菌种的生产与保藏培训课程.pptx

第三章第三章 菌种的生产与保藏菌种的生产与保藏 菌种，好比农作物的种子，是食用菌种，好比农作物的种子，是食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌种工作的单位都必须认真做好菌种菌种工作的单位都必须认真做好菌种的培育和保藏工作。的培育和保藏工作。一、菌种培育技术一、菌种培育技术人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母母种种（一一级级菌菌种种）：用用孢孢子子分分离离或或组组织织分分离等培育的菌丝体称为母种。离等培育的菌丝体称为母种。2）原原种种（二二级级菌菌种种）：把把母母种种扩扩大大到到木木屑屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3）栽栽培培种种（三三级级菌菌种种）：由由原原种种扩扩大大培培养养成成为生产上使用的菌种称为栽培种。为生产上使用的菌种称为栽培种。4）菌菌种种：实实质质上上就就是是经经过过人人工工培培养养并并进进一一步步繁殖的食用菌的纯菌丝体。繁殖的食用菌的纯菌丝体。食用菌的制种程序食用菌的制种程序组织分离组织分离接种接种母种（一级）母种（一级）接种接种原种（二级）原种（二级）接种接种栽培种（三级）栽培种（三级）种菇种菇孢子分离孢子分离经经过过这这样样三三级级培培养养，食食用用菌菌菌菌丝丝数数量量大大大大增增加。加。一一般般1支支试试管管菌菌种种可可繁繁殖殖46瓶瓶原原种种，每每瓶瓶原原种又可扩大繁殖种又可扩大繁殖60100瓶栽培种。瓶栽培种。培养培养培养培养母母 种种原种、原种、栽培种栽培种栽培种栽培种食用菌的食用菌的制种程序制种程序菌菌种种生生产产必必须须在在严严格格的的无无菌菌条条件件下下进进行行。为为了了保保证证制制种种的的成成功功，除除必必须须掌掌握握制制种种技技术术外外，还需要一些基本的设备和用品。还需要一些基本的设备和用品。1、接种设备、接种设备接种室接种室要求要求:关闭严密，便于熏蒸、消毒；关闭严密，便于熏蒸、消毒；空间不宜过大，一般长、宽、高均为空间不宜过大，一般长、宽、高均为2m即可即可;接种室外面最好有一个缓冲室；接种室外面最好有一个缓冲室；墙壁、天花板和地面都要平整、光洁；墙壁、天花板和地面都要平整、光洁；内装有紫外灯和日光灯。内装有紫外灯和日光灯。(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具1 1、接种设备、接种设备接种箱接种箱当当菌菌种种生生产产量量不不大大时时，可可在在接接种种箱箱内内进进行行。它是用木条作成框架，以它是用木条作成框架，以3mm厚的玻璃作箱壁。厚的玻璃作箱壁。要求：要求：关闭严密，便于熏蒸；关闭严密，便于熏蒸；装有日光灯和紫外灯。装有日光灯和紫外灯。优优点点：搬搬动动方方便便，操操作作人人员员不不会会受受有有毒毒气气体体危害。危害。缺点：容量小。缺点：容量小。1 1、接种设备、接种设备超净工作台超净工作台原原理理：超超净净工工作作台台是是利利用用过过滤滤除除菌菌的的原原理理，先先将将空空气气过过滤滤，得得到到无无菌菌空空气气，然然后后将将无无菌菌空空气气从风洞打出，使工作台范围内成为无菌状态。从风洞打出，使工作台范围内成为无菌状态。要要求求：放放置置工工作作台台的的房房间间要要清清洁洁，空空气气流流动动小小，最好安装灭菌灯。最好安装灭菌灯。优优点点：有有效效可可靠靠，操操作作使使用用方方便便，在在夏夏季季接接种种时，使操作人员感到舒适。时，使操作人员感到舒适。每每台台3000元元左左右右，有有条条件件的的食食用用菌菌专专业业户户，可选用这种先进的接种设备。可选用这种先进的接种设备。超净工作台超净工作台(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具2、灭菌设备、灭菌设备1）手提式：容量小，适于斜面试）手提式：容量小，适于斜面试管及玻璃器皿等；管及玻璃器皿等；2）立式：）立式：容量大，投资大；容量大，投资大；3）卧式：容量大，投资大；）卧式：容量大，投资大；4）家用）家用24或或26cm压力锅：母种、压力锅：母种、原种培养基原种培养基。