微生物的实验室培养第2课时课件-高二下学期生物人教版选修1.pptx

专题专题2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题1 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养实验操作实验操作1、阐述配制固体培养基的方法2、掌握平板划线法和稀释涂布平板法的操作方法学习目标学习目标学生自学（学生自学（5分钟分钟）自学课本自学课本P16-P20上半部分，思考这上半部分，思考这部分讲了哪些知识点，哪些是重点，部分讲了哪些知识点，哪些是重点，标出疑惑标出疑惑自学指导一（4分钟）根据P16-P17实验操作完成下列问题1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的大致过程有哪几部？2.牛肉膏蛋白胨有什么样的特点，称取时要注意什么？3.溶化过程中需要注意什么？4.灭菌时应注意什么？5.怎样进行倒平板操作？6.完成课本P17下面的讨论。实验操作实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌大肠杆菌（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，添加水，定容至1000mL（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：根据配方比例，计算根据配方比例，计算100mL100mL培养基各成分用量培养基各成分用量牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g琼脂：2.0g电子天平2.2.称量：称量：准确称取各成分准确称取各成分注注意意：称称取取牛牛肉肉膏膏和和蛋蛋白白胨胨时时动动作作要要迅迅速速，称后要及时盖上瓶盖称后要及时盖上瓶盖牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g琼脂：2.0g3.3.溶化：溶化：加水加热溶化牛肉膏加水加热溶化牛肉膏牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出称量纸牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出称量纸加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解加入琼脂，加入琼脂，不断搅棒不断搅棒熔解熔解用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL100mL目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂4.4.灭菌：灭菌：v将将配配置置好好的的培培养养基基用用玻玻棒棒转转移移至至三三角角锥锥瓶瓶中中，塞塞上上棉棉花花塞塞，包包上上牛牛皮皮纸纸，再再放放入入高高压压蒸蒸气气灭灭菌锅菌锅内灭菌内灭菌151530min30min4.4.灭菌：灭菌：v将将配配置置好好的的培培养养基基用用玻玻棒棒转转移移至至三三角角锥锥瓶瓶中中，塞塞上上棉棉花花塞塞，包包上上牛牛皮皮纸纸，再再放放入入高高压压蒸蒸气气灭灭菌锅菌锅内灭菌内灭菌151530min30minv将将培培养养皿皿用用旧旧报报纸纸包包紧紧，放放入入干干热热灭灭菌菌箱箱内内灭灭菌菌2h2h5.5.倒平板：倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050左右左右时，在时，在酒精灯火焰酒精灯火焰附近附近倒平板倒平板讨论讨论1 1：你用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手倒平板操作倒平板操作1 11.1.右右手手拿拿装装有有培培养养基基的的锥锥形形瓶瓶，左左手手拨出棉塞拨出棉塞2 22.2.右右手手拿拿锥锥形形瓶瓶，使使瓶瓶口口迅迅速速通通过过火火焰焰讨论讨论2 2：为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基3 33.3.用用左左手手的的拇拇指指和和食食指指将将培培养养皿皿打打开开一一条条稍稍大大于于瓶瓶口口的的缝缝隙隙，右右手手将将锥锥形形瓶瓶中中的的培培养养基基(约约10-20mL)10-20mL)倒倒入入培培养养皿皿，左左手手立立即即盖盖上上培养皿的皿盖培养皿的皿盖4 44.4.等等待待平平板板冷冷却却凝凝固固（大大约约5-10min5-10min）后后，将将平平板板倒倒过过来来放置放置讨论讨论3 3：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平平板板冷冷凝凝后后，皿皿盖盖上上会会凝凝结结出出水水珠珠，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的温温度度较较高高，将将平平板板倒倒置置，既既可可防防止止皿皿盖盖上上的的水水珠珠落落入入培培养养基基，造造成成污污染染，又又可可避避免免培培养养基基中中水水分分过快地挥发过快地挥发讨讨论论4 4：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？不不能能，空空气气中中的的微微生生物物可可能能在在皿皿盖盖与与皿皿底底之之间的培养基上滋生，造成污染间的培养基上滋生，造成污染注注意意：倒倒平平板板时时，不不能能将将培培养养基基溅溅在在皿皿盖盖与与皿皿底之间的部位底之间的部位6.6.无菌检查：无菌检查：将将灭灭菌菌的的培培养养基基放放入入3737的的恒恒温温箱箱中中培培养养24-24-48h48h，以检查灭菌是否彻底，以检查灭菌是否彻底自学指导二（4分钟）根据P18下半部分至P20上面两行纯化大肠杆菌完成下列问题1.什么是菌落？2.什么是平板划线法？3.平板划线的操作过程是怎样的？4.完成P18讨论题5.什么是稀释涂布平板法？6.稀释和涂布平板的操作步骤分别是怎样的？（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌1.1.微生物的分离与纯化：微生物的分离与纯化：从从混混杂杂微微生生物物群群体体中中获获得得只只含含某某一一种种或或某某一一株株微生物的过程微生物的过程，称为微生物的分离与纯化 利用固体培养基，将混杂细菌分散或稀释成单个细胞，使其繁殖成单个菌落2.2.微生物接种方法：微生物接种方法：平板划线法平板划线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法工具：接种环 通过接种环在琼脂固体培养基表面连通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面。在数次画线后散到培养基的表面。在数次画线后,可以可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体的子细胞群体,这就是菌落。这就是菌落。平板划线法平板划线法:平板划线操作平板划线操作土壤稀释液土壤稀释液用力不能过大 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。状的菌落。平板划线操作平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五平板划线操作平板划线操作思考：思考：平板划线操作的整个过程，是如何实现纯化大肠杆菌的？平板划线操作平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五菌种多菌种多菌种少菌种少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种最少菌种最少（1 1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。种，避免细菌污染环境和感染操作者。（2 2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种以免接种环温度太高，杀死菌种（3 3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单菌落。形成单菌落。1.将分别盛有将分别盛有9mL水的水的6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按101106的顺序编号。的顺序编号。系列稀释操作系列稀释操作 2.用移液管吸取用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。液与水充分混匀。系列稀释操作系列稀释操作 3.3.从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL1mL稀释液，注入稀释液，注入10102 2倍稀释的试倍稀释的试管中，重复第管中，重复第2 2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。稀释。注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰焰12cm12cm处处涂布平板操作涂布平板操作自学指导三（2分钟）根据P20完成下列问题1、解决P20结果分析与评价2、怎样对菌种进行保存？四、菌种的保藏四、菌种的保藏四、菌种的保藏四、菌种的保藏甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法1、临时保藏、临时保藏频繁使用的菌种：频繁使用的菌种：接种到固体斜面培养基上，接种到固体斜面培养基上，在合适的温度下培养，当菌落长在合适的温度下培养，当菌落长成后将试管置于成后将试管置于4冰箱中保存冰箱中保存2、长期保存：、长期保存：以后每以后每36个月，都要重新个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上鲜的培养基上 将将1mL培养的菌液转移到甘油培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混合后，放在瓶中，与甘油充分混合后，放在20的冷冻箱中保存的冷冻箱中保存小结小结: