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第三章药物的杂质检验第1页，本讲稿共125页一、药物的纯度一、药物的纯度指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。第2页，本讲稿共125页杂质（impurity）是指：1.有毒副作用的物质2.本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质3.本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质第3页，本讲稿共125页二、药物中杂质的来源二、药物中杂质的来源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物（2）试剂、溶剂、催化剂类（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质第4页，本讲稿共125页2.贮藏过程中产生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等第5页，本讲稿共125页易发生水解反应的结构：易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等等易发生氧化反应的结构：易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等双键等第6页，本讲稿共125页例在药物生产过程中引入杂质的途径为A.原料不纯或部分未反应完全的原料造成B.合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成C.需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金属器皿及装置等引入杂质E.由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质第7页，本讲稿共125页三、杂质的分类三、杂质的分类药物中的杂质按来源分为1.一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。第8页，本讲稿共125页2.特殊杂质：指某一个或某一类药物在生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。第9页，本讲稿共125页四、药物的纯度与化学试剂的纯度四、药物的纯度与化学试剂的纯度药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。第10页，本讲稿共125页第二节第二节 药物的杂质检查法药物的杂质检查法一、杂质限量一、杂质限量指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示第11页，本讲稿共125页杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质量药品合格药品合格药品不合格药品不合格第12页，本讲稿共125页二、药物的杂质检查法二、药物的杂质检查法1.对照法限量检查法特点：不需知道杂质的准确含量第13页，本讲稿共125页2.灵敏度法系系指指在在供供试试品品溶溶液液中中加加入入试试剂剂，在在一定反应条件下，不得有正反应出现。一定反应条件下，不得有正反应出现。特点：不需对照品特点：不需对照品第14页，本讲稿共125页3.比较法比较法含量测定法：含量测定法：测定杂质的绝对含测定杂质的绝对含量，如测定吸光度、量，如测定吸光度、pH值等。值等。特点：准确测定杂质的量，不需特点：准确测定杂质的量，不需对照品对照品。第15页，本讲稿共125页三、三、杂质限量的计算杂质限量的计算第16页，本讲稿共125页第17页，本讲稿共125页示例1：检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为A.0.20g B.2.0g C0.020g D.1.0g E.0.10g第18页，本讲稿共125页已知：c1g/ml1106g/mlV2mlL0.0001%第19页，本讲稿共125页第三节第三节 一般杂质检查一般杂质检查一、一般杂质检查规则一、一般杂质检查规则药品检验操作标准药品检验操作标准规定：规定：1.遵循平行操作原则遵循平行操作原则第20页，本讲稿共125页（1）仪器的配对性）仪器的配对性 如纳氏比色如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作）对照品与供试品的同步操作第21页，本讲稿共125页2.正确的取样及供试品的称量范围1g不超过2%，1g不超过1%3.正确的比色、比浊方法4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份第22页，本讲稿共125页二、氯化物检查法二、氯化物检查法（一）原理对照法第23页，本讲稿共125页（二）检查方法（二）检查方法药典附录药典附录 除另有规定外，取各药品项下规除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸中性），再加稀硝酸10m1；溶液如；溶液如不澄清，应滤过；置不澄清，应滤过；置50ml第24页，本讲稿共125页纳氏比色管中，加水使成约纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳纳氏比色管中，加稀硝酸氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成，加水使成40m1，摇匀，摇匀，即得对照溶液。即得对照溶液。第25页，本讲稿共125页于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液酸银试液1.0m1，用水稀释使成，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即上，从比色管上方向下观察，比较，即得得第26页，本讲稿共125页（三）测定条件1.