高高压压蒸蒸气气灭灭菌菌锅锅优点：省时、省燃料、优点：省时、省燃料、效果好效果好2）、）、3）一般在菌种场或研究所应用。）一般在菌种场或研究所应用。灭菌设备灭菌设备高压蒸气灭菌锅高压蒸气灭菌锅(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具2、灭菌设备、灭菌设备常压灭菌锅常压灭菌锅目目前前农农村村生生产产栽栽培培种种的的必必备备设设备备，实实际际上上是是一一种种大大型型蒸蒸笼笼式式煮煮灶灶。底底部部为为铸铸铁铁大大锅锅，上上部部为为圆圆形形木木桶桶，桶桶内内装装数数层层供供放放培培养养基基的的格格架架。桶桶盖盖装装有有活活络络搭搭及及密密闭闭的的橡橡皮皮圈圈，由由于于锅锅内内温温度度最最高高是是100，所所以以灭灭菌菌时时间间需需维维持持1012h，才能达到灭菌效果。，才能达到灭菌效果。(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具3、培养设备、培养设备培养室培养室大大小小：不不宜宜过过大大，一一般般以以2025，培培养养50006000瓶菌种为宜，太大不易保温和管理。瓶菌种为宜，太大不易保温和管理。要要求求：干干净净、通通风风、保保温温，应应设设有有调调温温设设备备，使使室室温温保保持持在在2025。门门窗窗应应设设铁铁纱纱，以以防防鼠、虫为害。鼠、虫为害。生化培养箱生化培养箱是是专专业业工工厂厂生生产产的的恒恒温温电电器器设设备备，用用于于培培养养母种或少量原种，可以根据需要任意温度调节。母种或少量原种，可以根据需要任意温度调节。(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具4、培养菌种的容器、培养菌种的容器母母 种种：试试 管管，常常 用用 规规 格格 20180200mm，18180mm等。等。原种、栽培种原种、栽培种菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶菌种袋菌种袋聚丙稀袋聚丙稀袋聚乙稀袋聚乙稀袋规格有：规格有：12153035cm，173545cm母种母种-试管试管原种、栽培种原种、栽培种菌种瓶或塑料袋菌种瓶或塑料袋菌种瓶菌种瓶(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具5、接种工具、接种工具移移植植菌菌种种于于培培养养基基上上的的工工具具称称接接种种工具，主要有以下几种：工具，主要有以下几种：接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具6、常用的消毒药品、常用的消毒药品70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒；酒精：一般用于手、种菇表面消毒；0.1%升升汞汞：常常用用于于玻玻璃璃器器皿皿、非非金金属属器械及种菇表面消毒；器械及种菇表面消毒；0.1%KMnO4：一一般般用用于于用用具具、器器皿皿消消毒；毒；(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具6、常用的消毒药品、常用的消毒药品5%石石炭炭酸酸：喷喷洒洒墙墙壁壁、地地面面及及擦擦洗洗桌桌面面等等，也可用来苏尔代替；也可用来苏尔代替；2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上；来苏尔、新洁尔灭：用法同上；甲甲醛醛（福福尔尔马马林林）：用用于于菇菇房房和和接接种种箱箱等等空空气消毒；气消毒；方法：关闭门窗消毒，自行气化；方法：关闭门窗消毒，自行气化；用量：用量：10ml甲醛甲醛5gKMnO4立方米。立方米。