(42)--3.3.2尿液有形成分分析.ppt

临床尿液检验仪器之尿液有形成分分析仪方法学进展流式细胞术原理的有形成分分析 工作原理 仪器结构 识别分析 检测项目 内容概要:一、尿有形成分检验方法学进展一、尿有形成分检验方法学进展传统方法传统方法一、尿有形成分检验方法学进展一、尿有形成分检验方法学进展二、流式原理二、流式原理的尿有形成分分析的尿有形成分分析1、工作原理流式细胞分析技术二、流式原理二、流式原理的尿有形成分分析的尿有形成分分析荧光核酸染料 菲啶染料，染细胞的核酸成分（DNA），在480nm光波激发时，产生610nm的橙黄色光波，用于区别有核的细胞和无核的细胞（如RBC与WBC，病理管型和透明管型）；羧花氰染料，穿透能力强，与细胞质膜（细胞膜、核膜和线粒体）的脂层成分发生反应结合，在460nm 的光波激发时产生505nm的绿色光波，主要用于区别细胞的大小（如上皮细胞和白细胞的区别）。1、工作原理电阻抗检测系统 包括测定细胞体积的电阻抗系统和测定尿液导电率的传导系统。部分标本含有某些结晶，影响电阻抗测定的敏感性，为了保证尿液标本传导性稳定，可以在稀释液中使用含EDTA盐化合物或加热使结晶溶解。1、工作原理二、流式原理二、流式原理的尿有形成分分析的尿有形成分分析分析原理流程图分析原理流程图二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析2、结构光学检测系统液压系统电阻抗检测系统电子分析系统仪器通过对前向散射光的波形（强度和散射光的脉冲宽度）、前向荧光波形（荧光强度和荧光脉冲宽度）和电阻抗值的大小综合分析，得出细胞的形态、细胞横截面积、染色片段的长度、细胞容积等信息并绘出直方图和散射图。仪器通过分析每个细胞信号波形的特性来对其进行分类。3、有形成分细胞识别分析二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析前向散射光信号主要反应细胞体积的大小前向散射光强度FSC反应细胞的横截面积；前向散射光脉冲宽度FSCW主要反应细胞的长度；FSCW=CL+BW/V CL细胞长度 BW激光束宽度 V流动速度二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析前向荧光信号主要反应细胞染色质块的大小荧光强度FL主要反应细胞染色质的强度；前向荧光脉冲宽度FLW反映细胞染色质的长度。FLWNL+BW/V NL细胞核长度 BW激光束宽度 V流动速度二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析分析过程二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析尿液有形成分的脉冲图形尿液有形成分的脉冲图形尿液有形成分的脉冲图形二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析红细胞分析RBC直径为8微米，无核和线粒体，所以RBC荧光强度（F1）很弱。另外，RBC在尿液标本中大小不均，且部分溶解成小RBC碎片，或者在肾脏疾患时排出的RBC也大小不等，因此，可以看见RBC前向散射光强度（FSC）差异较大。一般来说，F1极低和FSC大小不等均为RBC。4、检测项目二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析红细胞分析根据RBC形态的变化，将均一性的RBC归为非肾性血尿；非均一性的RBC归为肾性血尿；80红细胞前向散射光强度(Fsc)126ch，称为均一性红细胞；80红细胞前向散射光强度(Fsc)84ch，称为非均一性红细胞(变异性红细胞)；介于二者之间即为混合性红细胞4、检测项目二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析*ch ch(channel(channel):为检测到的脉冲信号到的脉冲信号强度及度及宽度度白细胞分析WBC在尿液的分布直径大约为10m，约比RBC大，因此前向散射光强度也比RBC稍大一些，但WBC含有核而RBC无核，因此它有高强度的前向荧光，就能将RBC和WBC区别开来。当WBC存活时,会呈现前向散射光强和前向荧光弱；当WBC损害或死亡时，呈现前向散射光弱和前向荧光强。二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析4、检测项目利用尿液WBC激光散射光强度和荧光强度的技术识别WBC高活性和低活性的不同程度，来进一步对急性感染和慢性感染，以及恢复期做出判断：急性泌尿系感染WBC 60/ul，且白细胞前向散射光强度强和荧光强度弱；慢性泌尿系感染WBC 10/ul，且白细胞前向散射光强度弱和荧光强度强。白细胞分析4、检测项目二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析由泌尿道的上皮细胞脱落而来，种类多，大小不等。上皮细胞胞体大，散射光强，都含有细胞核、线粒体等，荧光也比较强。仪器除给出上皮细胞数量参数外，还标出肾小管上皮细胞(SRC)，并在第二个屏幕上显示出每微升细胞数。二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析上皮细胞（EC）4、检测项目透明管型和有病理管型二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析管型（CAST）4、检测项目透明管型由于不含有内含物有极高的前向散射光脉冲宽度和微弱的荧光脉冲宽度出现在第二个散射图的中下区域；病理性管型，由于它们的体积与透明管型相等，但含有内含物(如线粒体、细胞核等)，有极高的前向散射光脉冲宽度和荧光脉冲宽度，出现在第二个散射图的中上区域。细菌由于体积小并含有DNA和RNA，所以前向散射光强度要比红、白细胞弱，但荧光强度要比红细胞强，又比白细胞弱。因此，细菌分布在第1个散射图红细胞和白细胞之间的下方区域。细菌检查临床意义主要用于泌尿系细菌感染的诊断。二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析细菌（BACT）4、检测项目类酵母细胞和精子细胞由于含有RNA和DNA，荧光强度很高，由于类酵母细胞的前向散射光脉冲宽度小于精子细胞的，因此，根椐前向散射光脉冲宽度，可将类酵母细胞和精子细胞区别开来。但在低浓度时，精子细胞与酵母细胞区分有一定的难度；在高浓度时，部分酵母细胞对红细胞计数有交叉。酵母细胞(YLC)精子细胞(SPERM)4、检测项目二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析结晶出现在散射图红细胞区域，由于结晶的多样性，所以其散射光强度分布很宽，如草酸盐在散射图上分布接近FSC轴，尿酸盐依靠自己的荧光分布区域和红细胞重复在一起，因结晶的中心分布不稳定，所以它和红细胞能够被区分开。结晶(X-TAL)4、检测项目二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析4、检测项目4、检测项目二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析导电率导电率与渗透量有密切的关系，代表溶液中溶质的质点电荷，与质点的种类、大小无关；二、流式原理的尿有形成分分析二、流式原理的尿有形成分分析4、检测项目对糖尿病、尿崩症的鉴别诊断、治疗都具有十分重要的意义；通过对尿导电率的高低监控，可以预防某些结石疾病的发生，有利于结石疾病的治疗。