KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究教案.ppt

KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 一一、研研究究不不同同组组织织学学类类型型的的人人肺肺癌癌细细胞胞株株和和正正常常人人肺肺成成纤纤维维细细胞胞株株MRC-5中中KAI1的的mRNA表表达达水平及其差异水平及其差异二二、研研究究不不同同转转移移潜潜能能的的人人大大细细胞胞肺肺癌癌细细胞胞株株中中KAI1的的mRNA表表达达水水平平，探探讨讨KAI1与与nm23-H1在在调控肺癌转移中的相互关系调控肺癌转移中的相互关系三三、研研究究甲甲基基化化抑抑制制剂剂5-杂杂氮氮脱脱氧氧胞胞苷苷(5-Aza-CdR)对对肺肺癌癌细细胞胞株株L9981、GLC-82和和NCI-H460中中KAI1的的mRNA表达水平和体外增殖能力的影响表达水平和体外增殖能力的影响 研究目的研究目的主要材料与方法主要材料与方法实验用细胞株：实验用细胞株：实验用细胞株：实验用细胞株：MRC-5MRC-5：正常人肺成纤维细胞株：正常人肺成纤维细胞株：正常人肺成纤维细胞株：正常人肺成纤维细胞株 L9981L9981：人高转移大细胞肺癌细胞株：人高转移大细胞肺癌细胞株：人高转移大细胞肺癌细胞株：人高转移大细胞肺癌细胞株 L9981-nm23-H1L9981-nm23-H1：稳定转染：稳定转染：稳定转染：稳定转染nm23-H1nm23-H1基因的基因的基因的基因的L9981L9981细胞株细胞株细胞株细胞株 NL9980NL9980：人低转移大细胞肺癌细胞株：人低转移大细胞肺癌细胞株：人低转移大细胞肺癌细胞株：人低转移大细胞肺癌细胞株 肺腺癌细胞株：肺腺癌细胞株：肺腺癌细胞株：肺腺癌细胞株：A549A549、GLC-82GLC-82、A2A2，SPCA-1SPCA-1和和和和LTEP-LTEP-2-2 人大细胞肺癌细胞株：人大细胞肺癌细胞株：人大细胞肺癌细胞株：人大细胞肺癌细胞株：NCI-H460NCI-H460 人小细胞肺癌细胞株：人小细胞肺癌细胞株：人小细胞肺癌细胞株：人小细胞肺癌细胞株：SH-77SH-77和和和和NCI-H446NCI-H446 肺鳞癌细胞株：肺鳞癌细胞株：肺鳞癌细胞株：肺鳞癌细胞株：YTMLC-90YTMLC-90主要实验方法：主要实验方法：实时荧光定量实时荧光定量PCR MTT法绘制细胞生长曲线法绘制细胞生长曲线甲基化抑制剂：甲基化抑制剂：5-5-杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷 (5-Aza-CdR)(5-Aza-CdR)实 验 结 果比较比较MRC-5与不同组织类型肺癌细胞株间与不同组织类型肺癌细胞株间KAI1基因基因mRNA表达水平表达水平1.MRC-5,正常人肺成纤维细胞株；2.L9981,人高转移大细胞肺癌细胞株；3.NL9980,人低转移大细胞肺癌细胞株；4.L9981-nm23-H1-pEGFP，稳定转染nm23-H1的L9981细胞株；5.A549，6.GLC-82，7.A2，8.SPCA-1，肺腺癌细胞株；9.NCI-H460，人大细胞肺癌细胞株；10.SH-77，11.NCI-H446，人小细胞肺癌细胞株；12.LTEP-2，肺腺癌细胞株;13.YTMLC-90，肺鳞癌细胞株；P=0.0000.002不同细胞株间不同细胞株间KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P值表值表CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.MRC-5,正常人肺成纤维细胞株；2.L9981,人高转移大细胞肺癌细胞株；3.NL9980,人低转移大细胞肺癌细胞株；4.L9981-nm23-H1-pEGFP，稳定转染nm23-H1的L9981细胞株；5.A549，6.GLC-82，7.A2，8.SPCA-1，肺腺癌细胞株；9.NCI-H460，人大细胞肺癌细胞株；10.SH-77，11.NCI-H446，人小细胞肺癌细胞株；12.LTEP-2，肺腺癌细胞株;13.YTMLC-90，肺鳞癌细胞株；在在L9981细胞中转染细胞中转染nm23-H1可显著上调可显著上调KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.L9981；2.NL9980；3.L9981-nm23-H1-pEGFP比较比较L9981细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.L9981；2.A549；3.GLC-82；4.A2；5.SPCA-1；6.NCI-H460；7.SH-77；8.NCI-H446；9.LTEP-2；10.YTMLC-90 比较比较NL9980与不同组织学类型的人肺癌细胞株间与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.NL9980；2.L9981-nm23-H1-pEGFP；3.A549；4.GLC-82；5.A2；6.SPCA-1；7.NCI-H460；8.SH-77；9.NCI-H446；10.LTEP-2；11.YTMLC-90 比较比较A549A549细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.A549；2.GLC-82；3.A2；4.SPCA-1；5.NCI-H460；6.SH-77；7.NCI-H446；8.LTEP-2；9.YTMLC-90 