（江苏专用）高考生物二轮复习 第九单元 现代生物科技专题 专题一 基因工程与细胞工程课件-人教版高三全册生物课件.ppt

专题专题一基因工程与一基因工程与细细胞工程胞工程考考纲纲要要求求1.基基因因工工程程的的诞诞生生(A)。2.基基因因工工程程的的原原理理及及技技术术(A)。3.基基因因工工程程的的应应用用(B)。4.蛋蛋白白质质工工程程(A)。5.植植物物的的组组织织培培养养(B)。6.动动物物的的细细胞胞培培养养与与体体细细胞胞克克隆隆(A)。7.细细胞胞融融合合与与单单克克隆隆抗抗体体(A)。DNA连连接接酶酶基因表达基因表达载载体的构建体的构建将目的基因将目的基因导导入受体入受体细细胞胞药药物物基因基因自然界中没有自然界中没有全能性全能性体体细细胞胞杂杂交交细细胞增殖胞增殖动动物物细细胞核胞核化学法化学法抗原抗原考点一基因工程考点一基因工程1(2014江江苏苏卷卷高高考考)下下列列关关于于基基因因工工程程技技术术的的叙叙述述，错错误误的的是是(多选多选)()A切割切割质质粒的限制性核酸内切粒的限制性核酸内切酶酶均特异性地均特异性地识别识别6个核苷酸序列个核苷酸序列BPCR反反应应中中温温度度的的周周期期性性改改变变是是为为了了DNA聚聚合合酶酶催催化化不不同同的的反反应应C载载体体质质粒通常采用抗生素合成基因作粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记为筛选标记基因基因D抗抗虫虫基基因因即即使使成成功功地地插插入入到到植植物物细细胞胞染染色色体体上上也也未未必必能能正正常常表达表达解解析析限限制制酶酶大大多多是是特特异异性性识识别别6个个核核苷苷酸酸序序列列，也也有有的的识识别别4、5或或8个个核核苷苷酸酸组组成成的的序序列列，A错错误误；DNA聚聚合合酶酶只只是是在在延延伸伸阶阶段段发发挥挥催催化化作作用用，B错错误误；质质粒粒上上一一般般带带有有的的抗抗生生素素抗抗性性基基因因可可作作为为标标记记基基因因，供供鉴鉴定定和和选选择择，不不是是抗抗生生素素合合成成基基因因，C错错误误；目目的基因导入受体细胞后不一定都能正常表达，的基因导入受体细胞后不一定都能正常表达，D正确。正确。答案答案ABC2(2015江江苏苏单单科科，32)胰胰岛岛素素A、B链链分分别别表表达达法法是是生生产产胰胰岛岛素素的的方方法法之之一一。图图1是是该该方方法法所所用用的的基基因因表表达达载载体体，图图2表表示示利利用用大大肠肠杆杆菌菌作作为为工工程程菌菌生生产产人人胰胰岛岛素素的的基基本本流流程程(融融合合蛋蛋白白A、B分分别别表表示示半半乳乳糖糖苷苷酶酶与与胰胰岛岛素素A、B链链融融合合的的蛋蛋白白)。请请回回答答下列下列问题问题：图图1图图2(1)图图1基因表达基因表达载载体中没有体中没有标标注出来的基本注出来的基本结结构是构是_。(2)图图1中中启启动动子子是是_酶酶识识别别和和结结合合的的部部位位，有有了了它它才才能能启启动动 目目 的的 基基 因因 的的 表表 达达；氨氨 苄苄 青青 霉霉 素素 抗抗 性性 基基 因因 的的 作作 用用 是是_。(3)构建基因表达构建基因表达载载体体时时必需的工具必需的工具酶酶有有_。(4)半半乳乳糖糖苷苷酶酶与与胰胰岛岛素素A链链或或B链链融融合合表表达达，可可将将胰胰岛岛素素肽肽链链上上 蛋蛋 白白 酶酶 的的 切切 割割 位位 点点 隐隐 藏藏 在在 内内 部部，其其 意意 义义 在在 于于_。(5)溴溴化化氰氰能能切切断断肽肽链链中中甲甲硫硫氨氨酸酸羧羧基基端端的的肽肽键键，用用溴溴化化氰氰处处理理相相应应的的融融合合蛋蛋白白能能获获得得完完整整的的A链链或或B链链，且且半半乳乳糖糖苷苷酶酶被被切切成成多个多个肽肽段，段，这这是因是因为为_。(6)根根据据图图2中中胰胰岛岛素素的的结结构构，请请推推测测每每个个胰胰岛岛素素分分子子中中所所含含游游离离氨基的数量。你的推氨基的数量。你的推测结测结果是果是_，理由是，理由是_。解解析析基基因因表表达达载载体体包包含含启启动动子子、终终止止子子、目目的的基基因因和和标标记记基基因因等等。启启动动子子是是RNA聚聚合合酶酶的的识识别别和和结结合合位位点点。氨氨苄苄青青霉霉素素抗抗性性基基因因可可作作为为标标记记基基因因。基基因因工工程程使使用用的的工工具具酶酶包包括括限限制制酶酶和和DNA连连接接酶酶。胰胰岛岛素素肽肽链链上上蛋蛋白白酶酶的的切切割割位位点点隐隐藏藏起起来来，将将无无法法被被蛋蛋白白酶酶所所识识别别，防防止止被被水水解解。溴溴化化氰氰能能切切断断肽肽链链中中甲甲硫硫氨氨酸酸羧羧基基端端的的肽肽键键，若若经经溴溴化化氰氰处处理理相相应应融融合合蛋蛋白白能能获获得得完完整整的的A链链和和B链链，表表明明胰胰岛岛素素A链链、B链链上上并并无无溴溴化化氰氰作作用用位位点点，不不能能将将其其切切断断；同同理理，半半乳乳糖糖苷苷酶酶能能被被切切成成“多多个个肽肽段段”，表表明明其其具具有有多多个个切切点点(即即“甲甲硫硫氨氨酸酸”)。胰胰岛岛素素分分子子含含有有两两条条链链，至至少少有有2个个游游离离氨氨基基分分别别位位于于2条条肽肽链链的的一一端端，并并且且R基基团团中中可可能能也也含含有有游游离离的的氨氨基。基。答案答案(1)终终止子止子(2)RNA聚聚合合作作为为标标记记基基因因，将将含含有有重重组组质质粒粒的的大大肠肠杆杆菌菌筛筛选选出来出来(3)限制限制酶酶和和DNA连连接接酶酶(4)防止胰防止胰岛岛素的素的A、B链链被菌体内蛋白被菌体内蛋白酶酶降解降解(5)半半乳乳糖糖苷苷酶酶中中含含多多个个甲甲硫硫氨氨酸酸，而而胰胰岛岛素素A、B链链中中不不含含甲甲硫氨酸硫氨酸(6)至至少少2个个两两条条肽肽链链的的一一端端各各有有一一个个游游离离的的氨氨基基，氨氨基基酸酸R基基团团中可能中可能还还含有游离的氨基含有游离的氨基从从近近五五年年高高考考统统计计看看，对对基基因因工工程程考考查查明明显显多多于于其其他他工工程程技技术术，考考查查角角度度侧侧重重于于基基因因工工程程工工具具及及特特点点，基基因因工工程程操操作作程程序序尤尤其其是是基因表达载体的构建与目的基因检测、鉴定。基因表达载体的构建与目的基因检测、鉴定。提分必记的关键点提分必记的关键点1.基因工程常考的基因工程常考的3种基本工具种基本工具(1)限限制制性性内内切切酶酶：识识别别特特定定核核苷苷酸酸序序列列，并并在在特特定定位位点点上上切割切割DNA分子。分子。(2)DNA连连接接酶酶：EcoliDNA连连接接酶酶只只能能连连接接黏黏性性末末端端；T4DNA连连接接酶酶能能连连接黏性末端和平末端。接黏性末端和平末端。(3)运运载载体体：能能在在宿宿主主细细胞胞内内稳稳定定存存在在并并大大量量复复制制；有有一一个个至至多多个个限限制制酶酶切切割割位位点点；具具有有特特殊殊的的标标记记基基因因以便以便对对含目的基因的受体含目的基因的受体细细胞胞筛选筛选。2.基因工程的基因工程的4大操作程序大操作程序(1)目的基因的目的基因的获获取取(三种方法三种方法)：从基因文从基因文库库中中获获取。取。利利用用_技技术术扩扩增增：其其实实质质是是在在体体外外对对目目的的基基因因进进行行大大量复制。量复制。用化学方法人工合成。用化学方法人工合成。(2)基因表达基因表达载载体的构建体的构建(此此为为“核心步核心步骤骤”)：基基因因表表达达载载体体的的组组成成：目目的的基基因因启启动动子子终终止止子子_复制原点。复制原点。PCR标记标记基因基因基因表达基因表达载载体的构建体的构建过过程程(3)将目的基因将目的基因导导入受体入受体细细胞的胞的“3大方法大方法”：导导入植物入植物细细胞胞农农杆菌杆菌转转化法化法(花粉管通道法、基因花粉管通道法、基因枪枪法法)。导导入入动动物物细细胞胞显显微注射法微注射法(导导入受精卵入受精卵)。导导入微生物入微生物细细胞胞使用使用Ca2处处理理细细胞。胞。同一种限制同一种限制酶酶切割切割DNA连连接接酶酶(4)理清目的基因的理清目的基因的检测检测与与鉴鉴定：定：导导入入检测检测：_杂杂交技交技术术(使用使用DNA探探针针)。个个体体生生物物学学水水平平鉴鉴定定：如如对对转转基基因因作作物物进进行行抗抗虫虫或或抗抗病病等等的的接接种种实验实验。DNA分子分子分子分子杂杂交交抗原抗原抗体抗体(1)基基因因表表达达载载体体中中的的胰胰岛岛素素基基因因可可通通过过人人肝肝细细胞胞mRNA反反转转录录获获得得(2015重庆卷，重庆卷，6A)()(2)基基因因表表达达载载体体的的复复制制和和胰胰岛岛素素基基因因的的表表达达均均启启动动于于复复制制原原(起起)点点(2015重庆卷，重庆卷，6B)()(3)借借助助抗抗生生素素抗抗性性基基因因可可将将含含胰胰岛岛素素基基因因的的受受体体细细胞胞筛筛选选出出来来(2015重庆卷，重庆卷，6C)()(4)启启动动子子和和终终止止密密码码子子均均在在胰胰岛岛素素基基因因的的转转录录中中起起作作用用(2015重重庆卷，庆卷，6D)()(5)转转基基因因抗抗虫虫棉棉植植株株抗抗虫虫效效果果的的鉴鉴定定必必须须通通过过分分子子检检测测(2014天天津卷，津卷，4C)()(6)重重组组质质粒粒与与探探针针能能进进行行分分子子杂杂交交是是因因为为DNA分分子子脱脱氧氧核核糖糖和和磷酸交替磷酸交替连连接接(2013安徽，安徽，6C)()(7)应应用用DNA探探针针技技术术，可可以以检检测测转转基基因因抗抗冻冻番番茄茄植植株株中中目目的的基基因的存在及其完全表达因的存在及其完全表达(2011四川，四川，5D)()(8)每每个个重重组组质质粒粒至至少少含含一一个个限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶识识别别位位点点(2011浙浙江，江，6B)()答案答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)提提示示(1)人人肝肝细细胞胞不不能能合合成成胰胰岛岛素素，则则人人肝肝细细胞胞中中不不含含有有胰胰岛岛素素的的mRNA，不不能能通通过过反反转转录录获获得得人人胰胰岛岛素素基基因因；(2)表表达达载载体体的的复复制制启启动动于于复复制制起起点点，胰胰岛岛素素基基因因的的表表达达启启动动于于启启动动子子；(4)启启动动子子在在转转录录过过程程中中起起作作用用，终终止止密密码码子子在在翻翻译译过过程程中中起起作作用用；(5)抗抗虫虫效效果果需需个个体体生生物物学学水水平平的的鉴鉴定定；(6)核核酸酸分分子子之之间间能能进进行行分分子子杂杂交交的的原原理理是是“碱碱基基互互补补配配对对原原则则”；(7)欲欲检检测测目的基因的完全表达，还必须进行抗原目的基因的完全表达，还必须进行抗原抗体杂交实验。抗体杂交实验。命题角度命题角度1基因工程的工具及操作程序基因工程的工具及操作程序1(2013江江苏苏单单科科，22)小小鼠鼠杂杂交交瘤瘤细细胞胞表表达达的的单单克克隆隆抗抗体体用用于于人人体体试试验验时时易易引引起起过过敏敏反反应应，为为了了克克服服这这个个缺缺陷陷，可可选选择择性性扩扩增增抗抗体体的的可可变变区区基基因因(目目的的基基因因)后后再再重重组组表表达达。下下列列相相关关叙叙述述正确的是正确的是(多选多选)()A设计扩设计扩增目的基因的引物增目的基因的引物时时不必考不必考虑虑表达表达载载体的序列体的序列B用用PCR方法方法扩扩增目的基因增目的基因时时不必知道基因的全部序列不必知道基因的全部序列CPCR体系中一定要添加从受体体系中一定要添加从受体细细胞中提取的胞中提取的DNA聚合聚合酶酶D一定要根据目的基因一定要根据目的基因编码产编码产物的特性物的特性选择选择合适的受体合适的受体细细胞胞解解析析本本题题主主要要考考查查PCR技技术术的的有有关关知知识识。利利用用PCR技技术术扩扩增增目目的的基基因因的的前前提提是是要要有有一一段段已已知知目目的的基基因因的的核核苷苷酸酸序序列列，以以便便根根据据这这一一序序列列设设计计引引物物，但但不不需需知知道道目目的的基基因因的的全全部部序序列列，需需要要考考虑虑载载体体的的序序列列；因因PCR反反应应在在高高温温条条件件下下进进行行，故故反反应应体体系系中中需需加加入入耐耐高高温温的的DNA聚聚合合酶酶；因因某某些些目目的的基基因因编编码码的的产产物物需需经经特特殊殊的的加加工工修修饰饰过过程程，故故一一定定要要根根据据目目的的基基因因编编码码产产物物的的特特性性选选择择合合适适的受体细胞。的受体细胞。答案答案BD2.(2016江江苏苏卷卷，33)下下表表是是几几种种限限制制酶酶识识别别序序列列及及其其切切割割位位点点，图图1、图图2中中标标注注了了相相关关限限制制酶酶的的酶酶切切位位点点，其其中中切切割割位位点点相相同同的的酶酶不重复不重复标标注。注。请请回答下列回答下列问题问题：(1)用用图图中中质质粒粒和和目目的的基基因因构构建建重重组组质质粒粒，应应选选用用_两两种种限限制制酶酶切切割割，酶酶切切后后的的载载体体和和目目的的基基因因片片段段，通通过过_酶酶作作用用后后获获得得重重组组质质粒粒。为为了了扩扩增增重重组组质质粒粒，需需将将其其转转入入处处于于_态态的大的大肠肠杆菌。杆菌。(2)为为了了筛筛选选出出转转入入了了重重组组质质粒粒的的大大肠肠杆杆菌菌，应应在在筛筛选选平平板板培培养养基基中中添添加加_，平平板板上上长长出出的的菌菌落落，常常用用PCR鉴鉴定定，所所用用的的引引物物组组成成为图为图2中中_。(3)若若BamH酶酶切切的的DNA末末端端与与Bcl酶酶切切的的DNA末末端端连连接接，连连接接部部位位的的6个个碱碱基基对对序序列列为为_，对对于于该该部部位位，这这两两种种酶酶_(填填“都能都能”、“都不能都不能”或或“只有一种能只有一种能”)切开。切开。(4)若若用用Sau3A切切图图1质质粒粒最最多多可可能能获获得得_种种大大小小不不同同的的DNA片段。