临床检验方法评价.pptx

会计学1临床检验方法评价临床检验方法评价 新方法进入常规应用过程的流程图 第1页/共134页临床实验室检测系统临床实验室检测系统 临床检验检测系统包括产生结果所需要的临床检验检测系统包括产生结果所需要的试剂、校准物、仪器、试剂、校准物、仪器、试剂、校准物、仪器、试剂、校准物、仪器、消耗品及具体操作程序消耗品及具体操作程序消耗品及具体操作程序消耗品及具体操作程序。试剂是化学溶液，以可预测方式给出分析项目的反应；可预试剂是化学溶液，以可预测方式给出分析项目的反应；可预测的反应允许我们测量每一样本中存在的分析物的量。测的反应允许我们测量每一样本中存在的分析物的量。校准物是含有已知量分析物的物质。校准物是含有已知量分析物的物质。仪器将样本与试剂混合，并将参考已知的校准物的值，来比仪器将样本与试剂混合，并将参考已知的校准物的值，来比较患者、室间质量评价或质控样本的反应，或分析物可预测的较患者、室间质量评价或质控样本的反应，或分析物可预测的化学反应产生每一样本的结果。化学反应产生每一样本的结果。消耗品包括装样本、分配样本和试剂和测量化学反应所需要消耗品包括装样本、分配样本和试剂和测量化学反应所需要的物品。的物品。过程包括准备检验样本、准备试剂和校准物、建立和维护仪过程包括准备检验样本、准备试剂和校准物、建立和维护仪器、将样本与试剂结合、计算分析物的量、及报告结果的所必器、将样本与试剂结合、计算分析物的量、及报告结果的所必须的所有步骤须的所有步骤。第2页/共134页临床实验室试剂的选择临床实验室试剂的选择n nSFDASFDA批准批准;n n分析系统（试剂分析系统（试剂+校准品校准品+仪器）及检测结果的计量学可溯源性；仪器）及检测结果的计量学可溯源性；n n试剂的稳定性：（试剂的稳定性：（有效期、待机稳定期）有效期、待机稳定期）有效期、待机稳定期）有效期、待机稳定期）及校准周期；及校准周期；n n方法学性能方法学性能方法学性能方法学性能：精密度、线性、可比性：精密度、线性、可比性第3页/共134页分析方法分级分析方法分级n n决定性方法决定性方法（definitive method）：经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法。n n参考方法参考方法（reference method）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法。n n常规方法常规方法（routing method）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。第4页/共134页临床检验方法学分类临床检验方法学分类分析物分析物决定性方法决定性方法参考方法参考方法CaID-MS原子吸收分光光度法Cl电量滴定中子活化法电流滴定法KID-MS中子活化法火焰光度法Na重量分析法中子活化法 火焰光度法第5页/共134页临床检验方法学分类临床检验方法学分类分析物分析物决定性方法决定性方法参考方法参考方法UreaID-MS尿素酶法尿素酶法GLUID-MS己糖激酶法己糖激酶法TBIL-重氮法重氮法ALBALB-免疫化学法免疫化学法TP-双缩脲法双缩脲法第6页/共134页临床检验方法分类临床检验方法分类项目名称项目名称决定性方法决定性方法参考方法参考方法常规方法常规方法HbA1c-IFCCNGSP色谱免疫血细胞计数-ICSH血细胞分析仪第7页/共134页常规方法常规方法常规方法常规方法参考方法参考方法参考方法参考方法决定性决定性决定性决定性方法方法方法方法准确度准确度准确度准确度应用范围应用范围应用范围应用范围不同方法间的关系不同方法间的关系第8页/共134页标准品分级标准品分级n n标准品标准品标准品标准品（reference materialreference material）：充分均匀并具有一个或多个良好确定）：充分均匀并具有一个或多个良好确定的特性值的材料或物质，用来校准仪器设备、评估测定方法或给的特性值的材料或物质，用来校准仪器设备、评估测定方法或给其它物质赋值。其它物质赋值。n n一级标准品一级标准品一级标准品一级标准品（原级参考物）：具有最高计量学特性，由一级参考测量程（原级参考物）：具有最高计量学特性，由一级参考测量程序定值序定值 ；n n二级标准品二级标准品二级标准品二级标准品：用一级标准品校准，二级参考方法定值。：用一级标准品校准，二级参考方法定值。