（江苏专用）高考生物总复习 第45讲 DNA的粗提取与鉴定课件-人教版高三全册生物课件.pptx

第第4545讲讲 DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定考点DNA的粗提取与鉴定的原理及步骤高考再现总总纲纲目目录录(1)提取思路:利用DNA和其他物质在理化性质方面的差异,提取DNA。1.DNADNA粗提取与鉴定的原理粗提取与鉴定的原理考点考点 DNADNA的粗提取与鉴定的原理及步骤的粗提取与鉴定的原理及步骤(2)DNA的性质2.DNADNA粗提取与鉴定的实验过程粗提取与鉴定的实验过程(以鸡血细胞为例以鸡血细胞为例)材料的选取:选用 DNA含量相对较高的生物组织破碎细胞:向鸡血细胞中加入 蒸馏水,用玻璃棒搅拌后,用纱布过滤并收集滤液去除杂质:利用DNA在不同浓度NaCl中 溶解度不同,通过控制NaCl溶液浓度去除杂质DNA的析出:将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的、体积分数为 95%的 酒精溶液DNA的鉴定:在溶有DNA的NaCl溶液中加入 二苯胺试剂,混合均匀后将试管在沸水中加热5min,溶液变成蓝色1.用菜花代替鸡血作为实验材料进行“DNA粗提取与鉴定”的实验,其操作步骤相同。()2.在提取DNA时,如果没有鸡血材料,可用猪血代替。()3.进行DNA粗提取与鉴定实验时,加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨。()4.用不同浓度的NaCl溶液反复溶解和析出DNA可去除杂质。()5.将丝状物溶解在2 mol/L的NaCl溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色。()6.利用鸡血进行“DNA粗提取与鉴定”的实验中,将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色。()下图是“DNA粗提取与鉴定”实验的相关操作步骤,请仔细观察并分析:(1)操作都加入蒸馏水,其目的相同吗?。(2)操作加入酒精的目的是,此时搅拌要注意。(3)加入2 mol/L NaCl溶液的目的是。答案答案(1)不相同,使鸡血细胞吸水涨破释放核物质,是稀释NaCl溶液使其浓度接近0.14 mol/L(2)析出DNA,去除溶于酒精的杂质沿一个方向轻缓地搅拌(3)使DNA再次溶解1.操作过程、方法及注意问题操作过程、方法及注意问题实验过程材料方法及注意问题理由实验材料的选取动物细胞除哺乳动物的成熟红细胞以外的活细胞成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核(或不含DNA)植物细胞选取植物活细胞植物活细胞含有细胞核破碎细胞,获取含有DNA的滤液动物细胞加入一定量的蒸馏水,并用玻璃棒搅拌细胞吸水涨破,用玻璃棒搅拌加速细胞破裂植物细胞加入洗涤剂和食盐,搅拌时速度要缓慢,防止出现大量泡沫食盐能够溶解DNA并使研磨充分,洗涤剂溶解细胞膜实验过程材料方法及注意问题理由去除滤液中的杂质氯化钠、蒸馏水在含有DNA的滤液中加入氯化钠使其浓度为2 mol/L,过滤,取滤液,除去不溶的杂质向中的滤液中加入一定量的蒸馏水,调节浓度为0.14 mol/L,析出DNA,过滤,除去溶液中的杂质再用2 mol/L氯化钠溶液溶解DNADNA在不同浓度氯化钠溶液中溶解度不同,氯化钠浓度为0.14 mol/L 时,溶解度最低嫩肉粉向含有DNA的滤液中直接加入嫩肉粉,并反应1015 min 嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质恒温水浴箱将含有DNA 的滤液放在6075 水中保温1015 min在此温度范围内,蛋白质变性析出,DNA没有变性实验过程材料方法及注意问题理由DNA析出冷却的95%的酒精向除去杂质的滤液中加入等体积的冷却的95%的酒精,静置23 min,并用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起白色丝状物冷却的95%的酒精能够降低温度促进DNA析出,同时也能够溶解杂质。玻璃棒沿一个方向搅拌可防止DNA分子断裂2.2.特别提醒特别提醒(1)加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂。(2)尽量使用塑料器具,因为DNA易被玻璃制品吸附,影响最终提取量。提取用于鉴定时可用玻璃棒卷出。(3)冷却的酒精溶液具有以下优点:抑制核酸水解酶活性,防止DNA降解。降低分子运动易于形成沉淀析出。低温有利于增加DNA分子的柔韧性,减少断裂。(4)玻璃棒在DNA提取中的作用第一次是沿同一个方向快速搅拌,加速鸡血细胞的破裂,利于释放DNA、防止打碎DNA分子。