片段。与与两两种种酶酶的的酶酶切切位位点点均均不不同同。(4)根根据据BamH、Bcl和和Sau3A的的酶酶切切位位点点，Sau3A在在质质粒粒上上有有三三个个酶酶切切位位点点，完完全全酶酶切切可可得得到到记记为为A、B、C三三种种片片段段，若若部部分分位位点点被被切切开开，可可得得到到AB、AC、BC、ABC四四种种片片段段，所所以以用用Sau3A切切图图1质质粒粒最最多多可可能能获获得得7种大小不同的种大小不同的DNA片段。片段。1.使用限制酶的注意点使用限制酶的注意点(1)一般用同种限制酶切割载体和目的基因。一般用同种限制酶切割载体和目的基因。(2)不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。2.DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶DNA连连接接酶酶连连接接两两个个DNA片片段段，而而DNA聚聚合合酶酶只只能能将将单单个个脱脱氧氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。3.限制酶限制酶DNA酶酶解旋酶解旋酶限限制制酶酶是是切切割割某某种种特特定定的的脱脱氧氧核核苷苷酸酸序序列列，并并使使两两条条链链在在特特定定的的位位置置断断开开；DNA酶酶是是将将DNA水水解解为为组组成成单单位位；解解旋旋酶酶是是将将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。的两条链间的氢键打开形成两条单链。4.启动子、终止子启动子、终止子(1)启动子启动子(DNA片段片段)起始密码子起始密码子(RNA)。(2)终止子终止子(DNA片段片段)终止密码子终止密码子(RNA)。5.根据受体种类确定基因工程的受体细胞根据受体种类确定基因工程的受体细胞(1)植植物物：植植物物体体细细胞胞或或受受精精卵卵导导入入方方法法常常用用农农杆杆菌菌转转化化法法、花粉管通道法、基因枪法花粉管通道法、基因枪法(本法针对单子叶植物本法针对单子叶植物)(2)动物：受精卵或体细胞动物：受精卵或体细胞导入方法为导入方法为“显微注射法显微注射法”(3)微生物：细菌微生物：细菌导入方法为导入方法为“感受态法感受态法”(4)农农杆杆菌菌转转化化法法原原理理：农农杆杆菌菌易易感感染染植植物物细细胞胞，并并将将其其Ti质质粒粒上的上的TDNA转移并整合到受体细胞染色体转移并整合到受体细胞染色体DNA上。上。命题角度命题角度2基因工程的应用及蛋白质工程基因工程的应用及蛋白质工程1(2016江江苏苏卷卷，22)为为在在酵酵母母中中高高效效表表达达丝丝状状真真菌菌编编码码的的植植酸酸酶酶，通通过过基基因因改改造造，将将原原来来的的精精氨氨酸酸密密码码子子CGG改改变变为为酵酵母母偏偏爱爱的密的密码码子子AGA，由此，由此发发生的生的变变化有化有(多选多选)()A植酸植酸酶酶氨基酸序列改氨基酸序列改变变B植酸植酸酶酶mRNA序列改序列改变变C编码编码植酸植酸酶酶的的DNA热稳热稳定性降低定性降低D配配对对的反密的反密码码子子为为UCU解解析析改改变变后后的的密密码码子子仍仍然然对对应应精精氨氨酸酸，氨氨基基酸酸的的种种类类和和序序列列没没有有改改变变，A错错误误；由由于于密密码码子子改改变变，植植酸酸酶酶mRNA序序列列改改变变，B正正确确；由由于于密密码码子子改改变变后后C(G)比比例例下下降降，DNA热热稳稳定定性性降降低低，C正确；反密码子与密码子互补配对，为正确；反密码子与密码子互补配对，为UCU，D正确。正确。BCD2.(2016天天津津卷卷，7)人人血血清清白白蛋蛋白白(HSA)具具有有重重要要的的医医用用价价值值，只只能能从从血血浆浆中中制制备备。下下图图是是以以基基因因工工程程技技术术获获取取重重组组HSA(rHSA)的两条途径。的两条途径。(1)为为获获取取HSA基基因因，首首先先需需采采集集人人的的血血液液，提提取取_合合成成总总cDNA，然然后后以以cDNA为为模模板板，采采用用PCR技技术术扩扩增增HSA基基因因。下下图图中中箭箭头头表表示示一一条条引引物物结结合合模模板板的的位位置置及及扩扩增增方方向向，请请用用箭箭头头在方框内在方框内标标出另一条引物的位置及出另一条引物的位置及扩扩增方向。增方向。(2)启启动动子子通通常常具具有有物物种种及及组组织织特特异异性性，构构建建在在水水稻稻胚胚乳乳细细胞胞内内特特异异表表达达rHSA的的载载体体，需需要要选选择择的的启启动动子子是是_(填填写写字字母母，单选单选)。