n n校准品校准品校准品校准品（calibratorcalibrator）：用二级标准品校准，拟被用于校准的常规方法定值。）：用二级标准品校准，拟被用于校准的常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准用于对常规方法和仪器的校准第9页/共134页一级标准物质一级标准物质n n人血清无机成分分析标准物质GBW09135n n血清胆固醇标准物质GBW09138第10页/共134页二级标准物质二级标准物质n n红细胞微粒标准物质GBW（E）090001n n胆红素标准物质GBW（E）090002n n氰化高铁血红蛋白溶液标准物质GBW（E）090004n n纯化血红蛋白标准物质GBW（E）090011第11页/共134页第12页/共134页溯源链中的不确定度溯源链中的不确定度真值真值一级参考方法一级参考方法二级参考方法二级参考方法厂家标准方法厂家标准方法厂家常规方法厂家常规方法实验室常规方法实验室常规方法不不确确定定度度第13页/共134页方法选择的要求方法选择的要求n n（一）实用性要求（一）实用性要求（一）实用性要求（一）实用性要求 在决定是否将新的方法或仪器在某一实验室执行前，在决定是否将新的方法或仪器在某一实验室执行前，一些实际的因素必须首先考虑。它们包括一些实际的因素必须首先考虑。它们包括标本类型、标本类型、标本类型、标本类型、样本量、分析能力、周转时间、试验菜单、标本处理、样本量、分析能力、周转时间、试验菜单、标本处理、样本量、分析能力、周转时间、试验菜单、标本处理、样本量、分析能力、周转时间、试验菜单、标本处理、分析批的大小、人员技能要求、每一试验的成本、校分析批的大小、人员技能要求、每一试验的成本、校分析批的大小、人员技能要求、每一试验的成本、校分析批的大小、人员技能要求、每一试验的成本、校准方法、校准频率、随机处理能力，质控方法、空间准方法、校准频率、随机处理能力，质控方法、空间准方法、校准频率、随机处理能力，质控方法、空间准方法、校准频率、随机处理能力，质控方法、空间需求（包括试剂贮存）、废物处理要求、以及化学危需求（包括试剂贮存）、废物处理要求、以及化学危需求（包括试剂贮存）、废物处理要求、以及化学危需求（包括试剂贮存）、废物处理要求、以及化学危险物和安全险物和安全险物和安全险物和安全的考虑。的考虑。n n（二）性能参数（二）性能参数（二）性能参数（二）性能参数 与方法或仪器性能有关的特征包括其与方法或仪器性能有关的特征包括其准确度、分析范准确度、分析范准确度、分析范准确度、分析范围、分析回收、分析灵敏度、分析特异度、空白读数、围、分析回收、分析灵敏度、分析特异度、空白读数、围、分析回收、分析灵敏度、分析特异度、空白读数、围、分析回收、分析灵敏度、分析特异度、空白读数、检出限、干扰、精密度、试剂稳定性、检出限、干扰、精密度、试剂稳定性、检出限、干扰、精密度、试剂稳定性、检出限、干扰、精密度、试剂稳定性、“稳健性稳健性稳健性稳健性”，及样本的交互作用及样本的交互作用及样本的交互作用及样本的交互作用等。等。第14页/共134页分析方法相关的基本概念分析方法相关的基本概念分析方法相关的基本概念分析方法相关的基本概念n n校准（校准（校准（校准（calibrationcalibration）是指在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指是指在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值，或实物量具或标准物质所代表的量值，与示的量值，或实物量具或标准物质所代表的量值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。（JIF1001-1998JIF1001-1998）第15页/共134页分析方法相关的基本概念分析方法相关的基本概念分析方法相关的基本概念分析方法相关的基本概念第16页/共134页方法的评价的主要内容方法的评价的主要内容n n定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价 （CLSI EP10CLSI EP10）n n临床化学设备操作精密度评价临床化学设备操作精密度评价临床化学设备操作精密度评价临床化学设备操作精密度评价（CLSICLSI EP5 EP5）n n用患者标本进行方法学比较和偏倚评估用患者标本进行方法学比较和偏倚评估用患者标本进行方法学比较和偏倚评估用患者标本进行方法学比较和偏倚评估（CLSICLSI