中间步骤是沿同一个方向缓慢搅拌,防止打碎DNA,避免提取的DNA分子过少,影响实验效果。最后一次是沿同一个方向缓慢搅拌并轻轻旋转,防止打碎DNA,利于絮状物缠在玻璃棒上。考向一考向一DNADNA粗提取与鉴定的原理粗提取与鉴定的原理1.(2018江苏南京、盐城一模)下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述,错误的是(B B)A.鸡血细胞是较理想的实验材料B.NaCl溶液浓度越高,DNA的溶解度越大C.在用酒精析出DNA时,最好使用95%的冷酒精D.DNA溶液中加入二苯胺试剂,沸水浴加热,检测结果呈蓝色解析解析 鸡血细胞含有细胞核,细胞核内含有DNA,且鸡血容易获得,因此提取DNA时常选用鸡血作为实验材料,A正确;当NaCl溶液的浓度低于0.14 mol/L时,随着NaCl溶液浓度的升高,DNA的溶解度逐渐降低,当NaCl溶液的浓度高于0.14 mol/L时,随着NaCl溶液浓度的升高,DNA的溶解度逐渐升高,B错误;DNA不溶于酒精溶液,95%的冷酒精凝集效果最佳,C正确;在DNA粗提取和鉴定实验中,DNA溶液中加入二苯胺试剂后需水浴加热呈蓝色,D正确。2.下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是(B B)A.DNA在NaCl溶液中的溶解度,随NaCl溶液浓度的降低而减小B.利用DNA不溶于酒精的性质,可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC.DNA是大分子有机物,不溶于水而溶于某些有机溶剂D.温度在80100 下,蛋白质会变性,而DNA不会解析解析 DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中的溶解度最低,高于或低于这个浓度,溶解度上升,A错误;DNA不溶于酒精,利用此性质可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA,B正确;DNA是大分子有机物,溶于盐溶液不溶于有机溶剂酒精,C错误;DNA在温度为80100 以上时变性,D错误。试剂作用NaCl2 mol/L:溶解DNA0.14 mol/L:析出DNA酒精(95%)除去杂质,提纯DNA二苯胺DNA鉴定剂(沸水浴)柠檬酸钠抗凝剂,防止血液凝固归纳拓展归纳拓展4种试剂五种作用考向二考向二DNA粗提取与鉴定的步骤粗提取与鉴定的步骤3.(2018江苏苏州质量调研)下列有关“花菜细胞中DNA的粗提取”实验的叙述,正确的是(C)A.在研磨过程中加入洗涤剂的作用是为了瓦解细胞壁B.实验过程中两次加入蒸馏水的作用相同C.将滤液放在6075 下保温的作用主要是除去滤液中的杂质D.在滤液中加入冷却的等体积分数酒精的原理是DNA可溶于酒精解析解析在研磨中加入洗涤剂的作用是为了瓦解细胞膜,A错误;实验中两次加入蒸馏水,第一次的目的是使成熟的鸡血细胞吸水涨破释放出DNA,第二次的目的是稀释NaCl溶液,使DNA从NaCl溶液中沉淀析出,可见,实验过程中两次加入蒸馏水的作用不同,B错误;将滤液放在6075下保温,其原理是利用DNA和蛋白质对高温的耐受性不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离,以除去滤液中的杂质,C正确;在滤液中加入冷却的等体积分数酒精的原理是DNA不溶于酒精,但细胞中的某些蛋白质可溶于酒精,利用这一原理,可将DNA与蛋白质进一步地分离,D错误。4.如图是“DNA粗提取与鉴定”实验中的两个操作步骤示意图,相关叙述错误的是(多选)()图1图2A.图1中溶液a是0.14 molL-1的NaCl溶液B.图1所示操作的原理是DNA能溶于酒精,而蛋白质等杂质不溶C.图2所示实验操作中有一处明显错误,可能导致试管2中蓝色变化不明显D.图2试管1的作用是证明2 molL-1NaCl溶液遇二苯胺不会出现蓝色答案答案AB图1中溶液a是2molL-1的NaCl溶液,A错误;图1所示操作的原理是DNA不能溶于酒精,而蛋白质等杂质能溶,B错误;图2所示实验操作中有一处明显错误(试管2中未将DNA溶于2molL-1的NaCl溶液中),可能导致试管2中蓝色变化不明显,C正确;图2试管1的作用是证明2molL-1NaCl溶液遇二苯胺不会出现蓝色,D正确。技能提炼技能提炼DNA粗提取与鉴定实验中的“2、4、4”(1)加蒸馏水2次1加到鸡血细胞液中,使血细胞吸水涨破;2加到含DNA的2 molL-1 NaCl溶液中,使NaCl溶液的物质的量浓度下降到0.14 molL-1,使DNA析出。