T_SATA 041-2023 食品中有机硒含量的测定 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法.docx

ICS 67.050CCS X 04团体标准T/SATA 0412023食品中有机硒含量的测定高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法Determination of organic selenium content by liquid chromatography-inductivelycoupled plasma mass spectrometry in foods2023 - 03 - 21 发布2023 - 04 - 21 实施深圳市分析测试协会发 布T/SATA 0412023目次前言 . II1 范围 . 12 规范性引用文件 . 13 术语和定义 . 14 方法原理 . 15 试剂和材料 . 16 标准品 . 27 标准溶液 . 28 仪器设备 . 29 分析步骤 . 3试样制备 . 3试样提取 . 310 仪器参考条件 . 3液相色谱参考条件 . 3ICP-MS 参考条件 .3标准曲线制作 . 3样品的测定 . 4结果计算和表述 . 4检出限 . 4精密度 . 4附录A（资料性） 有机硒混合标准溶液的色谱图 . 5IT/SATA 0412023食品中有机硒含量的测定高效液相色谱电感耦合等离子体质谱法1 范围本文件规定了食品中有机硒液相色谱联用电感耦合等离子质谱法的测定方法。本文件适用于粮谷、食用菌、酵母、鸡蛋、蔬菜、乳粉、饮料等食品中硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基-硒代半胱氨酸(L-SeMc)、硒代蛋氨酸(SeMet)三种有机硒的测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 1.1 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写GB/T 20001.4 标准编写规则 第4部分：试验方法标准GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法JJF  1159 四级杆电感耦合等离子体质谱仪校准规范GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法原理有机硒在蛋白酶合适的条件下酶解，以小分子的硒代氨基酸的形式释放出来，再通过液相色谱分离系统进行组分分离后，电感耦合等离子体质谱仪测定，以保留时间和质荷比定性，峰面积外标法定量。5 试剂和材料除另有说明，本实验使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 中规定的一级水。甲醇(CH3OH)。三氟乙酸(C2HF3O2)。2-(N-吗啉代)乙烷磺酸(C6H13NO4S·H2O,MES)。氢氧化钠(NaOH)。盐酸(HCl)：36% 。三羟甲基氨基甲烷(C4H11NO3，TRIS)。蛋白酶液：CAS 9014-01-1，IUB 3.2.21.14，300 U/mL400 U/mL，不得含丙三醇稳定剂，于 0  5 冰箱储存。冰乙酸。乙酸溶液(3 mol/L)：取 86 mL 冰乙酸(5.8)，加入 200 mL 水，混匀后定容至 500 mL。1组分标准系列1标准系列2标准系列3标准系列4标准系列5标准系列6SeCys2(g/L)05102050100L-SeMc(g/L)05102050100SeMet(g/L)05102050100T/SATA 0412023流动相溶液：98% 三氟乙酸水溶液(0.2% v/v)- 2% 甲醇：取 3.92 mL 三氟乙酸(5.2)，加入 1000mL 一级水，再加入 40 mL 甲醇(5.1)，最后用一级水定容至 2000 mL，过 0.45m 有机系滤膜，超声脱气 10 min。氢氧化钠溶液(1 mol/L)：称取 4 g 氢氧化钠(5.4)，用水稀释至 100 mL，混匀。氢氧化钠溶液(6 mol/L)：称取 24 g 氢氧化钠(5.4)，用水稀释至 100 mL，混匀。盐酸溶液(1 mol/L)：取 8.33 mL 盐酸(5.5)，用水稀释至 100 mL，混匀。0.05 mol/L MES-TRIS 缓冲液：称取 19.52 g 2-(N-吗啉代)乙烷磺酸(5.3)和 12.20 g 三羟甲基氨基甲烷(5.6)，用 1.7 L 水溶解，20 时用 6 mol/L 氢氧化钠溶液(5.12)调节 pH 为 8.3，加水稀释至 2 L。蛋白酶溶液：用 0.05 mol/L MES-TRIS 缓冲溶液(5.14)配置成为 50 mg/mL 的蛋白酶溶液，使用前现配并于 0  5 暂存。有机系滤膜：0.45m。氩气或液氩：纯度99.99%氦气：纯度99.99%6 标准品硒代胱氨酸(SeCys2，C6H12N2O4Se2，M=334.09，CAS 号：29621-88-3)：纯度98% ，或采用经国家认证并授予标准物质证书的单标准贮备液。甲基-硒代半胱氨酸(L-SeMc，C4H9NO2Se，M=182.08，CAS 号：26046-90-2)：纯度98% ，或采用经国家认证并授予标准物质证书的单标准贮备液。硒代蛋氨酸(SeMet，C5H11NO2Se，M=196.11，CAS 号：3211-76-5)：纯度98% ，或采用经国家认证并授予标准物质证书的单标准贮备液。