比较比较GLC-82GLC-82细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.GLC-82；2.A2；3.SPCA-1；4.NCI-H460；5.SH-77；6.NCI-H446；7.LTEP-2；8.YTMLC-90 比较比较A2A2细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.A2；2.SPCA-1；3.NCI-H460；4.SH-77；5.NCI-H446；6.LTEP-2；7.YTMLC-90比较比较SPCA-1SPCA-1细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.SPCA-1；2.NCI-H460；3.SH-77；4.NCI-H446；5.LTEP-2；6.YTMLC-90比较比较NCI-H460NCI-H460细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的表达水平的表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.NCI-H460；2.SH-77；3.NCI-H446；4.LTEP-2；5.YTMLC-90比较比较SH-77SH-77细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的的mRNAmRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.SH-77；2.NCI-H446；3.LTEP-2；4.YTMLC-90比较比较NCI-H446、LTEP-2和和YTMLC-90细胞株间细胞株间KAI1的的mRNA表达水平表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP-2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP-20.0121.NCI-H446；2.LTEP-2；3.YTMLC-905-Aza-CdR上调了上调了NCI-H460 和和L9981细胞中细胞中KAI1的的mRNA表达水平表达水平1.Control；2.2mol/L 5-Aza-CdR；3.10mol/L 5-Aza-CdRGroupsNCI-H4605-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)NCI-H4600.0010.0005-Aza-CdR(2mol/L)0.005NCI-H460NCI-H460和和L9981L9981细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与实验组间KAI1KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P P值表值表1.Control；2.2mol/L 5-Aza-CdR；3.10mol/L 5-Aza-CdRGroupsL99815-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)L99810.0000.0005-Aza-CdR(2mol/L)0.016NCI-H460 cellsL9981 cells5-Aza-CdR对对GLC-82细胞中细胞中KAI1的的mRNA表达水平无显著影响表达水平无显著影响1.对照组；2.2mol/L 5-Aza-CdR；3.10mol/L 5-Aza-CdRGroupsGLC-825-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)GLC-820.7241.0005-Aza-dR(2mol/L)0.724GLC-82细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与实验组间KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P值表值表5-Aza-CdR能够抑制人肺癌细胞株能够抑制人肺癌细胞株NCI-H460、L9981的增殖的增殖5-Aza-CdR对人肺对人肺癌细胞株癌细胞株GLC-82的的增殖无显著影响增殖无显著影响结结 论论1、不同组织学类型人肺癌细胞株中、不同组织学类型人肺癌细胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平均显表达水平均显著低于正常人肺成纤维细胞株著低于正常人肺成纤维细胞株MRC-5；2、不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株中、不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平表达水平有明显差异，有明显差异，nm23-H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株中胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平；表达水平；3、5-Aza-CdR能显著上调人肺癌细胞株能显著上调人肺癌细胞株L9981和和NCI-H460中中 KAI1基因基因mRNA表达水平，并能够抑制其体外增殖能力。表达水平，并能够抑制其体外增殖能力。