A.人血人血细细胞启胞启动动子子B.水稻胚乳水稻胚乳细细胞启胞启动动子子C.大大肠肠杆菌启杆菌启动动子子D.农农杆菌启杆菌启动动子子(3)利利用用农农杆杆菌菌转转化化水水稻稻受受体体细细胞胞的的过过程程中中，需需添添加加酚酚类类物物质质，其其目的是目的是_。(4)人人体体合合成成的的初初始始HSA多多肽肽，需需要要经经过过膜膜系系统统加加工工形形成成正正确确的的空空间间结结构构才才能能有有活活性性。与与途途径径相相比比，选选择择途途径径获获取取rHSA的的优优势势是是_。(5)为为证证明明rHSA具具有有医医用用价价值值，须须确确认认rHSA与与_的的生生物物学学功能一致。功能一致。解解析析(1)总总cDNA是是由由细细胞胞内内mRNA经经逆逆转转录录获获得得。DNA两两条条链链是是反反向向平平行行的的，另另一一条条引引物物扩扩增增方方向向应应向向左左。(2)据据题题意意，启启动动子子具具有有物物种种特特异异性性，它它应应与与受受体体细细胞胞启启动动子子一一致致，应应选选B。(3)在在农农杆杆菌菌转转化化时时，加加入入某某物物质质，其其目目的的应应为为“促促进进”或或“有有利利于于”转转化化，推推测测酚酚类类物物质质可可吸吸引引农农杆杆菌菌侵侵染染水水稻稻受受体体细细胞胞。(4)水水稻稻是是真真核核细细胞胞，具具有有对对分分泌泌蛋蛋白白加加工工的的内内质质网网和和高高尔尔基基体体。途途径径受受体体为为大大肠肠杆杆菌菌，没没有有上上述述细细胞胞器器。(5)制制备备的的rHSA应应具具有有与与HSA相相同的生物学功能才具有医用价值。同的生物学功能才具有医用价值。答案答案(1)总总RNA(或或mRNA)(2)B(3)吸吸引引农农杆杆菌菌移移向向水水稻稻受受体体细细胞胞，有有利利于于目目的的基基因因成成功功转转化化(4)水水稻稻是是真真核核生生物物，具具有有膜膜系系统统，能能对对初初始始rHSA多多肽肽进进行行高效加工高效加工(5)HSA1.界定基因治疗与基因诊断界定基因治疗与基因诊断(1)基因治疗基因治疗将将正正常常基基因因导导入入有有基基因因缺缺陷陷的的细细胞胞中中，使使该该基基因因的的表表达达产产物物发发挥挥功功能能，以以达达到到治治疗疗的的目目的的其其原原理理为为“基基因因重重组组”及及“基基因因表表达达”。(2)基因诊断基因诊断制制作作特特定定DNA探探针针与与病病人人样样品品DNA混混合合，分分析析杂杂交交带带情情况况其原理为其原理为“DNA分子杂交分子杂交”2.界定基因工程与蛋白质工程界定基因工程与蛋白质工程蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程基因基因人为改造的基因人为改造的基因天然外源基因天然外源基因实质实质定向改造或生产人类所需定向改造或生产人类所需蛋白质蛋白质定向改造生物的遗传特性，以获得定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品人类所需的生物类型或生物产品(基基因的异体表达因的异体表达)结果结果生产自然界中没有的蛋白生产自然界中没有的蛋白质质生产自然界中已有的蛋白质生产自然界中已有的蛋白质注注：对对现现有有蛋蛋白白质质的的改改造造或或制制造造新新的的蛋蛋白白质质，必必须须通通过过基基因因修修饰或基因合成实现饰或基因合成实现考点二考点二细细胞工程胞工程1(2016江苏卷，江苏卷，9)下列有关下列有关细细胞工程的叙述，正确的是胞工程的叙述，正确的是()APEG是促是促细细胞融合胞融合剂剂，可直接，可直接诱导诱导植物植物细细胞融合胞融合B用原生用原生质质体制体制备备人工种子，要防止人工种子，要防止细细胞破裂胞破裂C骨髓瘤骨髓瘤细细胞胞经经免疫免疫处处理，可直接理，可直接获获得得单单克隆抗体克隆抗体D核移植克隆的核移植克隆的动动物，其物，其线线粒体粒体DNA来自供卵母体来自供卵母体解解析析PEG是是促促细细胞胞融融合合剂剂，但但植植物物细细胞胞不不能能直直接接融融合合，需需先先去去壁壁形形成成原原生生质质体体才才能能融融合合，A错错误误；制制备备人人工工种种子子应应用用完完整整的的植植物物细细胞胞，不不需需制制备备原原生生质质体体，B错错误误；骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞不不能能产产生生抗抗体体，C错错误误；核核移移植植克克隆隆的的动动物物，其其线线粒粒体体只只来来自自卵卵细细胞胞即即线线粒粒体体DNA来自供卵母体，来自供卵母体，D正确。正确。