医学专题一动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)..ppt

第一页，共二十一页。动物细胞与植物(zhw)细胞的差别：无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种(zzhng)动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁不能发育(fy)成新的动物个体第二页，共二十一页。一、动物一、动物(dngw)细胞融合（细胞杂交）细胞融合（细胞杂交）P521、概念、概念(ginin)：指两个或多个动物细胞(xbo)结合形成一个细胞(xbo)的过程。2、结果、结果：形成单核的杂交细胞3、原理、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5 5、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程(利用灭活仙台病毒利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特是动物细胞融合所特有的。有的。病毒外壳上病毒外壳上的某些糖蛋白可能有的某些糖蛋白可能有促进细胞融合的功能。促进细胞融合的功能。)思考讨论：思考讨论：思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？不灭活行吗？不灭活行吗？不灭活行吗？不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合第三页，共二十一页。第四页，共二十一页。不同不同DNADNA的两个的两个(lin)(lin)细胞细胞灭活病毒灭活病毒(bngd)(bngd)诱导细胞融合诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行进行(jnxng)(jnxng)有丝有丝分裂分裂5 5、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程第五页，共二十一页。6、意义、意义：突破了有性杂交方法(fngf)的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物(shngw)新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体阅读(yud)课本53页第六页，共二十一页。总结总结(z(zngji)ngji)：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目比较项目比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合原原原原 理理理理融合前处理融合前处理融合前处理融合前处理诱诱诱诱 导导导导 方方方方 法法法法用用用用 途途途途细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物植物植物植物(zhw)(zhw)(zhw)(zhw)细胞的全能性细胞的全能性细胞的全能性细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用纤维素酶、用纤维素酶、用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞使细胞使细胞使细胞(xbo)(xbo)分散分散分散分散物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法生物方法生物方法获得部分获得部分获得部分获得部分或完整植株或完整植株或完整植株或完整植株主要用于制备主要用于制备主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体第七页，共二十一页。提问？1.1.抗体是由何种细胞产生抗体是由何种细胞产生(chnshng)(chnshng)的？的？效应效应B B细胞（浆细胞）。细胞（浆细胞）。2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种抗体吗？能分泌多种抗体吗？每一个淋巴细胞只分泌每一个淋巴细胞只分泌一种一种特异性抗体。特异性抗体。3.3.简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？抗原抗原 动物体动物体 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯二、单克隆抗体二、单克隆抗体(kngt)刺激(cj)浆细胞第八页，共二十一页。体外培养淋巴细胞能无限体外培养淋巴细胞能无限(wxin)(wxin)增殖吗增殖吗?怎样怎样解决这个问题？解决这个问题？4.4.这种方法获得的抗体有什么这种方法获得的抗体有什么(shn me)(shn me)缺陷？缺陷？产量低，纯度低，特异性差产量低，纯度低，特异性差第九页，共二十一页。一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo)能无限增殖能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞(xbo)动物动物(dngw)细胞培养技细胞培养技术术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆抗单克隆抗体体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又又能大量繁殖的细胞能大量繁殖的细胞第十页，共二十一页。(1)(1)、原理、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本(qn bn)的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。(2)(2)、过过程程(guchng)(guchng)第十一页，共二十一页。效应效应(xioyng)(xioyng)B B淋巴细胞淋巴细胞注射注射(zhsh)(zhsh)特定抗原蛋白特定抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合(rngh)(rngh)（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中细胞有几培养液中细胞有几种类型？融合细胞种类型？融合细胞几种几种类型类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-B-B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养1 1、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂交次筛选目的：得到杂交次筛选目的：得到杂交次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。瘤细胞（多种）。瘤细胞（多种）。瘤细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂交次筛选目的：在杂交次筛选目的：在杂交次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生瘤细胞中筛选出能产生瘤细胞中筛选出能产生瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。单一抗体的杂交瘤细胞。单一抗体的杂交瘤细胞。单一抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高产生相应的产生相应的产生相应的产生相应的B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞第十二页，共二十一页。2.诱导其融合的方法诱导其融合的方法(fngf)有哪些？有哪些？3.融合融合(rngh)后培养液中有几种细胞后培养液中有几种细胞?4.怎样怎样(znyng)筛选出杂交瘤细胞，筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点杂交瘤细胞有何优点?原因？原因？1.注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么?5.为何要进行克隆化培养和专为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选一抗体检测，多次筛选?6.大量增殖杂交瘤细胞和获得单大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法抗的方法?产生相应的产生相应的产生相应的产生相应的B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体体体体具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取第十三页，共二十一页。如何如何(rh)(rh)进行杂交瘤细胞的进行杂交瘤细胞的抗体检测抗体检测及及克隆化培养克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法有限稀释法”来选择。来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体检测各孔上清液中细胞分泌的抗体。那些上清液。那些上清液可与可与特定抗原特定抗原结合的培养孔为阳性孔。结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选(tioxun)(tioxun)阳性孔的细阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行胞继续进行有限稀释，一般需进行3 34 4次，直至确信每个次，直至确信每个孔中增殖的细胞为孔中增殖的细胞为单克隆细胞单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。克隆化培养。第十四页，共二十一页。(2)(2)、过过程程(guchng)(guchng)B淋巴细胞骨髓瘤细胞(xbo)诱导(yudo)融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养基第一次筛选第一次筛选杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养专一抗体检测 第二次筛选第二次筛选相应杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体第十五页，共二十一页。(3).(3).单克隆抗体单克隆抗体(kngt(kngt)的应的应用：用：单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)的优点：特异性强、灵敏度高、的优点：特异性强、灵敏度高、产量大产量大 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合性结合 优点：优点：准确、高效准确、高效(o xio)(o xio)、简易、快速、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。第十六页，共二十一页。一种一种(y zhn)诱导细胞融合的新诱导细胞融合的新方法方法一种一种(y zhn)新新细胞细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势第十七页，共二十一页。1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞、科学家用小鼠骨髓瘤细胞(xbo)与某种细胞与某种细胞(xbo)融合，得融合，得到杂交细胞到杂交细胞(xbo)，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞髓瘤细胞(xbo)融合的是（融合的是（）A.经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 B.没经过免疫的没经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞C.经过免疫的经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A第十八页，共二十一页。2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 B.C.所采用的原理所采用的原理(yunl)完全相同完全相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 B D第十九页，共二十一页。4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导淋巴细胞诱导(yudo)融合而成融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D第二十页，共二十一页。内容(nirng)总结动物细胞融合与。动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：。物理法：离心、振动、电激。病毒外壳上的某些糖蛋白可能有促进细胞融合的功能。该细胞继承双亲(shungqn)细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。培养液中或小鼠腹腔中培养。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。B-B细胞。瘤-瘤细胞。单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大。D。B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成第二十一页，共二十一页。