医学专题一任务二水中大肠菌群数的测定(精).ppt

综合综合(zngh)实训三实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定水中菌落总数及大肠菌群数的测定任务二任务二 水中大肠菌群数的测定水中大肠菌群数的测定 第一页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定水中总大肠菌群的测定水中总大肠菌群的测定(cdng)(cdng)检验(jinyn)依据：GB/T5750.12-2006方法：多管发酵法第二页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定总大肠菌群总大肠菌群总大肠菌群3737、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢无芽孢(y bo)(y bo)杆菌杆菌 粪大肠菌群（耐热粪大肠菌群（耐热-）总大肠菌群 非粪大肠菌群非粪大肠菌群EC肉汤肉汤44.5士士0.5第三页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定总大肠菌群总大肠菌群MPN（most probable number）最可能最可能(knng)(knng)数或最近似数数或最近似数总大肠菌群MPN100mL100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数或水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数最可能数第四页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定指示菌（总大肠菌群）指示菌（总大肠菌群）指示菌应具有(jyu)的条件和肠道致病菌的来源相同在外界环境中的生存时间长检验方法(fngf)比较简便第五页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定实验实验(shyn)目标目标掌握生活(shnghu)饮用水总大肠菌群的测定方法掌握水源水总大肠菌群的测定方法判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量第六页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定实验实验(shyn)内容内容1 1乳糖乳糖(r tn)发酵试验发酵试验4 4证实证实(zhngsh)试验试验5 5结果分析与报告结果分析与报告1 1培养基制备培养基制备2 2乳糖发酵试验乳糖发酵试验3 3分离培养分离培养第七页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定实验实验(shyn)器材器材水样生活饮用水、水源生活饮用水、水源(shuyun)水水培养基乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基试剂革兰氏染色液、稀释剂等革兰氏染色液、稀释剂等第八页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定实验实验(shyn)器材器材其他无菌工作台、无菌工作台、酒精灯、酒精灯、稀释液稀释液、灭菌吸管、灭菌吸管、灭、灭菌试管菌试管、小倒管、试管架、小倒管、试管架、接种环、恒温接种环、恒温培养培养箱、箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油(biyu)(biyu)、平皿、天平、电炉等平皿、天平、电炉等第九页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定培养基制备培养基制备(zhbi)(zhbi)乳糖(r tn)发酵管双料管双料管单料管单料管伊红美兰平板放置(fngzh)小倒管并排气第十页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定检验检验(jinyn)程序程序生活(shnghu)饮用水接种乳糖发酵(f jio)试验分离培养证实试验结果报告水源水稀释与接种第十一页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定一、乳糖发酵一、乳糖发酵(f jio)(f jio)（初发酵（初发酵(f jio)(f jio)）试验）试验自来水直接接种直接接种10mL10mL水样于双料培养基，每个水样共接水样于双料培养基，每个水样共接种种5 5管管水源(shuyun)水加大稀释度，每个稀释度接种加大稀释度，每个稀释度接种5 5管，每个水样管，每个水样共接种共接种1515管管 第十二页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定各10ml1ml各1ml水样1:10稀释(xsh)水各1ml乳糖(r tn)发酵试验第十三页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定一、乳糖一、乳糖(r tn)(r tn)发酵（初发酵）试验发酵（初发酵）试验培养(piyng)3636士士ll24h24h士士2h2h观察产酸产气情况不产酸产气不产酸产气产酸产气产酸产气第十四页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定第二天第二天第十五页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定二、分离二、分离(fnl)(fnl)培养培养产酸产气的发酵管分别转种EMB平板（分区(fn