(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具(二二)母种生产技术母种生产技术1、母种培养基、母种培养基食食用用菌菌母母种种培培养养基基的的种种类类繁繁多多，由由于于不不同同营营养养类类型型的的食食用用菌菌对对营营养养物物质质的的要要求求不不同同，所所以以，在在培培养养不不同同食食用用菌菌母母种种时时，应应选选择择适适宜宜该该菌种的培养基。菌种的培养基。母母种种培培养养基基要要求求营营养养丰丰富富、完完全全、氮氮源源、维生素的比例应高。维生素的比例应高。现将食用菌常用的母种培养基列举如下现将食用菌常用的母种培养基列举如下：(一一)菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具(二二)母种生产技术母种生产技术配方配方马铃薯葡萄糖琼脂培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）马马铃铃薯薯200g、葡葡萄萄糖糖（或或蔗蔗糖糖）20g、琼脂琼脂20g、H2O1000mL、pH6.5。适适用用于于一一般般食食用用菌菌母母种种分分离离与与培培养养，但但草草菇菇、猴猴头头菌菌等等在在此此培培养养基基上上生生长长不不良。良。(二二)母种生产技术母种生产技术综合马铃薯培养基综合马铃薯培养基马马 铃铃 薯薯 200g、葡葡 萄萄 糖糖（或或 蔗蔗 糖糖）20g、KH2PO42g、MgSO40.5g、维维生生素素B110mg、琼脂琼脂20g、H2O1000mL、pH自然。自然。适适合合培培养养草草菇菇、猴猴头头菌菌、灵灵芝芝及及各各种种食食用用菌菌菌种分离、保藏。菌种分离、保藏。(二二)母种生产技术母种生产技术胡萝卜葡萄糖琼脂培养基胡萝卜葡萄糖琼脂培养基胡胡萝萝卜卜200g、葡葡萄萄糖糖（或或蔗蔗糖糖）1820g、琼脂琼脂20g、H2O1000mL、pH自然。自然。(二二)母种生产技术母种生产技术玉米粉培养基玉米粉培养基玉玉米米粉粉40g、葡葡萄萄糖糖（或或蔗蔗糖糖）10g、琼琼脂脂20g、H2O1000ml、pH自然；自然；适用于大多数食用菌菌丝的生长。适用于大多数食用菌菌丝的生长。马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基马马铃铃薯薯200g、葡葡萄萄糖糖（或或蔗蔗糖糖）20g、蛋蛋白白胨胨10g、琼脂、琼脂20g、H2O1000ml、pH自然；自然；适用于培养和保藏多种食用菌。适用于培养和保藏多种食用菌。(二二)母种生产技术母种生产技术黄豆芽、松针培养基黄豆芽、松针培养基黄黄豆豆芽芽250g、松松针针50g、葡葡萄萄糖糖（或或蔗蔗糖糖）20g、琼琼脂脂20g、H2O 1000ml、pH55.5。将将松松针针、黄黄豆豆芽芽按按量量称称好好，加加水水煮煮30min，取取滤滤液液，加加入入葡葡萄萄糖糖、琼琼脂脂，充充分分搅搅拌拌，使使琼琼脂脂熔熔化化，补补水水至至1000ml，即即分装试管。分装试管。主要用于培养竹荪母种。主要用于培养竹荪母种。(二二)母种生产技术母种生产技术苹果汁培养基苹果汁培养基苹苹果果100g、蛋蛋白白胨胨2g、蔗蔗糖糖20g、琼脂琼脂20g、H2O1000ml；主要用于草菇培养主要用于草菇培养（配制方法同（配制方法同PDA）配方配方配制方法（以配制方法（以PDA为例）为例）马马铃铃薯薯（去去皮皮、去去芽芽眼眼）切切成成片片称称取取200g1000mLH2O煮煮沸沸双双层层纱纱布布过过滤滤取取滤滤液液并并补补足足1000mL琼琼脂脂熔熔化化其其它它营营养养物物质质调调节节pH（用用HCl或或NaOH）分分装装试试管管灭灭菌菌（高高压压蒸蒸气气灭灭菌菌15-30min）制制成成斜斜面面检查灭菌效果（即检查灭菌效果（即2830培养培养23d）其其它它天天然然培培养养基基或或综综合合培培养养基基，如如：玉玉米米粉粉、黄黄豆豆粉粉、胡胡萝萝卜卜、麸麸皮皮等等原原料料，加加适适量量水水煮煮汁汁过滤，取滤液与其它成分混合。