EP9 EP9）n n定量分析方法的定量分析方法的定量分析方法的定量分析方法的线性（线性（线性（线性（CLSICLSI EP6 EP6）n n临床化学干扰试验临床化学干扰试验临床化学干扰试验临床化学干扰试验（CLSI EP7CLSI EP7）n n定性测试性能评估定性测试性能评估定性测试性能评估定性测试性能评估(CLSI EP12)(CLSI EP12)n n基质效应的评价基质效应的评价 （CLSI EP14CLSI EP14）n n精密度和准确度性能的用户证实精密度和准确度性能的用户证实 (EP15-A)(EP15-A)n n临床实验方法总分析误差的估计（临床实验方法总分析误差的估计（EP21-A)EP21-A)n n 使用使用使用使用 ROCROC曲线实验室试验临床准确度评价曲线实验室试验临床准确度评价曲线实验室试验临床准确度评价曲线实验室试验临床准确度评价（CLSICLSI GP10 GP10）n n临床实验室如何定义和确定参照区间临床实验室如何定义和确定参照区间临床实验室如何定义和确定参照区间临床实验室如何定义和确定参照区间 (C28-A2)(C28-A2)NCCLS NCCLS National Committee for Clinical Laboratory StandardsNational Committee for Clinical Laboratory StandardsCLSI CLSI Clinical and Laboratory Standards InstituteClinical and Laboratory Standards Institute 第17页/共134页第18页/共134页第19页/共134页临床化学设备的精密度评价临床化学设备的精密度评价Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices,Approved Guideline,1984EP5第20页/共134页精密度的内容精密度的内容n n批内不精密度批内不精密度n n批间不精密度n n日内不精密度n n日间不精密度n n总不精密度总不精密度第21页/共134页实验方法实验方法n n试剂和校准物：同一批号n n样本：基质与临床样本相似，2个以上浓度（参考医学决定水平）。n n实验天数：20天以上n n实验次数：每天2批，每批2个样本，每个样本重复2次第22页/共134页精密度实验精密度实验天数1批2批XX11X12X1X11-X12X21X22X2X21-X2212345第23页/共134页批内不精密度批内不精密度I=总实验天数（一般为20天）j=每天测定的批次（一般为2批）Xij1=第i天j批实验第一次结果Xij2=第i天j批实验第二次（重复）结果第24页/共134页批间不精密度批间不精密度I=I=实验天数（通常为实验天数（通常为2020天）天）X Xi1 i1=第第i i天第一批实验结果的平均值（通天第一批实验结果的平均值（通常重复常重复2 2次）次）X Xi2 i2=第第i i天第二批实验结果的平均值（通天第二批实验结果的平均值（通常重复常重复2 2次）次）第25页/共134页日间不精密度日间不精密度n nI=I=实验天数实验天数n nX=X=所有结果的平均值所有结果的平均值n nXiXi第第I I天所有结果的平均值天所有结果的平均值第26页/共134页总不精密度总不精密度第27页/共134页精密度性能的用户核实精密度性能的用户核实n n实验至少要做实验至少要做5 5天，每批每个水平天，每批每个水平(要求要求2 2个浓度水平个浓度水平)作作4 4次重复检测。利用方次重复检测。利用方差分析进行数据统计。差分析进行数据统计。n n计算批内不精密度计算批内不精密度(CV(CV或或SD),SD),并将与厂家批内不精密度比较。并将与厂家批内不精密度比较。n n计算总不精密度计算总不精密度(CV(CV或或SD)SD)，并将与厂家总不精密度比较。，并将与厂家总不精密度比较。或者将总不精密度与不精密度分析目标进行比较。或者将总不精密度与不精密度分析目标进行比较。第28页/共134页第29页/共134页第30页/共134页NCCLS文件文件EP9-A用患者样本进行方法对比用患者样本进行方法对比及偏倚评估及偏倚评估批准指南批准指南1995 年年12月月第31页/共134页目的及用途目的及用途n n引进新方法前或用一种方法替代另一种方引进新方法前或用一种方法替代另一种方法时进行偏倚分析；法时进行偏倚分析；n n评价同一分析项目的两种分析方法间的偏评价同一分析项目的两种分析方法间的偏倚。