杨燕军实验离体蛙心灌流.pptx
实 验 三 电刺激及化学因素对心脏活动的影响第1页/共38页实 验 三 电刺激及化学因素对心脏活动的影响实验目的:实验原理:实验对象:蟾蜍器材和药品:实验步骤:1.制备离体蛙心:2.仪器连接:1记录正常曲线记录正常曲线2期前收缩和代偿间歇期前收缩和代偿间歇(单刺激单刺激,1V)30.65%NaCl置换任氏液置换任氏液41%CaCl2 12滴滴53%乳酸乳酸 12滴滴60.01%Adr 12滴滴70.01%Ach 12滴滴8 2%CaCl2 56滴滴注意事项:观察项目:下次实验:膈神经放电第2页/共38页实验目的3.3.观察观察NaNa+、K K+、CaCa2+2+、AdrAdr、AchAch对心脏活对心脏活动的影响，理解内环境理化因素相对恒定对维动的影响，理解内环境理化因素相对恒定对维持心脏正常活动的重要性。持心脏正常活动的重要性。1.1.学习离体蛙心灌流方法。学习离体蛙心灌流方法。2.2.观察在心脏活动的不同时期给予刺激所引起观察在心脏活动的不同时期给予刺激所引起的期前收缩和代偿间歇。的期前收缩和代偿间歇。第3页/共38页实验原理 心肌具有心肌具有4 4个特性个特性:兴奋性兴奋性、自律性自律性、传导性传导性和和收缩性收缩性有效不应期有效不应期=收缩期收缩期+舒张早期舒张早期期前收缩期前收缩:在正常节律性兴奋到达之前，在心在正常节律性兴奋到达之前，在心脏舒张的中期后，给心脏一个额外有效脏舒张的中期后，给心脏一个额外有效刺激，可引起一个提前出现的收缩。刺激，可引起一个提前出现的收缩。第4页/共38页 NaNa+、K K+、CaCa2+2+、AdrAdr、AchAch对心脏活动的影响实验原理代偿间歇代偿间歇:当正常起搏点的兴奋到达心脏时，当正常起搏点的兴奋到达心脏时，常常落在期前收缩的有效不应期中，因常常落在期前收缩的有效不应期中，因而不能引起心肌的兴奋与收缩，使期前而不能引起心肌的兴奋与收缩，使期前收缩后出现一个较长时间的间歇期。收缩后出现一个较长时间的间歇期。第5页/共38页心肌细胞动作电位心肌收缩曲线超常期相对不应期有效不应期第6页/共38页第7页/共38页第8页/共38页生物机能实验系统(RM6240)，张力换能器1，刺激电极1，蛙类手术器械一套，铁支架1，双凹夹2，蛙心套管1，蛙心夹1，烧杯2，滴管2实验器材：第9页/共38页任氏液、0.65%NaCl、1%CaCl2、1%KCl、0.01%ch 0.01%Adr2%CaCl2、药 品：第10页/共38页制备离体蛙心1.捣毁脑和脊髓，暴露心脏123第11页/共38页1234第12页/共38页心室动脉圆锥左心房右心房左主动脉右主动脉第13页/共38页右心房左心房心室静脉窦第14页/共38页2.蛙心插管 第15页/共38页第16页/共38页第17页/共38页第18页/共38页第19页/共38页第20页/共38页1234第21页/共38页仪器连接1234第22页/共38页第23页/共38页描记正常蛙心收缩曲线曲线疏密：代表心跳频率。曲线的规律性：代表心室的节律性。曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。曲线的基线：代表心室舒张的程度。第24页/共38页期前收缩和代偿间歇第25页/共38页吸出插管内全部任氏液，置换等量0.65%NaCl，观察心缩曲线变化，待效应明显后，吸出灌流液，用新鲜任氏液换洗3次，直至心缩曲线恢复正常。置换等量0.65%NaCl 灌流液中无Ca2+进入细胞内Ca2+胞浆内Ca2+心肌收缩力心肌的兴奋-收缩耦联第26页/共38页加入12滴1%CaCl2于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗3次至曲线恢复正常。