(2)用NaCl溶液4次1加 2 molL-1 NaCl溶液,溶解提取的细胞核物质;2加0.14 molL-1 NaCl溶液,使DNA析出;3加2 molL-1 NaCl溶液,溶解滤取的DNA黏稠物4用2 molL-1 NaCl溶液,溶解丝状物用于鉴定DNA。第1次过滤第2次过滤第3次过滤第4次过滤过滤前加入蒸馏水NaCl溶液蒸馏水NaCl溶液滤液中含DNA的核物质DNA溶于0.14 molL-1 NaCl溶液的杂质DNA纱布上细胞膜、核膜等不溶于2 molL-1 NaCl溶液的杂质DNA不溶于2 molL-1 NaCl溶液的杂质过滤的目的去除细胞膜、核膜等去除不溶于2 molL-1 NaCl溶液的杂质去除溶于0.14 molL-1 NaCl溶液的杂质去除不溶于2 molL-1 NaCl溶液的杂质(3)4次过滤的比高考再现高考再现1.(2018江苏单科)关于还原糖、蛋白质和DNA的鉴定实验,下列叙述正确的是(D D)A.在甘蔗茎的组织样液中加入双缩脲试剂,温水浴后液体由蓝色变成砖红色B.在大豆种子匀浆液中加入斐林试剂,液体由蓝色变成紫色C.提取DNA时,在切碎的洋葱中加入适量洗涤剂和食盐,充分研磨,过滤并弃去滤液D.将DNA粗提物溶解在2 mol/L NaCl溶液中,加入二苯胺试剂,沸水浴后液体由无色变成蓝色解析解析 检测还原糖,用斐林试剂,需要水浴加热,出现砖红色沉淀,甘蔗茎中主要含蔗糖,蔗糖为非还原糖,一般不用于还原糖的检测,A错误;检测蛋白质,用双缩脲试剂,B错误;提取DNA时,加入适量洗涤剂可以破坏细胞膜,释放DNA,DNA溶解在实验溶液中,经充分研磨,过滤并保留滤液,C错误;检测DNA,用二苯胺试剂,沸水浴后出现蓝色,D正确。2.(2015江苏单科)图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图,下列叙述正确的是(多选)()图1图2A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同B.图1中完成过滤之后保留滤液C.图2中完成过滤之后弃去滤液D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质答案答案BCD图1加入蒸馏水的目的是使鸡血细胞吸水涨破,图2加入蒸馏水的目的是稀释NaCl溶液,A错误;图1中加入蒸馏水后,DNA存在于滤液中,B正确;图2中加入蒸馏水后,NaCl溶液浓度降低,DNA析出,所以弃去滤液,C正确;嫩肉粉主要成分是蛋白酶,鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉可将蛋白质水解成小分子肽或氨基酸,除去蛋白质,D正确。3.(2014江苏单科)下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述,错误的是(C)A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料B.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,可见玻棒上有白色絮状物D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热,冷却后变蓝解析解析 酵母菌和菜花细胞的细胞核都含有DNA,可作为提取DNA的材料,A正确;DNA能溶解在不同浓度的NaCl溶液中,且溶解度随着NaCl浓度的变化而改变,在利用渗透作用原理向生物材料中加入蒸馏水时,一方面促使细胞吸水涨破,另一方面释放出的DNA也就溶解在蒸馏水中,B正确;向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,目的是加快细胞吸水涨破,释放其中的DNA;而DNA则溶解在蒸馏水中,因此玻棒上不可能有白色絮状物,C错误;DNA溶液与二苯胺试剂经沸水浴加热会变蓝,D正确。4.(2013江苏单科)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验,操作错误的是(A)A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热解析解析本题主要考查DNA粗提取和鉴定实验的相关知识。加入洗涤剂后,动作要轻缓、柔和,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤的操作;加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌的目的是保证DNA分子不断裂,保持其完整性;用蛋白酶分解过滤研磨液中的蛋白质,可纯化研磨液中的DNA;加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热才能出现颜色反应。