倚。第32页/共134页评价操作要求评价操作要求n n熟悉仪器操作熟悉仪器操作n n熟悉评价方案熟悉评价方案n n质量控制质量控制n n足够的数据足够的数据第33页/共134页实验样本要求实验样本要求n n来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免储存；储存；n n测定物浓度范围应在医学决定水平范围内测定物浓度范围应在医学决定水平范围内均匀分布；均匀分布；n n样本数至少样本数至少40例，增加数量能提高可信性例，增加数量能提高可信性第34页/共134页对比方法对比方法n n厂家要求的实验室常规方法或公认的参考厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。方法。n n 具有好的精密度具有好的精密度具有好的精密度具有好的精密度n n 没有已知的干扰物没有已知的干扰物没有已知的干扰物没有已知的干扰物n n 相同单位相同单位相同单位相同单位n n 相对国家标准或参考方法的偏倚是已知的相对国家标准或参考方法的偏倚是已知的相对国家标准或参考方法的偏倚是已知的相对国家标准或参考方法的偏倚是已知的第35页/共134页测定方法测定方法n n每天分别用两种方法进行测定，每天分别用两种方法进行测定，n n测定顺序：测定顺序：测定顺序：测定顺序：n n1 1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、7 7、8 8n n8 8、7 7、6 6、5 5、4 4、3 3、2 2、1 1n n测定次数：至少测定测定次数：至少测定测定次数：至少测定测定次数：至少测定5 5天，共天，共天，共天，共4040个样本个样本个样本个样本第36页/共134页数据监督数据监督n n常规质控：常规质控：n n系统误差系统误差系统误差系统误差n n人为误差人为误差人为误差人为误差第37页/共134页实验步骤实验步骤n n熟悉仪器及方法熟悉仪器及方法n n收集数据收集数据n n检查方法内的离群点检查方法内的离群点n n界限：界限：界限：界限：（双份测定）相对差值均值的（双份测定）相对差值均值的（双份测定）相对差值均值的（双份测定）相对差值均值的4 4倍倍倍倍第38页/共134页绘图绘图n n散点图：散点图：n n均值散点图（均值散点图（均值散点图（均值散点图（X X，Y Y）n n所有值散点图（所有值散点图（所有值散点图（所有值散点图（YijYij，XiXi）n n偏倚图：偏倚图：n n散点图（散点图（散点图（散点图（Yij-XijYij-Xij），），），），XiXi）第39页/共134页第40页/共134页第41页/共134页均值散点图（均值散点图（均值散点图（均值散点图（X X，Y Y）第42页/共134页偏差图：偏差图：每次测定的每次测定的Y均值与均值与X均值均值 之差之差-相应相应X均值图均值图第43页/共134页两种方法间离群值目测检查两种方法间离群值目测检查n n界限：界限：4倍两种方法间绝对偏倚的均值倍两种方法间绝对偏倚的均值n n绝对差值允许范围绝对差值允许范围绝对差值允许范围绝对差值允许范围:n n相对差值允许范围相对差值允许范围相对差值允许范围相对差值允许范围:第44页/共134页适合范围：适合范围：适合范围：适合范围：计算计算计算计算 r r，r r22=0.95 =0.95 范围适合范围适合范围适合范围适合 r r22 0.95 0.95 扩大数据范围扩大数据范围扩大数据范围扩大数据范围线性回归：线性回归：线性回归：线性回归：计算计算计算计算 均匀离散度的直观检查均匀离散度的直观检查均匀离散度的直观检查均匀离散度的直观检查第45页/共134页第46页/共134页第47页/共134页预期偏倚及可信范围预期偏倚及可信范围预期偏倚及可信范围预期偏倚及可信范围 线性回归方程线性回归方程线性回归方程线性回归方程 计算偏倚（计算偏倚（计算偏倚（计算偏倚（高、中、低3组）解释实验结果并与内部标准比较解释实验结果并与内部标准比较解释实验结果并与内部标准比较解释实验结果并与内部标准比较第48页/共134页第49页/共134页第50页/共134页准确度的用户核实准确度的用户核实n n选择20份患者的新鲜标本，它们内含的分析物浓度分布于实验方法的可报告范围。不使用分析物浓度超出可报告范围的样品。n n两个方法对标本检测应在同1天的4小时内完成。如果实验安排35天，每天进行57份标本检测，这样得到的结论是最可靠的。