微生物检验标本的采集.pptx

微生物检验标本的采集微生物检验标本的采集青岛兰信医学检验所刘奉亭青岛兰信医学检验所刘奉亭1.为感染的感染的诊断提供依据断提供依据2.为抗感染治抗感染治疗提供参考提供参考3.临床流行病学床流行病学调查微生物微生物检验的一个重要功能就是的一个重要功能就是进行行细菌菌耐耐药监测，以指，以指导临床合理使用抗生素，床合理使用抗生素，并制定合理的用并制定合理的用药方案。方案。临床微生物检验的主要功能微生物检验的作用微生物检验的作用标本本采集的重要性采集的重要性正确采取正确采取、处理与运送理与运送细菌菌培养培养标本是本是细菌菌检验成功的成功的关关键，是微生物，是微生物检验分析前分析前质量量控制的重要内容。控制的重要内容。若若标本本采取或采取或处理不当理不当，造成，造成污染，染，导致致错误的的检验结果，果，给临床造成床造成误导，会延会延误对患者的正确患者的正确治治疗，造成，造成严重后果。重后果。发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查。发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查。尽量在抗菌药物使用前采集标本。尽量在抗菌药物使用前采集标本。标本采集时应严格执行无菌操作，标本采集时应严格执行无菌操作，避免避免污染污染。标本采集后应标本采集后应尽快尽快送至实验室送至实验室以提高检出率以提高检出率。盛标本容器须经灭菌处理。盛标本容器须经灭菌处理。送检标本应注明来源和检验目的送检标本应注明来源和检验目的，以便选用相，以便选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物。选用何种抗菌药物。标本采集和运送的基本原则标本采集和运送的基本原则常见常见的微生物检查的微生物检查标本标本一、血液一、血液 二二、脑脊液、脑脊液三三、其他无菌体液、其他无菌体液 四四、尿液、尿液五五、痰及下呼吸道标本、痰及下呼吸道标本 六六、分泌物脓汁、分泌物脓汁七七、粪便、粪便 八八、咽拭子、咽拭子九九、生殖道标本、生殖道标本 十十、组织标本、组织标本一、血一、血培养送培养送检指征指征1发热（38）或低温（）或低温（36）2怀疑有菌血症或疑有菌血症或脓毒症如休克、寒毒症如休克、寒颤3白白细胞胞10 109/L4血小板减少血小板减少5皮肤皮肤粘膜粘膜出血出血6昏迷昏迷7多多器官器官衰竭衰竭8严重的局部感染重的局部感染9呼吸呼吸频率加快等率加快等 血血培养采集的培养采集的时机机尽可能尽可能在用抗菌在用抗菌药物物前；前；尽可能尽可能在寒在寒战时或或发热高峰前高峰前1小小时采采集血液，集血液，这个个时候是菌血症候是菌血症细菌入血菌入血的的高峰期。高峰期。血液血液标本采集本采集 多次采集多次采集：成人一套血培养成人一套血培养应包括一个需氧瓶包括一个需氧瓶和一个和一个厌氧瓶，儿童氧瓶，儿童厌氧菌感染比氧菌感染比较少少见，只，只用一个需氧瓶。菌血症患者病原菌用一个需氧瓶。菌血症患者病原菌周期性出周期性出现于血液于血液中，病原菌中，病原菌浓度度处于于相当低的相当低的水平，因水平，因此一次血培养此一次血培养应在在30-60分分钟内于不同部位采内于不同部位采集集23 套血培养（每一套套血培养（每一套标明采血位点），明采血位点），以提高以提高检出率。如果培养出率。如果培养48h以后以后为阴性，若阴性，若临床床怀疑疑为菌血症的菌血症的应在在24h内再内再连续采集三采集三次血培养次血培养标本。本。血量血量：成人成人每瓶量每瓶量8-10ml；儿童；儿童3-5ml；婴儿儿1-2ml。