蛋白质变性与沉淀.ppt

蛋白质变性与沉淀一、实验目的一、实验目的 1.1.掌握蛋白质变性与沉淀掌握蛋白质变性与沉淀的原理及各种沉淀方法；的原理及各种沉淀方法；2.2.熟悉刻度吸量管的正确熟悉刻度吸量管的正确使用；使用；3.3.了解蛋白质变性与沉淀了解蛋白质变性与沉淀两者的关系。两者的关系。三、实验仪器与试剂三、实验仪器与试剂 1.仪器试管、刻度吸量管、洗耳球等。2.试剂 5蛋白质蛋白质溶液、溶液、2.5蛋白质蛋白质溶液、溶液、10ZnSO4溶液、溶液、o.1mol/LNaOH、1三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体）四、实验内容及四、实验内容及操作步骤操作步骤1.1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质（一）实验内容（一）实验内容（二）（二）操作步骤操作步骤1.1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质1 1）实验原理）实验原理COO-NH3+POH-H+重金属离子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpH pIpH pI pI两性离子两性离子负电荷负电荷正电荷正电荷盐盐盐盐2）操作步骤操作步骤试剂（滴）试剂（滴）试管试管1 1试管试管2 2试管试管3 35%蛋白质溶液蛋白质溶液2D2D2D0.1mol/L NaOH2D10%ZnSO420D20D1%三氯醋酸三氯醋酸20D现象现象3 3）观察、记录实验现象，并解释之。）观察、记录实验现象，并解释之。2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质 1 1）实验原理）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白乙醇溶解于水，破坏蛋白质分子的水化膜，加入少量中质分子的水化膜，加入少量中性盐抑制蛋白质的解离，使电性盐抑制蛋白质的解离，使电荷减少，沉淀更完全。荷减少，沉淀更完全。2）操作步骤操作步骤试剂（试剂（mL）试管试管1 1试管试管2 22.5%蛋白质蛋白质溶液溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适量）数粒（适量）无水无水乙醇乙醇1mL1mL现象现象3）观察、记录实验现象，并解释之。观察、记录实验现象，并解释之。五、注意事项五、注意事项 1.1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污染试剂。污染试剂。2.2.刻度吸量管不能交叉使用，否则刻度吸量管不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。污染试剂，影响反应现象。3.3.做完实验把把试剂按原样摆放，做完实验把把试剂按原样摆放，试管和试管和刻度吸量管冲刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干洗干净，桌面擦干净，登记签名。净，登记签名。4.4.值日生听老师安排，认真打扫，值日生听老师安排，认真打扫，经老师批准才能离开实验室。经老师批准才能离开实验室。六、思考题六、思考题 1.1.临床抢救重金属中毒患者，临床抢救重金属中毒患者，为什么用鸡蛋清或牛奶？为什么用鸡蛋清或牛奶？2.2.蛋白液中加入适量乙醇，为蛋白液中加入适量乙醇，为什么会产生沉淀？什么会产生沉淀？3.3.蛋白液在碱性条件下加入蛋白液在碱性条件下加入ZnSO4，为什么会产生沉淀？，为什么会产生沉淀？4.4.蛋白液中加入三氯醋酸蛋白液中加入三氯醋酸 ，为，为什么会产生沉淀？什么会产生沉淀？下次实验：下次实验：P74页页 激活剂及抑制剂对酶活性的影响激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验报告明天交，请组长负起责实验报告明天交，请组长负起责任。谢谢同学们配合！任。谢谢同学们配合！下次实验：下次实验：P70页页 酶的特异性酶的特异性实验报告可以下课交，实验报告可以下课交，最晚明天交，请组长负起最晚明天交，请组长负起责任。谢谢同学们配合！责任。谢谢同学们配合！此此课件下件下载可自行可自行编辑修改，修改，仅供参考！供参考！感感谢您的支持，我您的支持，我们努力做得更好！努力做得更好！谢谢!