第51页/共134页第52页/共134页第53页/共134页评价方法可接受性评价方法可接受性 n n1 1通过试验确定的误差估计与分析目标建立的规范确定的界限进通过试验确定的误差估计与分析目标建立的规范确定的界限进行比较。行比较。n n2 2当获得的总误差值小于方法允许的总误差时，可认为侯选方法当获得的总误差值小于方法允许的总误差时，可认为侯选方法的性能是可接受的。的性能是可接受的。n n3 3当一种或多种分析参数发现大于方法的允许误差，可认为侯选当一种或多种分析参数发现大于方法的允许误差，可认为侯选方法的性能是不可接受的。当这种情况出现时，必须改进方法的方法的性能是不可接受的。当这种情况出现时，必须改进方法的性能；如果不能改进，则需要舍弃该方法。性能；如果不能改进，则需要舍弃该方法。第54页/共134页第55页/共134页允许不精密度制定允许不精密度制定允许不精密度制定允许不精密度制定n n根据本国各实验室室内变异系数水平确定。n n根据室间质量评价允许总误差（TEa)确定允许的CV%:1/4TEa,1/5TEa,1/6TEa n n根据生物学变异确定允许的CV%:第56页/共134页第57页/共134页第58页/共134页第59页/共134页第60页/共134页第61页/共134页第62页/共134页临床检验方法评价决定图的制作及应用临床检验方法评价决定图的制作及应用n n 第63页/共134页定量测量程序的线性评定量测量程序的线性评价价Evaluation of the Linearity of Quantitative Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Statistical Measurement Procedures:A Statistical ApproachApproach EP6-AEP6-A第64页/共134页目的目的n n为实验室中采用定量分析方法的用户提供为实验室中采用定量分析方法的用户提供评价仪器或方法是否满足厂家线性指标的评价仪器或方法是否满足厂家线性指标的评价方法。评价方法。n n用户可为分析方法设定线性范围。用户可为分析方法设定线性范围。第65页/共134页定义定义n n实验范围实验范围（Assay Range）：）：或者或者n n线性范围线性范围（Linear Range)：n n分析系统最终输出的、分析系统最终输出的、分析系统最终输出的、分析系统最终输出的、n n与被测物浓度或活性成比例的、与被测物浓度或活性成比例的、与被测物浓度或活性成比例的、与被测物浓度或活性成比例的、n n浓度或活性值范围浓度或活性值范围浓度或活性值范围浓度或活性值范围第66页/共134页定义定义n n线性线性（Linearity）:n n曲线接近直线的程度的量；曲线接近直线的程度的量；n n与完整系统的反应相关（是最后的分析结与完整系统的反应相关（是最后的分析结果或解释，不仅是仪器的输出结果）果或解释，不仅是仪器的输出结果）第67页/共134页Scope and Limitationsn n线性是分析方法的一个特征，不同于准确线性是分析方法的一个特征，不同于准确性和精密度。性和精密度。n n线性实验应该使用与待分析物基质相似的线性实验应该使用与待分析物基质相似的样本。样本。n n线性检验线性检验“系统系统”反应，包括校准、线性反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。化技术、系数和仪器反应。第68页/共134页检测系统检测系统n nTesting Systemn n全部检测过程，包括仪器，样品，人员，全部检测过程，包括仪器，样品，人员，试剂，试剂，消耗品和程序；消耗品和程序；n n注：还有以下属性（方法特征）：样本类注：还有以下属性（方法特征）：样本类型，检测温度，湿度，等型，检测温度，湿度，等第69页/共134页使用者的需求使用者的需求n n用简单的实验来检验厂家标示的线性范围用简单的实验来检验厂家标示的线性范围及定量分析方法的分析范围；及定量分析方法的分析范围；n n在实验室中作为方法学的信息（方法线性）；在实验室中作为方法学的信息（方法线性）；n n进行线性评价实验。进行线性评价实验。第70页/共134页仪器的熟悉过程仪器的熟悉过程n n执行分析过程的实验室人员必须掌握仪器执行分析过程的实验室人员必须掌握仪器操作和维护程序、样本准备方法和校准。操作和维护程序、样本准备方法和校准。n n对较简单的设备需要对较简单的设备需要5天或更少时间。