氯化物浓度以50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。第27页，本讲稿共125页（1）加速AgCl浑浊的形成；（2）产生较好的乳浊；（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。第28页，本讲稿共125页3.试剂：硝酸银5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀第29页，本讲稿共125页6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。7.平行操作原则第30页，本讲稿共125页（四）干扰及排除1.若供试品有色，需经处理后方可检查。（1）内消色法：倍量法，为取供试品两等份，其中一份经处理，消除其中待测离子后加入一定标准量的待测离子作为对照管，另一份作为供试品管，在相同条件下依法操作，检查待测离子是否超过限量。第31页，本讲稿共125页（2）外消色法：外消色法为加入一定的有色物，如稀焦糖等，或经处理降低色度，不干扰测定，如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。第32页，本讲稿共125页2.当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去（1）碘中氯化物和溴化物的检查（2）碘化物中氯化物的检查（3）溴化物中氯化物的检查第33页，本讲稿共125页3.不溶于水的有机药物（1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。（2）加热使供试品溶解，放冷，过滤，取滤液进行检查。（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。第34页，本讲稿共125页三、硫酸盐检查法三、硫酸盐检查法（一）原理对照法第35页，本讲稿共125页（二）测定条件1.标准K2SO4溶液:每1ml相当于0.1mg的SO42，50ml溶液中含0.10.5mg的SO42所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液1.05.0ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。第36页，本讲稿共125页3.试剂：氯化钡5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀第37页，本讲稿共125页若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。（三）干扰及排除第38页，本讲稿共125页四、铁盐检查法四、铁盐检查法1.原理对照法（一）硫氰酸盐法ChP（2005）、USP（24）第39页，本讲稿共125页 2.检查方法检查方法药典附录药典附录 除另有规定外，取各药品项下规定量除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成的供试品，加水溶解使成25ml，移置，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过与过硫酸铵硫酸铵50mg，用水稀释使成，用水稀释使成第40页，本讲稿共125页35m1后，加后，加30%硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液3ml，再，再加水适量稀释成加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液液（取各药品项下规定量的标准铁溶液)，置，置50ml纳氏比色管中，纳氏比色管中，第41页，本讲稿共125页加加水水使使成成25ml，加加稀稀盐盐酸酸4ml与与过过硫硫酸酸铵铵50mg，用用水水稀稀释释使使成成35m1后后，加加30%硫硫氰氰酸酸铵铵溶溶液液3ml，再再加加水水适适量量稀稀释成释成50ml，摇匀）比较，即得，摇匀）比较，即得第42页，本讲稿共125页3.测定条件（1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10g/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml第43页，本讲稿共125页（2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行（4）检查Fe2+和Fe3+第44页，本讲稿共125页（5）铁铁盐盐检检查查时时，加加氧氧化化剂剂氧氧化化Fe2+为为Fe3+。加加过过硫硫酸酸铵铵可可氧氧化化Fe2+为为Fe3+，同同时时可可防防止止光光线线使使硫硫氰氰酸酸铁铁还还原原或或分分解解褪色。褪色。加硝酸后加热也可氧化加硝酸后加热也可氧化Fe2+为为Fe3+第45页，本讲稿共125页（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。第46页，本讲稿共125页4.干扰及排除干扰及排除（1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。（2）具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。（3）干扰离子的影响第47页，本讲稿共125页五、重金属检查法五、重金属检查法 以铅为代表以铅为代表中国药典（2005年版）共收载四法。第48页，本讲稿共125页（一）第一法硫代乙酰胺法1.原理对照法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。第49页，本讲稿共125页2.测定条件（1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10gPb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。第50页，本讲稿共125页（2）本法用2mlpH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。