细胞外Ca2+Ca2+内流 Ca2+与肌钙蛋白的结合 心肌收缩力 但舒张不完全,收缩基线上移第27页/共38页加1滴3%乳酸 细胞外H+H+内流 H+和Ca2+离子竞争性结合肌钙蛋白的结合位点抑制Ca2+离子与肌钙蛋白结合心肌收缩力 第28页/共38页心率加入12滴0.01%Adr于任氏液中，待效应出现后，用任氏液换洗至曲线恢复正常。Adr与心肌受体（1）结合心率心肌收缩力慢通道Ca2+通透性4期自动去极速度慢反应细胞，0期Ca2+内流AP上升速度和幅度房室交界兴奋传导复极相K+外流复极过程加速平台期进入细胞内Ca2+第29页/共38页房室交界慢反应细胞AP幅度最大复极电位负值增加，离阈电位距离加入1-2滴0.01%Ach于任氏液中，待效应出现后，用任氏液换洗至曲线恢复正常。Ach与M受体结合抑制钙通道，Ca2+内流膜对K+的通透性AP2、3期缩短，Ca2+内流心肌收缩力心率舒张期自动去极速度兴奋传导速度减慢第30页/共38页加入56滴2%CaCl2于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗3次至曲线恢复正常。细胞外Ca2+Ca2+内流 Ca2+与肌钙蛋白的结合 心肌收缩力 但舒张不完全,收缩基线上移当细胞内Ca2+时Ca2+与肌钙蛋白得不到解离 心肌持续收缩,停止于收缩状态钙僵第31页/共38页注意事项制备标本时，应按指导试探着插管，避免损伤心脏(包括静脉窦)。每次换液时，插管内的液面均应保持恒定高度。本实验所用药品种类较多，吸任氏液的吸管、吸心插管内溶液的吸管和各种药物的吸管要分开，不可混淆，互相污染，以免影响结果。药物作用不明显时，可加量。随时滴加任氏液于心脏表面使之湿润。固定换能器时应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的水流入换能器内造成短路。第32页/共38页部分结果分析0.65%NaCl，心跳减弱 心肌收缩活动有Ca2+触发，心肌肌浆网不发达，因此其收缩强弱依赖于细胞外Ca2+浓度 灌流液中缺乏Ca2+，心肌细胞内Ca2+大大减少，心肌兴奋-收缩藕联过程减弱，心肌收缩活动减弱第33页/共38页高K+任氏液，心跳明显减弱甚至停跳于舒张状态 部分结果分析 K+与Ca2+有竞争性拮抗作用。细胞外K+浓度增加可抑制细胞膜对Ca2+的转运，从而使进入胞内的Ca2+减少，心肌兴奋-收缩藕联过程减弱，心缩力降低甚至停于舒张状态。第34页/共38页高Ca2+，心缩加强，舒张不完全，甚至停于收缩状态部分结果分析 心肌舒缩活动取决于胞内Ca2+浓度，当Ca2+升高到0.01mM，肌钙蛋白可结合足够Ca2+发生构型改变而触发心肌收缩；当胞内Ca2+浓度降到0.0001mM时则可解离发生心肌舒张。高Ca2+使肌钙蛋白与Ca2+不能解离而造成心肌持续收缩。第35页/共38页部分结果分析肾上腺素，心脏正性作用并且舒张完全1.肾上腺素与心肌细胞膜受体结合，使心肌细胞膜上腺苷酸环化酶活化作用于ATP产生cAMP cAMP的作用：（1）激活Ca2+内流；（2）肌浆网释放Ca2+因此心肌收缩加强2.肾上腺素使Ca2+泵活动增强，肌浆网摄取Ca2+向细胞外转运，胞内Ca2+减少，心肌舒张过程加快，舒张完全第36页/共38页乙酰胆碱，心缩减弱，心率减慢，兴奋传导速度变慢部分结果分析乙酰胆碱与心肌M受体结合：1.K+通透性增加：（1）动作电位2，3期缩短，Ca2+内流减少心缩力减弱；（2）最大复极电位负值增加，离阈电位水平加大，心率减慢；（3）舒张期自动去极化速度减慢，心率减慢2.抑制Ca2+通道，使房室交界细胞动作电位幅度降低，兴奋传导速度减慢，心率减慢第37页/共38页感谢您的观看！第38页/共38页