无机硒标准溶液：100 mg/L，采用经国家认证并授予标准物质证书的硒元素标准贮备液。7 标准溶液硒代胱氨酸储备液( 100 mg/L)：称取硒代胱氨酸(6.1)10.2 mg 于 100 mL 容量瓶中，用一级水定容，摇匀备用，0  4 避光保存 3 个月。甲基-硒代半胱氨酸储备液( 100 mg/L)：称取甲基-硒代半胱氨酸(6.2)10.2 mg 于 100 mL 容量瓶中，用一级水定容，摇匀备用，0  4 避光保存 3 个月。硒代蛋氨酸储备液(100 mg/L)：称取硒代蛋氨酸(6.3)10.2 mg 于 100 mL 容量瓶中，用一级水定容，摇匀备用，0  4 避光保存 3 个月。有机硒混合中间液( 1 mg/L)：分别取 3 种单标标准溶液（7.1 7.3）各 1 mL 至 100 mL 容量瓶，用一级水定容，摇匀备用，0  4 避光保存 1 周。无机硒储备液(1 mg/L)：取无机硒标准溶液(6.4) 1 mL 至 100 mL 容量瓶，用一级水定容，摇匀备用，0  4 避光保存 1 周。硒混合使用液：分别于 6 个 10 mL 容量瓶中依次加入有机硒混合中间液(7.4)：0.000 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL、0.500 mL、1.000 mL，然后除零点外，分别加入无机硒中间液(7.5)各 0.200 mL，最后用 0.05 mol/L MES-TRTS 缓冲液定容至刻度，摇匀。表1 配制的标准工作溶液梯度8 仪器设备2T/SATA 0412023高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪：由液相色谱与电感耦合等离子体质谱仪组成，配碰撞反应池。高速粉碎机。分析天平：感量为 1 mg、0.1 mg。pH 计：具有温度补偿功能，精度±0.1。离心机：转速不低于 8000 r/min。涡旋振荡器。振荡水浴锅。9 分析步骤试样制备固体样品取可食部分，经高速粉碎机粉碎均匀，密封保存备用。蔬菜、鸡蛋等含水分较多的样品，高速匀浆搅拌混匀，密封保存备用。液体饮料样品，摇匀，密封保存备用。试样提取称取 0.2 g 1.0 g(精确至 0.001 g)样品于 50 mL锥形瓶中，准确移取加入 20 mL 0.05 mol/LMES-RTS缓冲液(5.14)，加入100L 50 mg/mL的蛋白酶溶液(5.15)，用锡纸封口，混匀，控制试样温度保持在 60 ±1 ，持续酶解2 h，取出冷却后，转移至 50 mL离心管中，5000 r/min离心 10 min，取上清液，过 0.45m有机系滤膜，待测，同时做空白试验。10 仪器参考条件液相色谱参考条件a)  色谱柱：C18 柱(250 mm×4.6 mm，5m)，或等效色谱柱；b)  流动相：98% 三氟乙酸水溶液(0.2% v/v)- 2% 甲醇；c)  柱温：30 ；d)  进样量：100L；e)  流速：1.0 mL/min；f)  等度洗脱。ICP-MS 参考条件a)  射频功率：1500 W 1600 W；b)  采样深度：8 mm；c)  等离子体气流量：17 L/min；d)  辅助气流量：1.2 L/min；e)  载气流量：0.95 L/min；f)  氦气流量：3 mL/min；g)  积分时间：1.0 s；h)  检测质荷比(m/z)：78；i)  双电荷：2.0% ；j)  氧化物：3.0% ；k)  氦气碰撞模式。标准曲线制作3T/SATA 0412023用调谐液调整仪器的各项性能指标，使仪器灵敏度、氧化物、双电荷、分辨率等各项指标到达仪器的测试要求。待基线稳定后，将有机硒标准系列溶液按质量浓度由低到高分别注入高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪中进行测定，以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，制作标准曲线。有机硒混合标准溶液的色谱图参见附录A。样品的测定10.4.1 定性测定依次将空白溶液和试样溶液注入高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪中，得到色谱图。进行试样测定时，待测样品色谱峰的保留时间、质荷比应与标准物质相一致。10.4.2 定量采用峰面积外标法定量，根据标准曲线得到试样溶液中各有机硒的溶液浓度。结果计算和表述试样中各有机硒以质量分数X计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算。= （0）×·····················································×1000(1)式中：样品中相应的有机硒含量的数值，单位为毫克每千克(mg/kg)；标准曲线中得到的试样中相应有机硒浓度的数值，单位为微克每升(g/L)；0标准曲线中得到的空白中相应有机硒浓度的数值，单位为微克每升(g/L)；样品提取体积，单位为毫升(mL)；样品质量的数值，单位为克(g)；1000 换算系数。计算结果保留三位有效数字。检出限称样量为 0.5 g提取液体积为 20.00 mL时，方法检出限为 0.0400 mg/kg，定量限为 0.120 mg/kg。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。4T/SATA 0412023A                   A附录A（资料性）有机硒混合标准溶液的色谱图图 A.1 有机硒混合标准溶液的色谱图5