答案答案D2(2012江江苏苏单单科科，22)下下列列事事实实能能体体现现细细胞胞全全能能性性的的是是(多多选选)()A棉花根尖棉花根尖细细胞胞经诱导经诱导形成幼苗形成幼苗B单细单细胞的胞的DNA在体外大量在体外大量扩扩增增C动动物物杂杂交瘤交瘤细细胞胞产产生生单单克隆抗体克隆抗体D小鼠体小鼠体细细胞胞经诱导经诱导培育成小鼠培育成小鼠解解析析本本题题考考查查细细胞胞全全能能性性的的知知识识。棉棉花花根根尖尖细细胞胞经经诱诱导导形形成成幼幼苗苗，小小鼠鼠体体细细胞胞经经诱诱导导培培育育成成小小鼠鼠，这这均均是是细细胞胞发发育育成成完完整整个个体体，体体现现了了细细胞胞的的全全能能性性，故故A、D符符合合题题意意；DNA在在体体外外大大量量扩扩增增属属于于DNA克克隆隆，故故B不不符符合合题题意意；单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备属属于于动动物物细细胞融合的应用，故胞融合的应用，故C不符合题意。不符合题意。答案答案AD3(2014江江苏苏卷卷，29)为为了了获获得得植植物物次次生生代代谢谢产产物物，先先用用植植物物外外植植体体获获得得愈愈伤伤组组织织，然然后后在在液液体体培培养养基基中中悬悬浮浮培培养养。请请回回答答下下列列问题问题：(1)外植体外植体经诱导经诱导后形成愈后形成愈伤组织伤组织的的过过程称程称为为_。(2)在在愈愈伤伤组组织织悬悬浮浮培培养养时时，细细胞胞干干重重、蔗蔗糖糖浓浓度度和和pH的的变变化化如如图图所所示示。细细胞胞干干重重在在12d后后下下降降的的原原因因有有_；培养液中蔗糖的作用是培养液中蔗糖的作用是_、_。(3)多多倍倍体体愈愈伤伤组组织织细细胞胞产产生生的的次次生生代代谢谢产产物物量量常常高高于于二二倍倍体体。二二倍倍体体愈愈伤伤组组织织细细胞胞经经_处处理理，会会产产生生染染色色体体加加倍倍的的细细胞胞。为为检检测测愈愈伤伤组组织织细细胞胞染染色色体体数数目目，压压片片前前常常用用纤纤维维素素酶酶和和_酶酶解解离离愈愈伤伤组组织织。若若愈愈伤伤组组织织细细胞胞(2n)经经诱诱导导处处理理后后，观观察察到到染染色色体体数数为为8n的的细细胞胞，合合理理的的解解释释是是_、_。(4)为为了了更更好好地地获获得得次次生生代代谢谢产产物物，生生产产中中采采用用植植物物细细胞胞的的固固定定化化技技术术，其其原原理理与与酵酵母母细细胞胞固固定定化化类类似似。下下列列说说法法正正确确的的有有_(填序号填序号)。选选取旺盛生取旺盛生长长的愈的愈伤组织细伤组织细胞包埋胞包埋必必须须在光照条件下培养在光照条件下培养培养培养过过程中需通空气程中需通空气固定化后植物固定化后植物细细胞生胞生长长会会变变慢慢解析解析(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为脱分化。外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为脱分化。(2)蔗蔗糖糖在在细细胞胞培培养养的的过过程程中中不不断断被被消消耗耗，细细胞胞干干重重在在12d后后下下降降的的原原因因有有蔗蔗糖糖浓浓度度下下降降，pH降降低低。蔗蔗糖糖的的作作用用是是提提供供能能源源和和调调节节渗渗透透压压。(3)秋秋水水仙仙素素(低低温温)可可诱诱导导染染色色体体数数目目加加倍倍。一一般般采采用用纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶去去除除植植物物细细胞胞壁壁；2n的的细细胞胞经经染染色色体体加加倍倍后后变变成成4n，处处于于有有丝丝分分裂裂后后期期时时，染染色色体体数数目目再再加加倍倍，变变成成8n；或或者者经经加加倍倍到到8n的的细细胞胞处处于于有有丝丝分分裂裂中中期期。(4)植植物物细细胞胞的的固固定定化化过过程程不需要光的参与，一般选旺盛生长的愈伤组织细胞包埋，不需要光的参与，一般选旺盛生长的愈伤组织细胞包埋，正正确确；培培养养过过程程中中需需通通空空气气，使使细细胞胞进进行行有有氧氧呼呼吸吸，正正确确；固固定定化化后后植植物物细细胞胞与与外外界界培培养养液液的的物物质质交交换换会会受受一一定定的的影影响响，生生长会变慢，长会变慢，正确。正确。答案答案(1)脱分化脱分化(2)蔗糖蔗糖浓浓度下降，度下降，pH降低提供能源降低提供能源调节调节渗透渗透压压(3)秋秋水水仙仙素素(低低温温)果果胶胶经经加加倍倍到到4n的的细细胞胞处处于于有有丝丝分分裂裂后后期期经经加倍到加倍到8n的的细细胞胞处处于有于有丝丝分裂中期分裂中期(4)对对细细胞胞工工程程的的考考查查仅仅次次于于基基因因工工程程，考考查查内内容容多多涉涉及及动动物物细细胞胞培培养养与与融融合合技技术术，体体细细胞胞核核移移植植技技术术(常常渗渗透透考考查查胚胚胎胎工工程程技技术术)及及植植物物组组织织培培养养和和体体细细胞胞杂杂交交技技术术，答答题题关关键键语语句句均均源源自自教教材材，故故精准记忆教材相关内容是解题关键。