过滤，取滤液与其它成分混合。(二二)母种生产技术母种生产技术2、母种分离、母种分离母母种种分分离方法离方法孢子分离孢子分离组织分离组织分离基质分离基质分离有性有性无性无性孢子分离法孢子分离法利利用用孢孢子子在在适适宜宜培培养养基基上上形形成成菌菌丝丝来来获获得得纯菌种的方法。纯菌种的方法。孢子孢子分离分离法法1）单孢子分离法：培养基上只接种）单孢子分离法：培养基上只接种1个担个担孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。方法。如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分离得到菌丝便能结实。离得到菌丝便能结实。（一个孢子（一个孢子萌发萌发菌丝体菌丝体纯种）纯种）2）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。等。（多个孢子（多个孢子萌发萌发菌丝体菌丝体纯种）纯种）(二二)母种生产技术母种生产技术下面先解释二个基本概念下面先解释二个基本概念1 1）同同宗宗配配合合：同同一一担担子子孢孢子子萌萌发发产产生生的的两两条条菌菌丝丝之之间间进进行行结结合合便便能能生生育育（自自交交亲亲合合、可可孕孕，类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。如：双孢蘑菇、草菇如：双孢蘑菇、草菇2 2）异异宗宗配配合合：同同一一性性别别菌菌丝丝之之间间不不亲亲合合，只只有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。(二二)母种生产技术母种生产技术担担子子菌菌亚亚门门中中，约约10%菌菌类类属属同同宗宗结结合合，90%以以上上是是异异宗宗配配合合，所所以以单单孢孢子子分分离离对对大大多多数数食食用用菌菌不不适适用用，只只有有育育种种时才采用。时才采用。此此法法技技术术复复杂杂，生生产产上上很很少少采采用用，在在此此不作详述。不作详述。(二二)母种生产技术母种生产技术多多孢孢子子分分离离简简单单易易行行，生生产产上上经经常常采采用用，多多孢子分离的具体操作方法有以下几种：孢子分离的具体操作方法有以下几种：整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。即即选选择择成成熟熟度度适适当当的的优优良良种种菇菇，在在无无菌菌操操作作下下，插插入入无无菌菌孢孢子子采采集集器器内内，置置适适温温下下让让其其自自然然弹弹散散孢孢子子。用用接接种种环环取取少少量量孢孢子子，放放入入试试管管斜面上培养。斜面上培养。种种菇菇选选择择：菌菌丝丝生生长长健健壮壮，无无病病虫虫杂杂菌菌，出出菇菇均均匀匀，转转潮潮较较快快，菇菇形形圆圆整整，菌菌盖盖肥肥厚厚，达达八八九成熟。九成熟。参见参见P48(二二)母种生产技术母种生产技术孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。孢子孢子采集采集器器搪瓷盘（大号培养皿）搪瓷盘（大号培养皿）培养皿培养皿种菇支架种菇支架玻璃钟罩（大漏斗）玻璃钟罩（大漏斗）参见参见P48悬钓法悬钓法此此法法主主要要用用于于耳耳类类（黑黑木木耳耳、毛毛木木耳耳、银耳等）孢子的采集。银耳等）孢子的采集。耳耳片片（表表面面消消毒毒）悬悬挂挂于于培培养养基基上上方方培培养养取取出出挂挂钩钩与与耳耳片片培培养养挑取先端菌丝挑取先端菌丝转管纯化转管纯化母种母种1224h培养基培养基耳片耳片参见参见P48组织分离：指通过菇体组织分离纯种。组织分离：指通过菇体组织分离纯种。优优点点：操操作作简简便便、取取材材广广泛泛、不不易易变变异异，保持原菌种优良种性。保持原菌种优良种性。