医学专题—乙肝五项(2)34114.ppt

乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测(jin c)(jin c)第一页，共十七页。双抗体(kngt)夹心法乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面乙型肝炎病毒表面(biomin)(biomin)抗抗体体乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗原抗原乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗体抗体乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体双抗体(kngt)夹心法双抗原夹心法竞争抑制法竞争抑制法乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 第二页，共十七页。乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原表面抗原检验原理检验原理本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，检测(jin c)人血清或血浆中的乙肝表面抗原（HBsAg）。第三页，共十七页。乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原表面抗原样本要求样本要求本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血(rn xu)的样品。样品中应无微生物，可在28储存一周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。第四页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原检验方法检验方法配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照孔3孔，阳性对照孔2孔和空白对照孔1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。稀释：每孔加入样品稀释液20 L，空白对照孔除外。加样：分别在相对应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100L，轻轻振荡混匀。（非常重要）温育：用封板膜封后，置371温育602分钟。（如有酶联反应加速(ji s)仪温育时间可减半）。加酶：每孔加入酶标试剂50L，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封后，置371温育301分钟。（如有酶联反应加速仪温育时间可减半）。洗版：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，拿出来在扣在洗版纸上重重拍干。显色：每孔加入显色剂A、B液（底物）各50L，轻轻振荡混匀，371避光显色30分钟。测定：每孔加入终止液50L，轻轻振荡混匀，十分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450um/600650nm），用空白孔凋零点后测定各孔A值。第五页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原第六页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原注意事项注意事项本样品仅用于体外诊断，操作应按说明说严格进行。封板膜不能重复使用，不同批号、酶标试剂和阴性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒液（如84消毒液）的环境下操作。使用前请将试剂平稳至室温（平衡30分钟以上），实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即回放28。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封28保存。过期试剂请勿使用。加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。洗涤时各孔均匀(jnyn)需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定3060秒浸泡时间。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。显色时必须先加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HBV（乙型肝炎）感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。第七页，共十七页。乙型肝炎病毒表面(biomin)抗体【检验原理】本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝表面抗原（HBsAg），加入待测样品及酶标抗原（HBsAg-HRP）试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原”复合物。洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物(chnw)，终止反应后为黄色。若样品中乙无型肝炎表面抗体时，不显色。第八页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)表面抗体【检验方法】配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50ul。加霉：每孔加入酶标试剂(shj)50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。温育：用封板膜封板后，置于37温育30分钟。洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟。测定：每孔加终止液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。第九页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)e抗体检验原理：本试剂采用竞争抑制酶联免疫法吸附(xf)法实验原理，在微孔板上预包被乙肝e抗原，加入待测样品及酶标抗体（HBeAb-HRP）试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。若样本中无乙型肝炎e抗体时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原-酶标抗体”复合物，洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生产蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样本中存在乙型肝炎e抗体时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原-抗体”复合物，不显色。第十页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)e抗体检验方法：配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照孔，阳性对照2孔和孔和空白对照空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50l。加酶：每孔加人酶标试剂加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封板后置温育：用封板膜封板后置37温育温育30min。洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。遍，最后一次尽量扣干。显色显色(xin s)(xin s)：每孔加人显色：每孔加人显色(xin s)(xin s)剂剂A、B液各液各50l，轻轻振荡混匀，轻轻振荡混匀，37避光显避光显色色15min。测定：每孔加终止液测定：每孔加终止液50l，轻轻振荡混匀，轻轻振荡混匀，10min内测定结果。设定酶标仪波长内测定结果。设定酶标仪波长于于450nm处（建议用双波长处（建议用双波长450nm/600-650nm检测），用空白孔调零点后测定检测），用空白孔调零点后测定各孔各孔A值。值。第十一页，共十七页。乙型肝炎病毒(bngd)核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）、e抗体（抗-HBe）检测（1）抗-HBc检测 先用生理盐水将待测血清作1:30稀释，然后取50l加入相应的包被板（或条）中，同时设阳性、阴性及空白对照各一孔（对照血清不必稀释）；再向每孔加入酶结合物50l（空白孔不加），再进行同1的操作。但结果观察需反看：目测法是以不显色（无色(w s)）孔为阳性；比色法是以标本吸光度A值0.5N（阴性对照值）为阴性，标本吸光度A值0.5N者判为阳性。第十二页，共十七页。乙肝五项的32种组合(zh)第十三页，共十七页。第十四页，共十七页。第十五页，共十七页。谢谢谢谢(xi xie)第十六页，共十七页。内容(nirng)总结乙肝病毒五项检测。加酶：每孔加入酶标试剂50L，空白孔除外，轻轻振荡混匀。加入不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。在洗版结束后，必须(bx)立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。加霉：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。谢谢第十七页，共十七页。