精准记忆教材相关内容是解题关键。1.高考必记关键点高考必记关键点(1)植物植物组织组织培养的培养的2个关个关键键(2)植物激素的使用植物激素的使用_比比例例较较高高，促促进进芽芽分分化化，抑抑制制根根形形成成；_比比例例较较高，促高，促进进根分化，抑制芽形成。根分化，抑制芽形成。(3)光照的使用光照的使用_阶阶段段不不需需要要给给予予光光照照，_阶阶段段需需要要给给予予光光照照，以利于叶以利于叶绿绿素的形成。素的形成。细细胞分裂素胞分裂素固体固体细细胞分裂素胞分裂素生生长长素素脱分化脱分化再分化再分化2.植物体细胞杂交的关键植物体细胞杂交的关键(1)酶酶解法解法用用酶酶和果胶和果胶酶酶去除去除细细胞壁。胞壁。(2)促融促融剂剂_。(3)杂杂种种细细胞的形成胞的形成标标志志_的形成。的形成。(4)培养培养杂杂种植株的技种植株的技术术植物植物组织组织培养。培养。纤维纤维素素聚乙二醇聚乙二醇新新细细胞壁胞壁3.动物细胞培养的特殊条件动物细胞培养的特殊条件(1)营营养条件：养条件：加入加入动动物血清、血物血清、血浆浆等。等。通入氧气以通入氧气以满满足代足代谢谢的需要。的需要。通入二氧化碳以通入二氧化碳以。(2)胰胰蛋蛋白白酶酶的的两两次次使使用用：首首先先用用胰胰蛋蛋白白酶酶处处理理动动物物的的器器官官或或组组织织，以制以制备单细备单细胞胞悬悬液；培养液；培养过过程中程中发发生生时时，同同样样要要用用胰胰蛋白蛋白酶酶使使细细胞分散开。胞分散开。(3)避避免免杂杂菌菌污污染染的的措措施施：培培养养液液及及培培养养用用具具灭灭菌菌处处理理，加加入入一一定定量的量的，定期更，定期更换换培养液。培养液。维维持培养液的持培养液的pH接触抑制接触抑制抗生素抗生素4.动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术减减中中胚胎移植胚胎移植(1)细细胞胞核核移移植植主主要要在在同同种种动动物物、同同种种组组织织的的细细胞胞之之间间进进行行(2015江苏，江苏，3B)()(2)产产生生抗抗人人白白细细胞胞介介素素8抗抗体体的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞的的筛筛选选必必须须通通过过分分子子检测检测(2014天津，天津，4B)()(3)培培育育草草莓莓脱脱毒毒苗苗所所采采用用的的主主要要技技术术是是组组织织培培养养(2012广广东东，2A)()(4)去去除除植植物物细细胞胞的的细细胞胞壁壁和和将将动动物物组组织织分分散散成成单单个个细细胞胞均均需需酶酶处处理理(全国全国，5B)()(5)乳乳腺腺细细胞胞比比乳乳腺腺癌癌细细胞胞更更容容易易进进行行离离体体培培养养(2015江江苏苏，3A)()(6)动动物物杂杂交交瘤瘤细细胞胞产产生生单单克克隆隆抗抗体体体体现现了了细细胞胞的的全全能能性性(2012江苏，江苏，22C)()答案答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)提提示示(1)细细胞胞核核移移植植是是将将体体细细胞胞核核移移入入同同种种生生物物去去核核卵卵母母细细胞胞(M中中期期)中中；(5)分分裂裂能能力力越越强强的的细细胞胞，越越易易进进行行离离体体培培养养；(6)杂交瘤细胞并未发育成杂交瘤细胞并未发育成“完整个体完整个体”，故未体现细胞全能性。，故未体现细胞全能性。1(2013江江苏苏单单科科，11)某某种种极极具具观观赏赏价价值值的的兰兰科科珍珍稀稀花花卉卉很很难难获获得得成成熟熟种种子子。为为尽尽快快推推广广种种植植，可可应应用用多多种种技技术术获获得得大大量量优优质质苗，下列技苗，下列技术术中不能中不能选选用的是用的是()命题角度命题角度1植物细胞工程及其应用植物细胞工程及其应用A利用茎段利用茎段扦扦插插诱导诱导生根技生根技术术快速育苗快速育苗B采用花粉粒采用花粉粒组织组织培养培养获获得得单单倍体苗倍体苗C采集幼芽嫁接到合适的其他种采集幼芽嫁接到合适的其他种类类植物体上植物体上D采用幼叶、茎尖等部位的采用幼叶、茎尖等部位的组织进组织进行行组织组织培养培养解解析析通通过过花花粉粉粒粒组组织织培培养养获获得得的的是是单单倍倍体体，不不能能保保持持原原植植株的优良特性，故株的优良特性，故B错误。