天或更少时间。n n对较复杂的多通道设备需要对较复杂的多通道设备需要5天或更长时间。天或更长时间。第71页/共134页实验周期实验周期n n在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。据。n n全部实验和数据采集应在同一工作日内完全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。成。第72页/共134页线性评价实验样本要求线性评价实验样本要求n n样本数量样本数量：n n验证线性：验证线性：5-75-7个浓度水平，重复个浓度水平，重复2 2次测定。次测定。n n建立线性：建立线性：7-117-11个浓度水平，测定个浓度水平，测定2-42-4次次n n基质：基质：n n应使用与病人样本相似的样本或注明基质类型。应使用与病人样本相似的样本或注明基质类型。第73页/共134页可以使用的样本可以使用的样本n n病人混合血清（理想的样本基质）n n建立线性范围：n n高值样本：高于上限高值样本：高于上限20-30%20-30%n n低值样本：线性低限或更低。低值样本：线性低限或更低。第74页/共134页可以使用的样本可以使用的样本n n含添加物的混合病人血清：n n加入品在没有干扰物存在时不需高纯度。加入品在没有干扰物存在时不需高纯度。n n经处理的材料稀释的混合血清n n用于降低分析物浓度，用于降低分析物浓度，n n材料处理：透析、热处理、层析。材料处理：透析、热处理、层析。第75页/共134页可以使用的样本可以使用的样本n n生理盐水稀释的混合血清：n n在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质效应效应。n n商品质控或校准品：n n此类样本由于不是正常的生理形式此类样本由于不是正常的生理形式，可掩盖实，可掩盖实际的线性结果。际的线性结果。第76页/共134页可以使用的样本可以使用的样本n n不同比例稀释商品质控物；n n水溶液：一般无基质效应n n其它溶液：基质效应与有机溶剂相似第77页/共134页推荐的样本添加材料推荐的样本添加材料n nALB：白蛋白干粉、human fraction V.n n乙醇：无水乙醇n nAMS：腮腺或胰腺提取物n nBIL：胆红素纯品n nCa:CaCO3n nCl:NaCl第78页/共134页推荐的样本添加材料推荐的样本添加材料n nCHOL：胆固醇纯品或稀释质控品n nCO2：CaCO3n nCREA：标准液或高值血清n n-ALT：纯酶n nGLU：右旋糖n nAST：纯酶n nALT：纯酶第79页/共134页推荐的样本添加材料推荐的样本添加材料n nLipase：胰腺提取物n nMg：MgCl2n nP:K(H)2PO4或Na(H)PO4n nTP：白蛋白干粉、人或牛的成份Vn nUA：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿酸。n nBUN：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿素。第80页/共134页样本分析顺序样本分析顺序n n分析序列应为随机排列。n n有显著携带污染时，应用空白隔开样本。n n每个实验组内应至少分析5-7个不同浓度水平的样本。第81页/共134页样本浓度范围样本浓度范围n n应覆盖待评线性范围的上、下限。n n评价结果不满意时应重新设定浓度。n n线性范围内至少应保留有5-7个浓度。第82页/共134页样本的准备样本的准备n n足量的混合血清。n n低浓度混合血清（No1）；高浓度混合血清（No5）n n血清（血清（No2No2）：）：3 3份份“No1”No1”+1+1份份“No5”No5”n n血清（血清（No3No3）：）：2 2份份“No1”No1”+2+2份份“No5”No5”n n血清（血清（No4No4）：）：1 1份份“No1”No1”+3+3份份“No5”No5”第83页/共134页样本浓度计算样本浓度计算n n C1V1+C5 V5n n浓度=-n n V1+V5第84页/共134页数据收集数据收集n nx1 y1-1 y1-2 y1-3 y1-4n nx2 y2-1 y2-2 y2-3 y2-4n nx3 y3-1 y3-2 y3-3 y3-4 n nx4 y4-1 y4-2 y4-3 y4-4n nx5 y5-1 y5-2 y5-3 y5-4第85页/共134页数据评价数据评价n n观察有无明显的数据错误；n n若有明显异常时应判断是否为离群点；n n如离群点超出2点，则保留全部数据或重做全部实验。