方法：方法：选选择择种种菇菇（出出菇菇早早、无无病病虫虫害害、柄柄短短、肉厚、大小适中、肉厚、大小适中、56分成熟）分成熟）组织分离组织分离组织分离法组织分离法参见参见P45选选择择种种菇菇表表面面消消毒毒（75%酒酒精精或或0.1%升升汞汞）撕撕成成两两半半取取菌菌柄柄菌菌盖盖交交界界处处小小块块菌菌肉肉移移入入PDA培培养养观观察察转管转管纯种纯种上上述述分分离离物物在在25下下，经经3d5d可可看看到到分分离离物物表表面面长长出出白白色色绒绒毛毛状状丝丝，每每隔隔1d2d检检查查1次次，随随时时淘淘汰汰霉霉菌菌、细细菌菌污污染染的的培培养养物物，培培养养10d15d，再作，再作1次转管即得到纯种。次转管即得到纯种。组织分离法组织分离法参见参见P45-46注：注：取组织块不要贪大，因组织块小易定植取组织块不要贪大，因组织块小易定植;有些食用菌不易用组织分离法获纯种；有些食用菌不易用组织分离法获纯种；不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。如如：1）红红菇菇、乳乳菇菇等等，因因它它们们菇菇体体细细胞胞已已泡泡囊化，再生能力极弱；囊化，再生能力极弱；又又如如：2）银银耳耳和和木木耳耳等等胶胶质质菌菌，它它们们子子实实体体中中菌菌丝丝含含量量极极少少，组组织织分分离离法法不不易易成成功功。而而只只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。能取其生长的基质即菇木、耳木分离。组织分离法组织分离法概念：概念：由由菇菇木木、耳耳木木、培培养养料料等等食食用用菌菌生生长长基基质质中中的的菌菌丝丝分分离离培培养养而而成成。这这是是利利用用潜潜在在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。（常用于银耳及木耳菌种分离）（常用于银耳及木耳菌种分离）基内菌丝分离法（基质分离法）基内菌丝分离法（基质分离法）参见参见P46-47段木内菌丝分离法：段木内菌丝分离法：取取12cm菇菇木木、耳耳木木（子子实实体体着着生生部部位位）去去 皮皮 消消 毒毒（75%酒酒 精精 或或 0.1%升升 汞汞 浸浸 泡泡1min）切切去去四四周周木木块块切切成成火火柴柴杆杆粗粗细细，0.5cm长长的的小小木木梗梗取取1根根放放入入试试管管斜斜面面上上培培养养取菌丝取菌丝转管纯化转管纯化基内菌丝分离法（基质分离法）基内菌丝分离法（基质分离法）参见参见P46-47(二二)母种生产技术母种生产技术3、菌种提纯与扩大繁殖、菌种提纯与扩大繁殖用用孢孢子子、组组织织或或基基质质分分离离法法得得到到的的菌菌种种，一一般般不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。提提纯纯：选选稀稀疏疏单单菌菌落落边边缘缘取取菌菌接接种种试试管管斜斜面（面（35支）支）培养培养纯菌种。纯菌种。扩扩大大繁繁殖殖：提提纯纯的的母母种种或或从从有有关关单单位位引引进进的的母母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。在在母母种种繁繁殖殖时时，最最好好一一次次多多移移些些，不不易易多多次次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。一支斜面母种可移接一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。支左右斜面试管。4、质量检验、质量检验对对分分离离、引引进进或或转转管管扩扩大大的的菌菌种种，应应经经过过质质量量鉴定，选优去劣，方可使用。鉴定，选优去劣，方可使用。1）检验方法）检验方法外观鉴定外观鉴定优优良良菌菌种种：菌菌丝丝浓浓白白、粗粗壮壮、富富有有弹弹性性，则则生生命命力力强强。如如有有子子实实体体或或茶茶褐褐色色被被膜膜，只只要要除除去去仍仍可可使用。使用。老老化化菌菌种种：菌菌种种已已收收缩缩、干干燥燥或或菌菌丝丝体体自自溶溶产产生生了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。