错误。B2(2012江江苏苏单单科科，31)某某研研究究组组对对籼籼稻稻开开展展了了组组织织培培养养及及相相关关研究，研究，请请回答下列回答下列问题问题。(1)2，4D常常用用于于籼籼稻稻愈愈伤伤组组织织的的诱诱导导，对对形形态态的的发发生生有有一一定定的的抑抑制制作作用用。为为促促进进愈愈伤伤组组织织再再分分化化，在在配配制制分分化化培培养养基基时时需需_(填填“升高升高”、“保持保持”或或“降低降低”)2，4D的的浓浓度。度。(2)当当籼籼稻稻愈愈伤伤组组织织在在只只含含有有细细胞胞分分裂裂素素的的培培养养基基上上培培养养时时，出出现现具具有有分分生生能能力力的的绿绿色色芽芽点点，但但不不能能继继续续出出芽芽，通通常常在在培培养养基基中中添添加加_，以促，以促进进幼苗形成。幼苗形成。(3)研究中用研究中用显显微微镜镜可以可以观观察到的察到的现现象是象是_(填下列序号填下列序号)。绿绿色色芽芽点点细细胞胞排排列列松松散散刚刚融融合合的的籼籼稻稻和和稗稗草草杂杂交交细细胞胞发发生生质质壁壁分分离离胚胚状状体体细细胞胞中中有有叶叶绿绿体体分分化化的的愈愈伤伤组组织织内内各各细细胞的形胞的形态态大小一致大小一致(4)经经组组织织培培养养筛筛选选获获得得的的籼籼稻稻叶叶绿绿素素突突变变体体，其其叶叶绿绿素素a与与叶叶绿绿素素b的的比比值值显显著著大大于于对对照照，叶叶绿绿素素总总量量不不变变。某某同同学学用用_(填填序序号号：绿绿色色红红色色蓝蓝紫紫色色黄黄色色)光光照照射射突突变变体体和和对对照照叶叶片片，检检测测到到两两者者光光合合放放氧氧速速率率差差异异不不大大。若若取取等等量量色色素素提提取取液液进进行行层层析析，会会发发现现突突变变体体第第_条条色色素素带带(自自上上而而下下)窄窄于于对对照照组组。(5)胚胚乳乳(3n)由由一一个个精精子子与与两两个个极极核核受受精精发发育育而而成成。若若用用籼籼稻稻种种子子的的胚胚乳乳诱诱导导愈愈伤伤组组织织，培培育育三三倍倍体体，需需适适时时剔剔除除胚胚，以以免免胚胚的的存存在在影影响响愈愈伤伤组组织织细细胞胞的的_，还还可可避避免免再再生生苗苗中中混混有有_。解解析析本本题题主主要要考考查查植植物物组组织织培培养养的的相相关关知知识识。(1)因因2，4D能能抑抑制制形形态态的的发发生生，所所以以在在促促进进愈愈伤伤组组织织再再分分化化时时，分分化化培培养养基基中中应应降降低低2，4D的的浓浓度度。(2)添添加加适适量量的的生生长长素素利利于于愈愈伤伤组组织织再再分分化化出出芽芽，促促进进幼幼苗苗的的形形成成。(3)有有分分生生能能力力的的绿绿色色芽芽点点细细胞胞排排列列紧紧密密；刚刚融融合合的的籼籼稻稻和和稗稗草草杂杂交交细细胞胞还还没没有有再再生生细细胞胞壁壁，不不能能发发生生质质壁壁分分离离；愈愈伤伤组组织织由由无无定定形形状状态态的的薄薄壁壁细细胞胞构构成成，其其内内的的细细胞胞形形态态大大小小不不一一致致；因因胚胚状状体体细细胞胞中中有有具具有有分分生生能能力力的的绿绿色色芽芽点点，用用显显微微镜镜可可观观察察到到胚胚状状体体细细胞胞中中有有叶叶绿绿体体。(4)因因籼籼稻稻叶叶绿绿素素突突变变体体中中叶叶绿绿素素a与与叶叶绿绿素素b的的比比值值增增大大而而叶叶绿绿素素总总量量不不变变，所所以以突突变变体体中中叶叶绿绿素素a增增加加，叶叶绿绿素素b减减少少，则则自自上上而而下下第第4条条色色素素带带变变窄窄；因叶绿素因叶绿素a、b主要吸收红光和蓝紫光，对绿光和黄光吸收较主要吸收红光和蓝紫光，对绿光和黄光吸收较少少，所所以以用用绿绿光光和和黄黄光光照照射射突突变变体体和和对对照照叶叶片片，检检测测到到两两者者放放氧氧速速率率差差别别不不大大。(5)胚胚由由二二倍倍体体细细胞胞组组成成，在在培培育育三三倍倍体体时时，需需要要剔剔除除种种子子中中的的胚胚，以以免免胚胚的的存存在在影影响响愈愈伤伤组组织织细细胞胞的的增增殖殖与与分分化化，还可避免出现二倍体幼苗。还可避免出现二倍体幼苗。答案答案(1)降低降低(2)适量的生适量的生长长素素(3)(4)4(5)增殖与分化二倍体幼苗增殖与分化二倍体幼苗植物体细胞杂交的原理、方法及目的植物体细胞杂交的原理、方法及目的(1)原理：细胞膜的流动性及细胞的全能性。原理：细胞膜的流动性及细胞的全能性。(2)促融方法：促融方法：物理法：离心、振动、电激等；物理法：离心、振动、电激等；化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇(PEG)。(3)意意义义：克克服服远远缘缘杂杂交交不不亲亲和和的的障障碍碍