：采集方法采集方法 选择静脉和穿刺点，静脉和穿刺点，75%酒精从中心点向外旋酒精从中心点向外旋转消毒皮肤，再用碘酊按同消毒皮肤，再用碘酊按同样方法消毒，待干方法消毒，待干后用用酒精棉球擦去碘后用用酒精棉球擦去碘迹；迹；去除培养瓶封帽，用去除培养瓶封帽，用75%酒精棉球消毒酒精棉球消毒橡皮橡皮塞塞(不可用碘酒消毒不可用碘酒消毒)，放置，放置60秒待干；秒待干；用无菌棉棒清除橡皮塞子表面剩余的酒精，用无菌棉棒清除橡皮塞子表面剩余的酒精，用用采血采血针采集需要血量注入瓶采集需要血量注入瓶中，中，轻轻颠倒混倒混匀；匀；采集采集后立即后立即送送检，不能立即送，不能立即送检的于室温保的于室温保存，不可冷藏。存，不可冷藏。血液注入血液注入顺序序1.如果用无菌如果用无菌针管抽管抽采血采血量量够20毫升毫升：先打入：先打入厌氧瓶再打入需氧氧瓶再打入需氧瓶（瓶（因因为有的有的厌氧菌在有空气的情况下很容氧菌在有空气的情况下很容易死亡易死亡）采血采血量不量不够20毫升：先毫升：先打入需打入需氧瓶，氧瓶，满足需足需氧瓶氧瓶10毫升的血量，剩下的毫升的血量，剩下的打入打入厌氧瓶。氧瓶。2.如果用真菌采血的如果用真菌采血的软管，管，应先采集需氧瓶。先采集需氧瓶。血培养阳性的血培养阳性的临床意床意义1.培养出革培养出革兰阴性菌、金黄色葡萄球阴性菌、金黄色葡萄球菌、菌、肠球菌等球菌等时，多数可以确，多数可以确认为病病原菌；原菌；2.培养出凝固培养出凝固酶阴性葡萄球菌、草阴性葡萄球菌、草绿色色链球菌、芽胞杆菌等球菌、芽胞杆菌等时，感染？，感染？污染染？二、二、脑脊液脊液培养培养标本的采集本的采集采集采集对象及象及时间：疑疑为细菌性或真菌性骨髓炎的菌性或真菌性骨髓炎的患者；疑患者；疑为伤寒感染的患者；寒感染的患者；最好是在最好是在应用抗生用抗生素之前采集素之前采集脑脊液。脊液。采集采集方法：无菌腰穿采集方法：无菌腰穿采集脑脊液脊液3-5ml，分装到，分装到3个无菌小瓶中（各个无菌小瓶中（各1-2ml）。用于）。用于细菌和病毒菌和病毒检测时脑脊液量不少于脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于脊液量不少于2ml。注意事项：注意事项：如不能及如不能及时送送检不可冷藏，天气寒冷不可冷藏，天气寒冷应注意保温送注意保温送检，以免病原菌死亡影响，以免病原菌死亡影响检出率。出率。13三、其他三、其他无菌体液的无菌体液的采集采集临床常用于床常用于培养的无菌体液培养的无菌体液包括包括胸腔胸腔积液、液、腹水、胆汁、心包腹水、胆汁、心包积液、关液、关节液、鞘膜液液、鞘膜液等等。无菌。无菌体液体液细菌培养的价菌培养的价值远高于有菌高于有菌部位部位标本本。采集采集时间：抗生素使用前抗生素使用前停止用停止用药1-2天后天后下次用下次用药前前血血药浓度度较低低时抽取抽取无菌体液的采集方法无菌体液的采集方法2%碘酊充分消毒皮肤，用注射器以无菌碘酊充分消毒皮肤，用注射器以无菌操作方法抽取或引流体内可疑感染部位的操作方法抽取或引流体内可疑感染部位的体液体液；标本采集量本采集量应1ml。胸腔。胸腔积液、腹水可液、腹水可抽取抽取10 ml,心包液、关心包液、关节液等可抽取液等可抽取25 ml。标本采集后注入无菌小瓶或无菌本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中管中送送检，也，也可将抽取液直接注入血可将抽取液直接注入血培养瓶送培养瓶送检。注意事注意事项：不能立即送不能立即送检时于室温放置，于室温放置，不得冷藏，勿以拭子送不得冷藏，勿以拭子送检。