(二二)母种生产技术母种生产技术显微镜检验显微镜检验挑挑取取少少许许菌菌丝丝于于载载玻玻片片上上，加加蒸蒸馏馏水水1滴滴，盖上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。盖上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。菌丝生长速度菌丝生长速度将将其其接接种种到到适适宜宜斜斜面面培培养养基基上上，在在适适温温下下培培养养。凡凡菌菌丝丝生生长长较较快快、整整齐齐、浓浓密密而而健健壮壮的的就就是优良母种。是优良母种。参见参见52(二二)母种生产技术母种生产技术显微镜检验显微镜检验菌丝生长速度菌丝生长速度出菇试验出菇试验进行子实体产量和品质评比。进行子实体产量和品质评比。经经以以上上检检验验，通通过过综综合合评评比比，选选出出菌菌丝丝生生长长速速度度较较快快，子子实实体体生生长长健健壮壮、品品质质好好、产产量高的母种，即可供生产上使用。量高的母种，即可供生产上使用。参见参见52(二二)母种生产技术母种生产技术(二二)母种生产技术母种生产技术2）检验标准）检验标准首首先先要要辨辨认认分分离离或或引引进进的的是是不不是所需要的菌种；是所需要的菌种；有无杂菌污染，是否老化。有无杂菌污染，是否老化。(二二)母种生产技术母种生产技术(三三)原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术原原种种和和栽栽培培种种的的生生产产，无无论论是是培培养养基基成成分分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原原种种：是是由由试试管管斜斜面面培培养养基基培培养养的的母母种种作作种种源源接接种种而而成成，主主要要用用于于繁繁殖殖栽栽培培种种，也也可可直直接接用于生产。（母种用于生产。（母种原种）原种）2）栽栽培培种种：由由原原种种作作种种源源扩扩大大而而成成，只只能能用用于于生产。（原种生产。（原种栽培种栽培种)(三三)原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法培培养养料料木屑木屑米糠培养料：木生菇类，如：米糠培养料：木生菇类，如：木耳、银耳、香菇；木耳、银耳、香菇；草茎或草粪草茎或草粪厩肥培养料：草生菇类，厩肥培养料：草生菇类，如：蘑菇、草菇；如：蘑菇、草菇；棉籽壳棉籽壳米糠培养料：多种菇类。米糠培养料：多种菇类。粪草培养基（适用于蘑菇）粪草培养基（适用于蘑菇）稻稻草草或或麦麦秸秸20kg、粪粪肥肥（干干）30kg、石石膏膏500g、水适量。、水适量。方方法法：稻稻草草切切成成2cm长长粪粪肥肥混混合合发发酵酵石石膏膏调水调水装瓶装瓶灭菌灭菌稻草麸皮培养基（草菇）稻草麸皮培养基（草菇）干干稻稻草草78%、麸麸皮皮或或米米糠糠20%、蔗蔗糖糖1%、过过磷酸钙磷酸钙1%、水适量、水适量方方法法：稻稻草草切切成成2cm长长发发酵酵蔗蔗糖糖麸麸皮皮过磷酸钙过磷酸钙1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法木屑米糠培养基木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等）（香菇、木耳、猴头、平菇等）木木屑屑78%、麸麸皮皮或或米米糠糠20%、石石膏膏1%、蔗蔗糖糖1%、水适量。、水适量。木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）木木 屑屑 50kg、麸麸 皮皮 15kg、黄黄 豆豆 粉粉 1kg、蔗蔗 糖糖0.75kg、MgSO40.25kg、水、水7075kg。棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇）棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇）棉籽壳棉籽壳99.7%、蔗糖、蔗糖0.1%、石膏、石膏0.2%、水适量。