维生素b片含量测定的方法验证.pptx

会计学1维生素维生素b片含量测定的方法验证片含量测定的方法验证实验原理实验原理n n维生素维生素B B1 1又称盐酸硫胺又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloridethiamine hydrochloride），），化学名称为氯化化学名称为氯化4-4-甲基甲基-3(2-3(2-甲基甲基-4-4-氨基氨基-5-5-嘧啶基嘧啶基)-)-甲基甲基-5-(2-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐羟基乙基噻唑鎓盐酸盐第1页/共20页性性 质质n n溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶n n硫色素反应：硫色素反应：n n紫外吸收特性：紫外吸收特性：A Amaxmax=246nm=246nmn n与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应n n氯化物特性：氯化物特性：特征性鉴别特征性鉴别含量测定含量测定氯化物检查氯化物检查第2页/共20页原理原理原理原理n n特征性鉴别特征性鉴别硫色素反应硫色素反应维生素维生素维生素维生素B B1 1在在在在碱液碱液碱液碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色中可被铁氰化钾氧化生成硫色中可被铁氰化钾氧化生成硫色中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于素，色素转溶于素，色素转溶于素，色素转溶于正丁醇正丁醇正丁醇正丁醇(或异丁醇、异戊醇或异丁醇、异戊醇或异丁醇、异戊醇或异丁醇、异戊醇)中，中，中，中，显现于酸中消失的显现于酸中消失的显现于酸中消失的显现于酸中消失的蓝色荧光蓝色荧光蓝色荧光蓝色荧光。（见刘文英主编。（见刘文英主编。（见刘文英主编。（见刘文英主编药物分析第六版，药物分析第六版，药物分析第六版，药物分析第六版，P P258258）n n含量测定含量测定维生素维生素维生素维生素B B1 1有紫外吸收，有紫外吸收，有紫外吸收，有紫外吸收，A Amaxmax=246nm=246nm，第3页/共20页实验方法实验方法实验方法实验方法1.1.鉴别反应取本品约取本品约取本品约取本品约5mg5mg，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液2.5ml2.5ml使其使其使其使其溶解，加铁氰化钾试液溶解，加铁氰化钾试液溶解，加铁氰化钾试液溶解，加铁氰化钾试液0.5ml0.5ml与正丁醇与正丁醇与正丁醇与正丁醇5ml5ml，强力振摇强力振摇强力振摇强力振摇2min2min，放置使成两液层，上层醇液，放置使成两液层，上层醇液，放置使成两液层，上层醇液，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，即显强烈的蓝色荧光，即显强烈的蓝色荧光，即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即加酸使成酸性荧光即加酸使成酸性荧光即加酸使成酸性荧光即消失消失消失消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。，再加碱使成碱性，则荧光复现。，再加碱使成碱性，则荧光复现。，再加碱使成碱性，则荧光复现。第4页/共20页n n含量测定含量测定 1.精密称取片粉精密称取片粉40.98mg(40.98mg(相当于维生素相当于维生素B B1 125mg25mg，标示量为每标示量为每1g1g药物中含有药物中含有0.164g0.164g维生素维生素B1B1)，置，置100ml100ml量瓶中量瓶中 加盐酸溶液（加盐酸溶液（9100091000）约）约70ml70ml，摇匀，摇匀1515分钟使维生素分钟使维生素B1B1溶解，并定容至刻度，摇匀溶解，并定容至刻度，摇匀 干燥滤纸过滤干燥滤纸过滤精密量取续精密量取续滤液滤液5.0ml5.0ml，置，置100ml100ml量瓶中，量瓶中，盐酸溶液（盐酸溶液（9100091000）定容至刻度，摇匀）定容至刻度，摇匀 得到得到供示品溶液供示品溶液。第5页/共20页n n含量测定n n2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml量瓶中，盐酸溶液（91000）定容至刻度，摇匀 得到对照品溶液。n n3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分别测定吸光度，计算即得。第6页/共20页实验内容与要求实验内容与要求n n鉴别试验n n吸收波长选择n n精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD%n n重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD%n n稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD%n n加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验n n含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。如何引用？如何引用？第7页/共20页 线性关系和范围分析方法的分析方法的验证1 精密度试验2 重现性试验3 加样回收试验4 稳定性试验5第8页/共20页线性与范围线性与范围线性与范围线性与范围n n精密称取片粉精密称取片粉40.98mg(40.98mg(相当于维生素相当于维生素B B1 125mg)25mg)，置，置100ml100ml量瓶中量瓶中 加盐酸溶液（加盐酸溶液（9100091000）少量，使维生素）少量，使维生素B1B1溶溶解，并定容至刻度，摇匀解，并定容至刻度，摇匀 分别取上述溶液分别取上述溶液3.00ml3.00ml、4.00ml4.00ml、5.00ml5.00ml、6.00ml6.00ml、7.00ml7.00ml置于置于100ml100ml容量瓶中，容量瓶中，加加盐酸溶液（盐酸溶液（9100091000）至刻度，）至刻度，摇匀摇匀将其置于紫外分将其置于紫外分光光度计中在光光度计中在246nm246nm处测量处测量并用并用C C做做A A的回归曲线。