（3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂第51页，本讲稿共125页（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。A.外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。B.内消色法C.微孔滤膜过滤法3.干扰及排除第52页，本讲稿共125页（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰第53页，本讲稿共125页（3）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法检查。第54页，本讲稿共125页（二）第二法炽灼残渣法适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。1.原理对照法第55页，本讲稿共125页2.操作方法第56页，本讲稿共125页（三）第三法硫化钠法适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。1.原理对照法第57页，本讲稿共125页2.测定条件（1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠第58页，本讲稿共125页（四）第四法微孔滤膜法适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查。依一法检查，微孔滤膜过滤后比较色斑。第59页，本讲稿共125页 USP（23）检查重金属时，使用硫化氢试）检查重金属时，使用硫化氢试液显色。检查时，除用供试管、对照管，还规液显色。检查时，除用供试管、对照管，还规定用监控管（含定用监控管（含25ml供试品溶液和供试品溶液和2ml标准铅溶标准铅溶液），三管同法检查。液），三管同法检查。我国我国药品检验操作标准药品检验操作标准中规定，检查新中规定，检查新产品中重金属时，应用该法。产品中重金属时，应用该法。第60页，本讲稿共125页六、砷盐检查法六、砷盐检查法（一）古蔡法第61页，本讲稿共125页遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较1.原理对照法第62页，本讲稿共125页2.操作方法（1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作应平行操作第63页，本讲稿共125页第64页，本讲稿共125页3.测定条件（1）标准砷溶液临用新配，1g/ml。（2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。（3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：第65页，本讲稿共125页A.还原As5+为As3+，加快反应速度；B.碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；C.氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；第66页，本讲稿共125页D.可抑制微量Sb的干扰，在实验条件下，100gSb存在也不干扰测定。（4）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰，醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm。（5）锌粒应无砷）锌粒应无砷第67页，本讲稿共125页（6）砷斑不稳定，应立即观察）砷斑不稳定，应立即观察4.干扰及排除干扰及排除（1）供供试试品品若若为为硫硫化化物物、亚亚硫硫酸酸盐盐、硫硫代代硫硫酸酸盐盐时时，加加HNO3，使使氧氧化化成成硫硫酸酸盐盐，以以除除去去干干扰扰，如如硫硫代代硫硫酸酸钠钠中中砷砷盐的检查。盐的检查。第68页，本讲稿共125页（2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将化亚锡试液，将Fe3+还原为还原为Fe2+。如枸橼。如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。酸铁铵中砷盐的检查。（3）具具环环状状结结构构的的有有机机药药物物，要要先先行行有有机破坏后再进行检查。机破坏后再进行检查。常用的有机破坏方法：常用的有机破坏方法：第69页，本讲稿共125页（4）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法 酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查第70页，本讲稿共125页（二）Ag-DDC法检查、含量测定ChP(2005)、USP（24）对照法对照法第71页，本讲稿共125页砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。第72页，本讲稿共125页第73页，本讲稿共125页用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，ChP（2005）用三乙胺。本法适用于含Sb量小于500g的供试品。第74页，本讲稿共125页检查不含金属的有机药物或挥发性无机药物中混入的无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。1.原理样品炭化后+H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）限量一般为0.1%0.2%七、炽灼残渣检查法七、炽灼残渣检查法第75页，本讲稿共125页2.操作方法第76页，本讲稿共125页 3.注意事项（1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。第77页，本讲稿共125页（3）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。