、水适量。1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法(三三)原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术2、培养基（料）配制原则、培养基（料）配制原则掌握碳氮比例掌握碳氮比例食食用用菌菌对对碳碳和和氮氮的的需需要要有有一一个个比比例例，简简称称碳碳氮比（氮比（C）。）。菌丝体生长阶段：菌丝体生长阶段：C=20 1；子实体形成阶段：子实体形成阶段：C=3040 1；C过过高高，菌菌丝丝体体生生长长过过旺旺，而而子子实实体体小小、产量低。产量低。2、培养基（料）配制原则、培养基（料）配制原则选好培养材料选好培养材料首先选不含杀菌物质的木屑首先选不含杀菌物质的木屑杉杉、松松、樟樟等等树树种种，含含酚酚、酯酯、精精油油等等杀杀菌菌物物质质，会会抑抑制制食食用用菌菌生生长长。要要用用必必须须经经过过处处理理，如：蒸煮、晒等。如：蒸煮、晒等。根据食用菌的喜好选木屑根据食用菌的喜好选木屑如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；培培养养金金针针菇菇用用构构，楮楮等等木木屑屑就就比比用用榆榆、槐槐等等木屑好。木屑好。注意物理性状注意物理性状培培养养原原料料要要注注意意颗颗粒粒粗粗细细、质质地地软软硬硬程程度度，以及持水性能等物理性状。以及持水性能等物理性状。调节酸碱度调节酸碱度各各种种食食用用菌菌需需要要的的pH值值不不同同，配配制制培培养养料料时时，应应选选用用NaOH、石石灰灰、盐盐酸酸或或过过磷磷酸酸钙钙等等物物质质调调节节pH值值。霉霉菌菌比比食食用用菌菌喜喜欢欢更更低低的的pH值值，生生产产上上有有时时为为了了控控制制这这类类杂杂菌菌的的发发生生，往往往将往将pH值适当调高值适当调高0.51。2、培养基（料）配制原则、培养基（料）配制原则3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）木屑：木屑：树树种种：除除松松树树、杉杉树树、柏柏树树、樟樟树树、芸芸香香属属、按按属属等等树树种种之之外外，绝绝大大多多数数阔阔叶叶树树和和木木屑屑都都可可以以利利用用。（因因其其中中含含有有酚、酯、精油等杀菌物质）酚、酯、精油等杀菌物质）粗粗细细：不不宜宜过过细细，以以免免培培养养基基过过湿湿或或通气不良。通气不良。3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）木屑：木屑：选选择择：根根据据食食用用菌菌分分解解能能力力选选择择，分分解解能能力力较较强强的的食食用用菌菌采采用用硬硬质质阔阔叶叶树树木木屑屑，反反之之采用软质树种木屑。采用软质树种木屑。如如：金金针针菇菇分分解解能能力力较较弱弱，以以含含单单宁宁较较少少木木屑为宜，木屑越陈越好；屑为宜，木屑越陈越好；茯茯苓苓菌菌分分解解能能力力较较强强，可可采采用用颗颗粒粒粗粗的的松松木木屑或松木钉。屑或松木钉。米糠、麸皮作用米糠、麸皮作用作用：补充氮源和维生素。作用：补充氮源和维生素。稻稻草草、麦麦秸秸、木木屑屑、棉棉籽籽壳壳等等纤纤维维素素原原料料，含氮量低。如：木屑含氮量含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。以下。麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：含氮量比麸皮少。米糠：含氮量比麸皮少。用量：一般用量：一般10%20%，过多易引起污染。，过多易引起污染。3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）加糖的作用加糖的作用初期补充碳源，用量初期补充碳源，用量1%5%。诱导胞外酶的产生。诱导胞外酶的产生。纤纤维维素素原原料料，食食用用菌菌利利用用缓缓慢慢。