第86页/共134页离群点检查离群点检查n n用于特定浓度Y值离群点的检验。n n将4个重复值从大到小排列（Y1到Y4）。n n计算：计算：D=Y1-Y4D=Y1-Y4n n若Y1可能是离群点，计算：n n D1=D1=（Y1-Y2Y1-Y2）/D/Dn n若Y4可能是离群点，计算：n nD4=D4=（Y3-Y4Y3-Y4）/D/D第87页/共134页离群点判断离群点判断n n判断值（Critical value)n n(0.05)0.765n n(0.01)0.889第88页/共134页绘图和评价绘图和评价n n线性X-Y图，X轴为分析物浓度；n n反应值或仪器输出值为Y轴；n n目测离群值：(Y=aX+b )n n目测线性判断是否符合要求；n n进行统计学判断和评价。第89页/共134页多项式回归分析多项式回归分析n n一次方程一次方程一次方程一次方程：n n y=by=b +b+b 1 1x xn n二次方程二次方程二次方程二次方程 ：n n y=b+by=b+b1 1 x+b x+b 2 2 x x2 2 n n三次方程三次方程三次方程三次方程：n n y=by=b +b+b1 1 x+b x+b 2 2 x x2 2+b+b3 3 x x3 3 EP6-A指南的主旨是利用多项式回归分析方法判定线性。多项式回归分析是研究一个因变量与一个自变量间的多项式的方法,即比较一阶(直线)、二阶(抛物线)和三阶(S形线)多项式的回归分析方法。多项式回归分析的最大优点是可以通过增加X的高阶项对实测点进行逼近直至满意为止,从而建立最优的多项式回归方程。第90页/共134页第91页/共134页第92页/共134页第93页/共134页第94页/共134页注意注意n n统计学标准和临床可接受限不同。n n慎用方法学线性范围从0开始。n n有临床意义的浓度应在线性评价中：n n最小的线性浓度最小的线性浓度n n医学决定水平医学决定水平n n最大的线性浓度最大的线性浓度第95页/共134页n n卫生部临床检验中心组织的线性评价或校准验证的室间质量评价计划的结果可用于实验室检测项目的线性评价：n nBeckman自动生化分析仪器n nRoche或Hitachi自动生化分析仪器n nOlympus自动生化分析仪器第96页/共134页第97页/共134页实验室检验的临床准确性评价实验室检验的临床准确性评价NCCL GP10A第98页/共134页GP10-An nAssessment of The Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic(ROC)Plots;Approved Guideline(1995)n n“用ROC曲线图评价实验室检验的临床准确性”第99页/共134页定义定义n n临床检验信息临床检验信息：n n准确性：准确性：n n敏感性敏感性 SensitivitySensitivityn n特异性特异性 SpecificitySpecificityn n有用性：有用性：第100页/共134页定义定义n n临床准确性（临床准确性（Clinical Accuracy）：n n衡量检验项目对于不同健康状况的区分能力。衡量检验项目对于不同健康状况的区分能力。如：如：n n健康与疾病；健康与疾病；n n良性与恶性疾病；良性与恶性疾病；n n对治疗的反应性与不反应性；对治疗的反应性与不反应性；n n预测疾病的好转与恶化预测疾病的好转与恶化第101页/共134页定义定义n n临床有用性临床有用性（Usefulness）：n n检验信息在病人管理中的实用价值，如：检验信息在病人管理中的实用价值，如：n n检验成本；检验成本；n n假阳（或假阴）性率；假阳（或假阴）性率；n n有损伤小、成本低的其他方法；有损伤小、成本低的其他方法；n n检验技术要求；检验技术要求；n n检验创伤和舒适性检验创伤和舒适性第102页/共134页定义定义n nROC：n nR Receiver eceiver OOperating perating C Characteristicharacteristicn n受试者工作特征受试者工作特征n nROC曲线：n n描述实验室检验的敏感性和特异性关系的曲线。描述实验室检验的敏感性和特异性关系的曲线。