（2）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。（4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化第78页，本讲稿共125页八、溶液颜色检查法八、溶液颜色检查法控制药物中有色杂质限量的方法。ChP(2000)采用三种方法检查。第第一一法法 目目视视比比色色法法 即即与与标标准准比比色色液液比比较较的方法，全波长范围定性观察的方法，全波长范围定性观察第79页，本讲稿共125页观察方法观察方法第80页，本讲稿共125页标准比色液的配制标准比色液的配制第81页，本讲稿共125页第二法分光光度法单一波长定量第三法色差计法全波长范围定量本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。测色仪器一般为光电积分型色差计第82页，本讲稿共125页九、易炭化物检查法九、易炭化物检查法 检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。方法：H2SO4炭化后与对照液比较。第83页，本讲稿共125页对照液对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；第84页，本讲稿共125页比色比色：同置白色背景前，平视观察比较。（3）高锰酸钾液第85页，本讲稿共125页十、澄清度检查法十、澄清度检查法 检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。1.检查方法对照法第86页，本讲稿共125页2.浊度标准液的配制中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准。反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。第87页，本讲稿共125页1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液浊度标准原液浊度标准液（5个级号）第88页，本讲稿共125页3.判断药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。4.溶剂：水、酸、碱、有机溶剂有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”第89页，本讲稿共125页十一、干燥失重测定法干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。测定方法：第90页，本讲稿共125页（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法 适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。干燥失重：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。第91页，本讲稿共125页炽灼残渣：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼.5h后进行。（二）干燥剂干燥法适用于受热易分解或挥发的供试品。干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5。第92页，本讲稿共125页（三）减压干燥法适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。第93页，本讲稿共125页（四）热分析法（四）热分析法 热分析法是在程序控制温度下，热分析法是在程序控制温度下，精确记录待测物质理化性质与温度的精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程所发生的晶型关系，研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变和脱水、热分解、氧化还原等化学变第94页，本讲稿共125页化，对物质进行物理常数（如熔点和化，对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法。沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法。亦可用于药物的稳定性研究及制剂辅亦可用于药物的稳定性研究及制剂辅料的优选料的优选第95页，本讲稿共125页1.热重法热重法（TGA）热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术。记录质量变化对温度的关系曲线即热重曲线。热重曲线的纵坐标为质量(m)，横坐标为温度(T)或时间(t)。第96页，本讲稿共125页m第97页，本讲稿共125页 本本法法适适用用于于药药物物结结晶晶水水的的测测定定和和贵贵重重药药物物或或在在空空气气中中极极易易氧氧化化药药物物的的干干燥燥失失重重分析。分析。特点：准确测量物质的质量变化及变化速度、样品用量少、速度快第98页，本讲稿共125页2.差热分析法差热分析法（DTA）差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质和参比物之间的温度差（T）与温度(或时间)之间的关系的一种技术。第99页，本讲稿共125页差热分析曲线记录的纵坐标为样品与参比物的温度差(T)，T与热容量差(CRCs)成正比，横坐标为温度。第100页，本讲稿共125页T第101页，本讲稿共125页本法可鉴别药物或其多晶形，可检查药物的纯度第102页，本讲稿共125页3.差示扫描量热法差示扫描量热法（DSC）差示扫描量热法是在程序控制温度下，测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术。第103页，本讲稿共125页第104页，本讲稿共125页本法可鉴别药物或其多晶形、纯度检查以及熔点和水分等的测定。第105页，本讲稿共125页十二、有机溶剂残留量测定法十二、有机溶剂残留量测定法1.