q)划线）3636士士ll24h24h士士2h2h第十六页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定第三天第三天第十七页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定三、证实试验三、证实试验(shyn)(shyn)（复发酵试验（复发酵试验(shyn)(shyn)）观察EMB平板(pngbn)菌落形态深紫黑色、具有金属光泽的菌深紫黑色、具有金属光泽的菌落落紫黑色、不带或略带金属紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落光泽的菌落淡紫红色、中心较深的菌淡紫红色、中心较深的菌落落第十八页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定一半(ybn)进行涂片、染色、镜检另一半进行接种（证实(zhngsh)试验用）第十九页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定三、证实三、证实(zhngsh)(zhngsh)试验（复发酵试验）试验（复发酵试验）只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种(jizhng)乳糖蛋白胨管3636士士ll24h24h士士2h2h第二十页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定第四天第四天第二十一页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定四、结果四、结果(ji gu)(ji gu)报告报告观察乳糖(r tn)发酵管产气情况产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在查MPN 检索表根据证实为总大肠菌群阳性的管数根据证实为总大肠菌群阳性的管数报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）第二十二页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定四、结果四、结果(ji gu)(ji gu)报告报告5管法结果(ji gu)见表1，15管法结果见表2第二十三页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定四、结果四、结果(ji gu)(ji gu)报告报告表表1 1 用用5 5份份10mL10mL水样时各种阳性和阴性结果水样时各种阳性和阴性结果(ji gu)(ji gu)组合时的最可能数（组合时的最可能数（MPN)MPN)5个10mL管中阳性管数 最可能数（MPN）016.0第二十四页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定四、结果(ji gu)报告表表2 2 总大肠菌群总大肠菌群MPNMPN检索检索(jin su)(jin su)表表(部分）部分）（总接种量（总接种量55.5mL55.5mL，其中，其中5 5份份10mL10mL水样，水样，5 5份份1mL1mL水样，水样，5 5份份0.1mL0.1mL水样）水样）接种量接种量/mL/mL总大肠总大肠菌群菌群/(MPN/(MPN/100mL)100mL)接种量接种量/mL/mL总大肠总大肠菌群菌群/(MPN/(MPN/100mL)100mL)10ml10ml管管1ml1ml管管0.1ml0.1ml管管10ml10ml管管1ml1ml管管0.1ml0.1ml管管00021002001210140024102600351038004710410005910512第二十五页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定四、结果(ji gu)报告稀释样品查表后所得(su d)结果应乘稀释倍数表表2 2采用采用3 3个稀释度（个稀释度（10mL10mL、1mL 1mL 和和0.1mL),0.1mL),每个稀释每个稀释度度5 5管管表表2 2内所列接种量如改用内所列接种量如改用100mL100mL、10mL10mL和和1mL1mL时，表时，表内数字应相应降低内数字应相应降低1010倍；如改为倍；如改为1mL1mL、0.1mL0.1mL和和 0.01mL0.01mL时时,则表内数字应相应增加则表内数字应相应增加1010倍。其余可类倍。其余可类推。推。第二十六页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定四、结果四、结果(ji gu)(ji gu)报告报告所有乳糖发酵管均阴性(ynxng)，可报告总大肠菌群未检出。第二十七页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定注意事项注意事项1.无菌操作。2.每递增稀释一次，即换一支1mL灭菌吸管。3.培养基使用(shyng)前应先检查培养基内小倒管中有无气泡。4.接种量在1ml及以下时用单料培养基，接种量超过1ml时用双料培养基。5.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min。第二十八页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定习题习题(xt)(xt)作业作业 1.判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，该指示菌应具备的条件有哪些。2.总大肠菌群和粪大肠菌群有什么(shn me)区别？如何区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。第二十九页，共三十一页。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定习题习题(xt)(xt)作业作业 3.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过(chogu)15min，为什么？4.单料和双料培养基有什么区别？什么时候使用双料培养基？5.生活饮用水的菌落总数、总大肠菌群标准是多少？畜禽饮用水总大肠菌群标准是多少？第三十页，共三十一页。内容(nirng)总结综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定任务二 水中大肠菌群数的测定。最可能数或最近似数。判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量。一、乳糖发酵（初发酵）试验。一、乳糖发酵（初发酵）试验。三、证实试验（复发酵试验）。一半进行涂片、染色、镜检。5管法结果见表1，15管法结果见表2。表1 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合(zh)时的最可能数（MPN)。表2 总大肠菌群MPN检索表(部分）第三十一页，共三十一页。