第103页/共134页ROC曲线曲线第104页/共134页第105页/共134页定义定义n n阳性预测值（PPV）n n 真阳性结果数n n 真阳性结果数+假阳性结果数第106页/共134页定义定义n n阴性预测值（NPV）n n 真阴性结果数n n 真阴性结果数+假阴性结果数第107页/共134页ROC曲线的意义曲线的意义第108页/共134页ROC曲线的意义曲线的意义第109页/共134页ROC曲线的意义曲线的意义第110页/共134页用用ROC图进行方法比较图进行方法比较第111页/共134页ROC曲线的绘制曲线的绘制第112页/共134页ROC曲线的绘制曲线的绘制n n进行临床准确性实验n n确定诊断的敏感性和特异性n n绘制ROC曲线图n nROC分析：n n敏感性敏感性/特异性的置信区间；特异性的置信区间；n nROCROC曲线下面积；曲线下面积；n n多实验多实验ROCROC曲线的比较；曲线的比较；n n其他其他第113页/共134页ROC曲线的绘制曲线的绘制第114页/共134页ROC曲线的绘制曲线的绘制第115页/共134页ROC曲线制作及分析软件曲线制作及分析软件n nCLINROCCLINROCn nMetzMetzn nROC ANALYZERROC ANALYZERn nROCLABROCLABn nRULEMAKERRULEMAKERn nSIGNAL SIGNAL n nTEP-UHTEP-UH第116页/共134页ROC曲线的优点曲线的优点n n利用简单易于分辨的图形反应临床准确性利用简单易于分辨的图形反应临床准确性指标；指标；n n不需要确定临床决定水平；不需要确定临床决定水平；n n可直接用于不同检验方法临床准确性的比可直接用于不同检验方法临床准确性的比较较第117页/共134页ROC曲线的局限性曲线的局限性n n不能显示实际的临界值；不能显示实际的临界值；n n不能提示样本数量；不能提示样本数量；n nROC曲线分析参数计算复杂；曲线分析参数计算复杂；n n缺少实用性强的计算机软件。缺少实用性强的计算机软件。第118页/共134页定性实验性能评估定性实验性能评估(CLSI EP12)n n定性实验（定性实验（qualitative testsqualitative tests）仅给出阳性或阴性仅给出阳性或阴性（是或非）的实验结果。在临床实验室中使（是或非）的实验结果。在临床实验室中使用一项新的定性检验方法可以有许多理由，用一项新的定性检验方法可以有许多理由，如使用简便、低成本、操作过程规范或能满如使用简便、低成本、操作过程规范或能满足使用者的特殊要求。但在使用新方法进行足使用者的特殊要求。但在使用新方法进行患者样本检验前，使用者必须进行相关的实患者样本检验前，使用者必须进行相关的实验准备工作，包括与其它方法的比较、使用验准备工作，包括与其它方法的比较、使用培训、正确采集标本和必要的室内质量控制培训、正确采集标本和必要的室内质量控制过程等。对定性实验方法进行评价时，使用过程等。对定性实验方法进行评价时，使用患者样品进行重复性实验和方法比较是非常患者样品进行重复性实验和方法比较是非常重要的内容。重要的内容。第119页/共134页一、定性实验的临床应用一、定性实验的临床应用n n在临床实验室中，定性试验可用于筛查、诊断、确认、或监测为目的的测定。试验的敏感性、特异性、预测值和效率等，决定了其在临床应用的范围。从临床应用的角度讲，定性实验可分为筛查实验、诊断实验和确证实验。第120页/共134页一、定性实验的临床应用一、定性实验的临床应用n n筛查实验（筛查实验（screening testsscreening tests）筛查实验通常用于筛查实验通常用于对整个人群或特定人群中是否存在初测物的检对整个人群或特定人群中是否存在初测物的检查，如大便潜血实验。作为筛查实验，通常要查，如大便潜血实验。作为筛查实验，通常要求检验方法有较高的敏感性，以保证不漏掉真求检验方法有较高的敏感性，以保证不漏掉真阳性结果。阳性结果。n n诊断实验（诊断实验（diagnostic testsdiagnostic tests）定性实验用于特定定性实验用于特定疾病的诊断或临床可疑指征的判断，如微生物疾病的诊断或临床可疑指征的判断，如微生物学培养与细菌鉴定。通常情况下，诊断性实验学培养与细菌鉴定。通常情况下，诊断性实验要求方法学同时具有较好的敏感性和特异性。要求方法学同时具有较好的敏感性和特异性。但是，在有确证实验的条件下，可以适当放宽但是，在有确证实验的条件下，可以适当放宽对方法学特异性的要求。对方法学特异性的要求。n n确认实验（确认实验（confirm