有机溶剂残留量测定法是用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷。第106页，本讲稿共125页2.检查方法中国药典采用气相色谱法检查残留有机溶剂色谱条件：色谱条件：固定相：直径为0.250.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球第107页，本讲稿共125页载气：氮气检测器：氢火焰离子化检测器检测柱温：80170色色谱谱系系统统适适用用性性试试验验：中国药典规定，在残留溶剂测定前应作色谱系统适用性试验。第108页，本讲稿共125页（1）用待测物的色谱峰计算的理论板数应大于1000；（2）用内标法测定时，内标物与待测物色谱峰的分离度应大于1.5；第109页，本讲稿共125页（3）用内标法测定时，取标准溶液（含限量待测溶液与内标液）进样5次，待测物与内标物峰面积之比值的相对标准偏差应不大于5；若用外标法测定，待测物峰面积的相对标准偏差应不大于10第110页，本讲稿共125页3.测定法残留溶剂的测定有直接进样法（第一法）和顶空进样法（第二法）两种。第一法溶液直接进样法第二法顶空进样法第111页，本讲稿共125页从方法的精密度考虑，二氧六环、吡啶宜用第一法；苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷可用第一法或第二法，环氧乙烷直接用第二法。第112页，本讲稿共125页第三节第三节 特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法不同的药物，由于其合成工艺，原料和不同的药物，由于其合成工艺，原料和结构性能等不同，在生产和贮藏过程中结构性能等不同，在生产和贮藏过程中可能引入特有的杂质，即特殊杂质。药可能引入特有的杂质，即特殊杂质。药物中特殊杂质的检查，主要是根据药物物中特殊杂质的检查，主要是根据药物和杂质在物理和化学性质上的差异来进和杂质在物理和化学性质上的差异来进行的，方法的专属性十分关键。行的，方法的专属性十分关键。第113页，本讲稿共125页（一一）利利用用药药物物和和杂杂质质在在物物理理性性质质上上的的差差异异，检检查查药药物物中的特殊杂质中的特殊杂质 1、如利用药物和杂质在臭味及挥发性上的差异、颜、如利用药物和杂质在臭味及挥发性上的差异、颜色的差异（杂质有色，检查溶液颜色），溶解行为的差异色的差异（杂质有色，检查溶液颜色），溶解行为的差异（主药可溶于水、有机溶剂或酸、碱，杂质不溶，检查溶（主药可溶于水、有机溶剂或酸、碱，杂质不溶，检查溶液澄清度）、旋光性质的差异（限定药物溶液的比旋度范液澄清度）、旋光性质的差异（限定药物溶液的比旋度范围，从而限定杂质的含量）、对光吸收性质的差异（如杂围，从而限定杂质的含量）、对光吸收性质的差异（如杂质有质有UV最大吸收波长而药物无）最大吸收波长而药物无），则限定药液在该波长处的，则限定药液在该波长处的A值来控制杂质；杂质与药物值来控制杂质；杂质与药物UV谱重叠时，控制供试液的谱重叠时，控制供试液的UV吸收度比值来控制杂质的量。杂质与药物的红外吸收吸收度比值来控制杂质的量。杂质与药物的红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异，可光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异，可用以检查药物中低效或无效晶型杂质。此外尚有原子吸收用以检查药物中低效或无效晶型杂质。此外尚有原子吸收分光光度法用于杂质（金属元素）限量检查；荧光分析法分光光度法用于杂质（金属元素）限量检查；荧光分析法用于杂质限量检查等。用于杂质限量检查等。第114页，本讲稿共125页 2、利利用用吸吸附附或或分分配配性性质质的的差差异异检检查查药药物物中中的的特特殊杂质殊杂质 药药物物中中的的一一些些杂杂质质，如如反反应应的的中中间间体体、副副产产物物、分分解解产产物物等等，和和药药物物的的结结构构相相近近，与与某某些些试试剂剂的的反反应应也也相相同同或或相相似似，必必须须分分离离后后再再检检查查。由由于于色色谱谱法法可可以以利利用用药药物物与与杂杂质质的的吸吸附附或或分分配配性性质质的的差差异异，将将它它们们分分离离、检检测测，因因而而广广泛泛应应用用于于药药物物的的杂杂质质检检查查中中。色色谱谱法法检检查查特特殊殊杂质的方法有：杂质的方法有：TLC、纸色谱法和、纸色谱法和HPLC。第115页，本讲稿共125页（1）TLC法法 TLC简简便便、快快速速、灵灵敏敏度度也也较较高高，又又不不需需要特殊设备，在杂质检查中应用很多。常用的方法有：要特殊设备，在杂质检查中应用很多。常用的方法有：杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。供试液和杂质对照品溶液分别点样于同一硅胶情况。供试液和杂质对照品溶液分别点样于同一硅胶G薄薄层板上，用展开剂展开后，显色，供试品溶液如显与对层板上，用展开剂展开后，显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色（或荧光强度）与对照品照品相应的杂质斑点，其颜色（或荧光强度）与对照品溶液的主斑点颜色（或荧光强度）比较，不得更深。溶液的主斑点颜色（或荧光强度）比较，不得更深。杂杂质质限限量量计计算算：假假设设供供试试液液浓浓度度为为0.10gml-1，对对照照品品（杂杂质质）溶溶液液浓浓度度为为0.50 mgml-1，点点样样量量均均为为5l：L=（0.505/0.11035）1000.5第116页，本讲稿共125页供供试试品品自自身身的的对对照照法法 适适用用于于杂杂质质的的结结构构不不能能确确定定，或或无无杂杂质质对对照照品品的的情情况况。要要求求供供试试品品与与所所检检杂杂质质对对显显色色剂剂所所显显的的颜颜色色应应相相同同，显色灵敏度也应相同或相近。显色灵敏度也应相同或相近。方方法法：取取供供试试品品制制成成供供试试品品溶溶液液（浓浓度度假假设设为为20mgml-1）。取取供供试试品品溶溶液液加加溶溶剂剂稀稀释释制制成成对对照照品品溶溶液液（浓浓度度假假设设为为0.4 mgml-1）。各各取取10l，分分别别点点样样于于同同一一硅硅胶胶G薄薄层层板板上上，展展开开剂剂展展开开，晾晾干干，显显色色剂剂显显色色。