14四、尿四、尿标本的本的采集采集指征采集采集指征(1)有有典型的尿路感染症状典型的尿路感染症状；(2)肉眼肉眼脓尿或血尿尿或血尿；(3)尿常尿常规检查白白细胞胞或或亚硝酸硝酸盐阳性阳性；(4)不明原因的不明原因的发热，无其他局部症状，无其他局部症状；(5)留置留置导尿管的患者出尿管的患者出现发热；(6)膀胱膀胱排空功能受排空功能受损；(7)泌尿系泌尿系统疾病手疾病手术前。前。尿尿标本的本的采集（采集（1）（1）清）清洁中段尿中段尿：嘱咐：嘱咐患者睡前少患者睡前少饮水，水，清晨起床后用肥皂水清晨起床后用肥皂水清洗阴部，清洗阴部，再用清水冲再用清水冲洗尿道口周洗尿道口周围；开始排尿，将前段尿排去，；开始排尿，将前段尿排去，中段尿中段尿约10-20ml直接排入直接排入专用的无菌容器用的无菌容器中中，及，及时送送检和接种。和接种。（2）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是是评估膀胱内估膀胱内细菌感染的菌感染的“金金标准准”方法，但方法，但有一定的痛苦患者有一定的痛苦患者难以接受。主要用于以接受。主要用于厌氧菌培养或留取氧菌培养或留取标本困本困难婴儿的尿儿的尿标本采本采集。尿尿标本的本的采集（采集（2）(3)直接直接导尿：按常尿：按常规方法方法对会阴局部会阴局部进行行消毒，消毒，用用导尿管直接尿管直接经尿道插人膀胱，尿道插人膀胱，获取取膀胱尿液，可减少尿液膀胱尿液，可减少尿液标本的本的污染。染。但有可但有可能将下尿道能将下尿道细菌引入膀胱，菌引入膀胱，导致致继发感染。感染。(4)留置留置导尿管收集尿液：利用留置尿管收集尿液：利用留置导尿管尿管采集采集标本本时，应先消毒先消毒导尿管外部，按无菌尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操尿管吸取尿液，操作作时应防止混入消毒防止混入消毒剂，注意不能从尿液收，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。集袋中采集尿液。长期留置期留置导尿管的患者尿管的患者应在更在更换新管后留取新管后留取尿尿标本。本。注意事项：注意事项：如不能及如不能及时送送检不可冷藏。不可冷藏。五、痰五、痰及下呼吸道及下呼吸道标本本采集采集(1)1 自然咳痰法以晨痰自然咳痰法以晨痰为佳佳，采集，采集标本前本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）清清洁口腔和牙口腔和牙齿，有假牙者，有假牙者应取下假牙。用取下假牙。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，中，标本量本量应1ml。咳痰困。咳痰困难者可用者可用雾化化吸入加温至吸入加温至45C的的10%NaCl水溶液，使痰水溶液，使痰液易于排出。液易于排出。对难于自然咳痰患者可用无菌于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。吸痰管抽取气管深部分泌物。痰及下呼吸道痰及下呼吸道标本本采集采集(2)2 支气管支气管镜采集法、防采集法、防污染毛刷采集法、染毛刷采集法、环甲膜穿刺甲膜穿刺经气管吸引法、气管吸引法、经胸壁胸壁针穿刺吸引穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法，均由法和支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按相床医生按相应操作操作规程采集程采集，采集，采集标本本时尽可能避免咽尽可能避免咽喉部正常菌群的喉部正常菌群的污染。其中气管穿刺法染。