素提供植物细胞需要的各种无机盐；蔗糖提供碳源的同时维持细胞渗透压；甘氨酸、盐；蔗糖提供碳源的同时维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是满足离体植物细胞的特殊营养维生素等物质主要是满足离体植物细胞的特殊营养物质需求物质需求课本课本33页旁栏思考：页旁栏思考：微生物培养基以有机营养为主，微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养培养基则需提供大量无机营养3、植物激素、植物激素（1）关键激素是什么？）关键激素是什么？（2）两种激素的使用顺序不同，结果不同）两种激素的使用顺序不同，结果不同（3）两种激素的用量比不同，植物发育方向不同）两种激素的用量比不同，植物发育方向不同4、pH、温度、光照等、温度、光照等 菊花组织培养的菊花组织培养的PH？温度？光照？温度？光照？植物组织培养过程植物组织培养过程:离离离离体体体体组组组组织织织织或或或或细细细细胞胞胞胞植植植植物物物物体体体体脱分化脱分化脱分化脱分化细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素生长素生长素生长素生长素愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织芽芽芽芽根根根根细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素再分化再分化再分化再分化植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养不需要光不需要光不需要光不需要光?需要光需要光需要光需要光植物组织培养的过程植物组织培养的过程离体的植物组织或细胞愈伤组织根和芽完整的植物体脱分化再分化制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽流水流水冲洗冲洗无菌纸吸干无菌纸吸干70%酒精酒精无无菌水菌水冲洗冲洗无菌纸吸干无菌纸吸干0.1%氯化汞氯化汞无菌水无菌水冲洗至少三次之上冲洗至少三次之上（流水是为消毒吗？能消毒的是什么（流水是为消毒吗？能消毒的是什么？无菌水冲洗是为了干啥？）？无菌水冲洗是为了干啥？）（哪（哪6步？）步？）1、配制各种母液、配制各种母液（大量元素、微量元素各（大量元素、微量元素各浓缩多少倍？用量较小的有机物呢？）浓缩多少倍？用量较小的有机物呢？）2、配制培养基、配制培养基（菊花组培是否添加植物激（菊花组培是否添加植物激素？）素？）3、灭菌、灭菌（哪种灭菌方法？）（哪种灭菌方法？）注意接种时的各种无菌操作。注意接种时的各种无菌操作。将菊花茎段插入培养基时特别应注意什么？将菊花茎段插入培养基时特别应注意什么？最好在哪儿培养？温度？光照？定期消毒？最好在哪儿培养？温度？光照？定期消毒？直接移栽到土壤中吗？直接移栽到土壤中吗？MS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例(一一)制备制备MSMS固体培养基固体培养基（四）培养（四）培养1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养从接种外植体到出现愈伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周周时间。时间。2 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄色周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄色的瘤状愈伤组织。的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。组织长的更快。2 2周后，培养基成分接近耗尽，必周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养须更换培养基，进行继代培养.继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为一代为20d20d。如果延长时间，培养基中营养物质。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为如果愈伤组织长到直径为1 11.5cm1.5cm时，就可以进时，就可以进行行试管苗试管苗培养培养.2 2、愈伤组织的继代培养、愈伤组织的继代培养在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色绿色.3 3、试管苗的培养、试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的进行试管苗的见光培养见光培养.（五）移栽（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日.1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间.蛭石珍珠岩（六）栽培（六）栽培3 3、移栽、移栽珍珠岩：珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培透性好，适合栽培.幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中.幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花况，适时浇水、施肥，直至开花.1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间、移栽到消过毒的环境中生存一段时间在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？35页旁栏思考：页旁栏思考：至少做一组以上的重复。对照实验用一个不接至少做一组以上的重复。对照实验用一个不接种的空白培养基与接种的培养基一同培养，用种的空白培养基与接种的培养基一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。四、课外延伸四、课外延伸人工种子人工种子课题延伸（略）练习练习1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。好，容易诱导脱分化和再分化。菊菊花花的的组组织织培培养养再分化再分化材料性质、营养物质、材料性质、营养物质、调节物质、环境条件调节物质、环境条件外植体的消毒外植体的消毒接种接种基本原理基本原理:细胞的全能性细胞的全能性基本过程基本过程:脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织影响因素：影响因素：操作流程：操作流程：配制配制MS固体培固体培养基养基培养培养移栽移栽栽培栽培