供供试试品品溶溶液液如如显显杂杂质质斑斑点点，不不得得多多于于1个个（或或数数个个，视视具具体体药药品品而而定定），其其颜颜色色与与对对照照品品溶溶液液所所显的主斑点比较，不得更深。显的主斑点比较，不得更深。杂质限量计算杂质限量计算L=0.410/20102第117页，本讲稿共125页 对照药物法对照药物法 （2）HPLC法法 HPLC法法不不仅仅分分离离效效能能高高，而而且且可可以以准准确确地地测测定定各各组组分分的的峰峰面面积积，在在杂杂质质检查中应用日益增多。检查中应用日益增多。采采用用HPLC法法检检查查杂杂质质时时，应应对对仪仪器器进进行行系系统统适适用用性性试试验验（柱柱理理论论板板数数、分分离离度度、拖拖尾因子等），以保证仪器达到要求。尾因子等），以保证仪器达到要求。HPLC法检查杂质的方法有五种类型，仅举法检查杂质的方法有五种类型，仅举两种类型，其余请自阅。两种类型，其余请自阅。第118页，本讲稿共125页 峰峰面面积积归归一一化化法法：通通常常用用于于粗粗略略考考察察供供试试品品中中的杂质。的杂质。方方法法：取取供供试试品品溶溶液液适适量量，进进样样，经经HPLC分分离离，测测定定后后，计计算算出出各各杂杂质质峰峰面面积积及及其其总总和和占占总总峰峰面面积积（含含药药物物的的峰峰面面积积，不不含含溶溶剂剂峰峰面面积积（做做空空白白试试验验确确定定）的的百百分分率率，不不得得超超过过限量。限量。注注意意事事项项 峰峰面面积积归归一一化化法法检检查查杂杂质质虽虽简简便便、易易行行、但但当当杂杂质质与与药药物物的的吸吸收收程程度度不不一一致致时时，测定误差大。测定误差大。应用示例：利巴韦林中有关物质的检查应用示例：利巴韦林中有关物质的检查第119页，本讲稿共125页以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水或以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水或0.03mol/L硫酸铵溶液为流动相，检测波长为硫酸铵溶液为流动相，检测波长为207nm。取供试品，加水分别制成每。取供试品，加水分别制成每1ml中含中含0.4mg的供试品溶液与每的供试品溶液与每1ml中含中含5g的对照溶的对照溶液，取对照溶液液，取对照溶液10 l注入液相色谱仪进行预试，注入液相色谱仪进行预试，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高度达满量调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高度达满量程的程的20-25；再取供试品溶液；再取供试品溶液10 l注入液注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的两倍，相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的两倍，计算各杂质峰面积之和，不得大于总峰面积的计算各杂质峰面积之和，不得大于总峰面积的1.0。第120页，本讲稿共125页 不不加加校校正正因因子子的的主主成成分分自自身身对对照照法法：用用于于没没有有杂杂质质对对照品时杂质的限量检查。照品时杂质的限量检查。方方法法：首首先先制制备备供供试试品品溶溶液液（假假定定浓浓度度为为0.1 mgml-1）。取取此此液液稀稀释释成成与与杂杂质质限限度度相相当当的的浓浓度度（若若杂杂质质限限量量为为1，则则该该浓浓度度应应为为1gml-1）,作作为为对对照照溶溶液液。取取对对照照溶溶液液20l注注入入液液相相色色谱谱仪仪，调调节节检检测测灵灵敏敏度度，使使主主成成分分色色谱谱峰峰的的峰峰高高为为满满量量程程的的1030，取取上上述述两两种种溶溶液液各各20l，分分别别注注入入液液相相色色谱谱仪仪，记记录录色色谱谱图图至至主主成成分分峰峰保保留留时时间间的的2倍倍。供供试试品品溶溶液液的的色色谱谱图图中中如如有有杂杂质质峰峰，计计算算各各杂杂质质峰峰面面积积之之和和，不不得得大大于于对对照照溶溶液液主主成成分分峰峰的的峰峰面面积积。杂杂质质限量：限量：1应用示例：甲硝唑中应用示例：甲硝唑中2-甲基甲基-5-硝基咪唑的检查硝基咪唑的检查第121页，本讲稿共125页 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇甲醇-水（水（15：85）为流动相，检测波长为）为流动相，检测波长为300nm。取供试品，加甲醇分别制成每。取供试品，加甲醇分别制成每1ml中中含含0.1mg的供试品溶液与每的供试品溶液与每1ml中含中含0.01mg的的对照溶液。取对照溶液对照溶液。取对照溶液20l 注入液相色谱仪注入液相色谱仪进行预试，调整检测灵敏度，使主成分色谱进行预试，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高度达满量程的峰高度达满量程的10-30；再取上述两；再取上述两种溶液各种溶液各20 l 分别注入液相色谱仪，记录色分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的两倍。供试品溶谱图至主成分峰保留时间的两倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，计算各杂质峰面液的色谱图中如有杂质峰，计算各杂质峰面积之和，不得大于对照溶液主成分峰面积的积之和，不得大于对照溶液主成分峰面积的1（杂质限量：（杂质限量：0.1）。）。第122页，本讲稿共125页（二）利用药物和杂质在化学性质上的差异（二）利用药物和杂质在化学性质上的差异检查药物中的杂质检查药物中的杂质 如利用药物与杂质之间的酸碱性的差如利用药物与杂质之间的酸碱性的差异、氧化还原性的差异进行检查；利用杂质异、氧化还原性的差异进行检查；利用杂质与一定试剂反应产生沉淀、颜色、气体等进与一定试剂反应产生沉淀、颜色、气体等进行检查。行检查。第123页，本讲稿共125页第四节药物的安全性检查一热原检查法二毒性试验三刺激性试验四过敏试验五降压物质检查法第124页，本讲稿共125页作业：二（2，4，5）三（1，2）第125页，本讲稿共125页