其中气管穿刺法仅用用于昏迷患者于昏迷患者。3 小儿取痰法用弯小儿取痰法用弯压舌板向后舌板向后压舌，将拭舌，将拭子伸入咽部，小儿子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰舌刺激咳痰时，可，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。还可可用手指用手指轻叩胸骨柄上方，以叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。咳痰。痰及下呼吸道痰及下呼吸道标本本检查注意注意事事项 对于普通于普通细菌性肺炎，痰菌性肺炎，痰标本送本送检每天每天1次，次，连续2 3天。不建天。不建议24h内多次采集，除内多次采集，除非痰液外非痰液外观性状出性状出现改改变；如如不能及不能及时送送检，应将将标本本暂存于存于4，但，但放置放置时间不可超不可超过24h。运。运输时勿置于冰勿置于冰块中。中。六、分泌物、脓汁六、分泌物、脓汁的采集的采集开放性开放性脓肿：以以无菌生理无菌生理盐水或水或75%酒精拭酒精拭去去溃疡表面渗出物，抽取表面渗出物，抽取脓液至于无菌杯中液至于无菌杯中送送检；或用；或用无菌棉无菌棉签擦取擦取溃疡基底分泌物基底分泌物后后放入无菌放入无菌试管管送送检；封封闭性性脓肿：碘酒碘酒消毒皮肤黏膜表面，穿刺消毒皮肤黏膜表面，穿刺中心部位抽取中心部位抽取3-10ml注入无菌容器或血培注入无菌容器或血培养瓶养瓶送送检。深部深部脓肿在送需氧培养的同在送需氧培养的同时应考考虑送送厌氧培养，氧培养，厌氧培养氧培养标本本应隔隔绝空气空气送送检；脓疱或水疱疱或水疱：以以75%乙醇消毒、干燥，用乙醇消毒、干燥，用针头挑挑破，拭破，拭子采集疱液和基地子采集疱液和基地层细胞胞标本送本送检；瘘管内脓液：瘘管内脓液：先用灭菌棉拭子挤压瘘管弃去先用灭菌棉拭子挤压瘘管弃去前端脓液，再收集脓汁。前端脓液，再收集脓汁。注意事注意事项烧伤创面、面、脓肿标本不本不应采集表面或表皮采集表面或表皮组织；不提倡采集不提倡采集烧伤或或动物咬物咬伤12小小时内的内的伤口，除非存在感染指征；口，除非存在感染指征；当当创伤出血出血时，敷用，敷用药物物2h以内不以内不应采集采集标本，此本，此时获得阳性得阳性结果的机会很少。果的机会很少。七、七、粪便便标本采集的本采集的时间腹泻病人在急性期用腹泻病人在急性期用药前前采集；沙采集；沙门菌感菌感染、染、肠热症症应在在2周内采；周内采；胃胃肠炎在急性期炎在急性期6h内采集新内采集新鲜脓血便。血便。有腹泻的病人，在送培养有腹泻的病人，在送培养标本的同本的同时可以送可以送细菌涂片菌涂片检查。抗生素相关性腹泻，培养是。抗生素相关性腹泻，培养是阴性，但涂片阴性，但涂片检查却可以看到却可以看到细菌比例失菌比例失调，涂片涂片临床意床意义大于培养。大于培养。粪便便标本的采集方法本的采集方法 自然排便法：挑取自然排便法：挑取脓血、粘液便血、粘液便2-3g，液，液体便采集絮状物体便采集絮状物2-3ml，置于无菌杯中送，置于无菌杯中送检；直直肠拭子法：将无菌拭子用生理拭子法：将无菌拭子用生理盐水湿水湿润后插入直后插入直肠4-5cm处（幼儿（幼儿2-3cm）在肛）在肛门括括约肌肌处柔和旋柔和旋转，见到拭子上明到拭子上明显带有有粪便插便插入无菌入无菌试管送管送检。注意事注意事项：除排便困除排便困难外，不推荐使用拭子；外，不推荐使用拭子；标本不能混入尿液，消毒本不能混入尿液，消毒剂或者化学或者化学药物物；腹泻患者建腹泻患者建议多次送多次送检以确定致病菌。以确定致病菌。