的回归曲线。第9页/共20页线线性性性性关关关关系系系系序号序号序号序号1 1 1 12 2 2 23 3 3 34 4 4 45 5 5 5浓度浓度浓度浓度（mg/mlmg/mlmg/mlmg/ml）测定值测定值测定值测定值第10页/共20页稳定性试验稳定性试验稳定性试验稳定性试验n精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.n nRSD 2.0%RSD 2.0%RSD 2.0%，则需要重新选取时则需要重新选取时则需要重新选取时则需要重新选取时间点进行计算，直到间点进行计算，直到间点进行计算，直到间点进行计算，直到RSD 2.0%RSD 2.0%，否则要尽快测定，否则要尽快测定，否则要尽快测定，否则要尽快测定第11页/共20页精密度试验精密度试验n n目的目的n n检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度信程度信程度信程度n n要求要求n n用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作液，同浓度至少平行操作液，同浓度至少平行操作液，同浓度至少平行操作6 6份，份，份，份，浓度与信号值浓度与信号值浓度与信号值浓度与信号值要在线性范围内要在线性范围内要在线性范围内要在线性范围内n nRSD 2.0%RSD 2.0%RSD 2.0%RSD 2.0%仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第12页/共20页 同批、同法同批、同法序序号号时间(min)(min)信信号号值平均平均信信号号值RSDRSD（%）RSDRSD（%）1 12 23 34 45 56 67 7稳稳定性定性定性定性试验试验第13页/共20页重现性试验重现性试验n n目的目的n n考察样品溶液制备方法的可靠程度考察样品溶液制备方法的可靠程度考察样品溶液制备方法的可靠程度考察样品溶液制备方法的可靠程度n n要求要求n n同批样品按相同方法制备样品溶液，至少同批样品按相同方法制备样品溶液，至少同批样品按相同方法制备样品溶液，至少同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6 6份份份份,浓度与信号值均浓度与信号值均浓度与信号值均浓度与信号值均要在线性范围内要在线性范围内要在线性范围内要在线性范围内n nRSD 2.0%RSD 2.0%仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第14页/共20页重重重重现现性性性性试验试验(示例示例示例示例)试验试验序号序号称样量称样量（g g）测定值测定值（mgmg）含量含量（mg/gmg/g）平均含量平均含量（mg/g mg/g）RSDRSD（%）1 10.16660.166622.0422.04132.29132.29134.53134.530.3%0.3%2.0%2.0%2 20.16670.166724.8224.82148.89148.893 30.16690.166921.9021.90131.22131.224 40.17420.174223.5423.54135.13135.135 50.16670.166720.8620.86125.13125.136 6第15页/共20页精密度精密度精密度精密度试验试验（示例（示例（示例（示例 ）实验序序号号信信号号值平均平均值RSDRSD1 10.5120.5120.5100.5100.2%0.2%(2.0%)(2.0%)2 20.5080.5083 30.5110.5114 40.5090.5095 50.5100.5106 60.5090.509第16页/共20页加样回收率试验加样回收率试验n n目的目的n n考察准确度，即用该方法测定的结果与真实考察准确度，即用该方法测定的结果与真实考察准确度，即用该方法测定的结果与真实考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度值或参考值接近的程度值或参考值接近的程度值或参考值接近的程度n n要求要求n n设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率n nRSD 2.0%RSD 2.0%第17页/共20页加加加加样样回收回收回收回收试验试验序序号号称称样量量（g g）待待测组分分含量含量（mgmg）对照品加照品加入量入量（mgmg）测得量得量（mgmg）回收率回收率（%）平均加平均加样回收率回收率（%）RSDRSD（%）1 10.160.1665.2865.282 20.25000.250015.015.027.227.2100.1100.13 30.25120.25124 40.25090.250953.0453.045 50.25000.250015.015.029.829.898.698.66 60.25000.25007 70.25040.250442.8442.848 80.25000.250015.015.033.133.1100.0100.09 90.25100.2510取含量测定时一半的称样量，取含量测定时一半的称样量，0.5g/20.5g/298102%98102%第18页/共20页撰写方法学验证论文撰写方法学验证论文n n线性与范围:设计对照品溶液的浓度n n精密度试验n n稳定性试验 根据实验测定数值进行计算n n重复性试验n n加样回收试验:n n设计称样量、对照品加入量n n含量测定：根据实验测定数值进行计算第19页/共20页