八、八、咽拭子咽拭子标本的采集本的采集 目的：目的：培养和培养和鉴定引起咽炎的病原菌，不能反定引起咽炎的病原菌，不能反映下呼吸道感染的情况。映下呼吸道感染的情况。方法：方法：标本采集本采集应在用在用药前，最好在清晨，嘱前，最好在清晨，嘱患者用清水漱口，由患者用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使者将舌向外拉，使悬雍垂向外雍垂向外牵引，将咽拭子超引，将咽拭子超过舌根到达咽后壁舌根到达咽后壁或或悬雍垂的后雍垂的后侧，在咽部肉眼，在咽部肉眼见明明显发红或有或有假膜假膜处、两两侧腭弓、咽后壁或两腭弓、咽后壁或两侧扁桃体扁桃体反复反复涂抹涂抹，应避免接触舌部和避免接触舌部和口腔粘膜，口腔粘膜，消毒消毒试管管口，将拭子插入口，将拭子插入试管，塞管，塞紧送送检。九、生殖道九、生殖道标本本采集方法采集方法(1)宫颈分泌物：分泌物：无菌拭子插入无菌拭子插入宫颈口口1-2cm并并旋旋转一周，停留大一周，停留大约10s取出取出，放回无菌，放回无菌试管送管送检；阴道阴道分泌物：分泌物：拭去拭去过多分泌物，以无菌拭子多分泌物，以无菌拭子采集，放入无菌采集，放入无菌试管送管送检；女性女性尿道分泌物：尿道分泌物：先拭去尿道口渗出物，以先拭去尿道口渗出物，以无菌拭无菌拭子插入子插入尿道在耻骨尿道在耻骨联合合处按摩尿道，按摩尿道，放入无菌放入无菌试管送管送检；男性男性尿道分泌物：尿道分泌物：清洗尿道口，以无菌拭子清洗尿道口，以无菌拭子插入尿道插入尿道2-4cm旋旋转后停留后停留20s，取出拭子，取出拭子放入无菌放入无菌试管送管送检；也可用；也可用挤压方法从尿道方法从尿道口口挤出渗出物，以拭子出渗出物，以拭子送送检；前列腺前列腺分泌物：分泌物：以肥皂水和清水清洗以肥皂水和清水清洗尿道口及附近皮肤，直尿道口及附近皮肤，直肠按按压按列腺按列腺获取分泌物以无菌杯采集或用无菌拭子取分泌物以无菌杯采集或用无菌拭子送送检；盆腔感染盆腔感染标本：本：在后穹窿通在后穹窿通过穿刺采集穿刺采集标本。本。注意事注意事项：恶露露标本不作本不作为培养培养标本。本。生殖道生殖道标本本采集方法采集方法(2)十、十、组织标本的采集本的采集采集采集时间：浅表皮肤黏膜：使用抗生素前采集浅表皮肤黏膜：使用抗生素前采集 深部深部组织：手：手术室后内室后内窥镜检查时采集采集采集方法：采集方法：无菌操作留取无菌操作留取标本于无菌杯中送本于无菌杯中送检注意事注意事项：严格格无菌操作，少量无菌操作，少量标本本应滴加无菌滴加无菌生理生理盐水保持水保持湿湿润。小小 结结 微生物标本在标本采集前、中、后必微生物标本在标本采集前、中、后必须保证无菌，否则无法真实客观地反应病人须保证无菌，否则无法真实客观地反应病人情况。情况。只有保证标本采集的质量，才能为提高只有保证标本采集的质量，才能为提高微生物及其药敏检测的准确性，为及时、有微生物及其药敏检测的准确性，为及时、有效地治疗提供实验室依据。效地治疗提供实验室依据。标本采集后的保存和运输同样重要，保标本采集后的保存和运输同样重要，保存不当或运输过程中造成污染，都会导致错存不当或运输过程中造成污染，都会导致错误的检验结果。误的检验结果。微生物培养微生物培养还应注意的注意的问题1.培养阳性的分离菌不一定是真的病培养阳性的分离菌不一定是真的病原菌，特原菌，特别从有菌部位来的，如痰从有菌部位来的，如痰标本；本；2.无菌部位培养出来的病原菌无菌部位培养出来的病原菌应当当连续监测，若病原菌，若病原菌发生改生改变或治或治疗效效果不佳果不佳时应考考虑更更换抗生素；抗生素；3.细菌的耐菌的耐药性在治性在治疗过程中可能会程中可能会发生改生改变，要注意，要注意观察是否有耐察是否有耐药性性的的变迁。迁。