加加入入少少量量白白糖糖作作为为食食用用菌菌初初期期补补充充碳碳源源，促促进进菌菌丝丝快快速速生生长长，同同时时诱诱导导纤纤维维素素酶酶的的产生，更好地利用纤维素。产生，更好地利用纤维素。3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）Ca2作用作用提提供供食食用用菌菌钙钙离离子子：原原料料中中加加石石膏膏、CaCO3或或过过磷磷酸酸钙钙、骨骨粉粉提提供供食食用用菌菌钙钙离子；离子；钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙还能中和单宁；钙还能中和单宁；减减少少过过量量K、Mg对对菌菌丝丝中中毒毒，促促进进菌菌丝生长。丝生长。3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）(三三)原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术4、原种、栽培种的制作方法、原种、栽培种的制作方法按按配配方方称称取取原原料料拌拌料料装装瓶瓶（袋袋）打打洞洞（孔孔径径1cm深深至至瓶瓶底底）灭灭菌菌（1.5kgcm2，1.52h）冷冷却却接接种种（接接入入黄黄豆豆大大小小一一块块）培培养养（25 27）菌菌丝丝长长满满瓶瓶（袋袋）培培养养7 d8d扩大成栽培种。扩大成栽培种。(三三)原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术5、杂菌检查（菌种检查）、杂菌检查（菌种检查）接接种种后后的的原原种种，一一般般在在3d5d左左右右菌菌丝丝恢恢复复生生长长，应应每每天天全全面面检检查查杂杂菌菌情情况况，如如有污染及时剔除。有污染及时剔除。（正正常常为为白白色色，若若混混有有其其它它色色泽泽，应应及及时时处处理理）；如如发发现现接接种种块块无无新新菌菌丝丝萌萌发发，则则认为是死菌，应及时补种。认为是死菌，应及时补种。正常：菌丝白色正常：菌丝白色杂菌：黄、红、绿、黑杂菌：黄、红、绿、黑死菌：补种死菌：补种二、菌种保藏二、菌种保藏菌菌种种是是食食用用菌菌栽栽培培成成败败的的关关键键。分分离离筛筛选选一一株株优优良良的的菌菌种种是是一一项项艰艰苦苦的的任任务务，而而长长期期保保持持优优良良菌菌种种的的性性能能，也也是是一一项项极极为为重重要要的的工工作作。食食用用菌菌与与其其他他微微生生物物一一样样，都都是是有有遗遗传传性性和和变变异性。异性。遗遗传传性性：保保证证了了优优良良菌菌种种的的性性能能相相对对稳稳定定，能能传给下一代，为菌种保藏提供了良好的条件。传给下一代，为菌种保藏提供了良好的条件。变变异异性性：使使高高产产优优质质的的菌菌种种，逐逐渐渐衰衰退退，给给菌菌种保藏带来了困难。种保藏带来了困难。菌种保藏的目的：菌种保藏的目的：保持菌种的优良性状；保持菌种的优良性状；降低衰退速度。降低衰退速度。确保菌种纯洁，长期在生产上应用。确保菌种纯洁，长期在生产上应用。（不衰退、不死亡、不污染杂菌）（不衰退、不死亡、不污染杂菌）二、菌种保藏二、菌种保藏原理：降低菌种代谢活动。原理：降低菌种代谢活动。降低代谢活动方法：（创造各种条件）降低代谢活动方法：（创造各种条件）低温低温干燥干燥缺氧等缺氧等在在这这些些条条件件下下，食食用用菌菌可可处处于于“休休眠眠”状态或处于微弱的代谢活动。状态或处于微弱的代谢活动。常用的保存方法有以下几种。常用的保存方法有以下几种。二、菌种保藏二、菌种保藏（一）斜面低温保藏法（一）斜面低温保藏法这是一种较好的简易保藏法，目前应用最多。这是一种较好的简易保藏法，目前应用最多。方方法法：将将培培养养好好的的斜斜面面菌菌种种，放放入入4冰冰箱箱内内保保藏。藏。保存期：保存期：36月月适用范围：多数食用菌适用范围：多数食用菌注注：不不适适于于草草菇菇。由由于于草草菇菇对对低低温温的的耐耐受受力力较较差差，其其菌菌丝丝在在5下下易易死死亡亡，所所以以保保藏藏草草菇菇菌菌种种的的温温度度需需提提高高至至1012或或在在草草菇菇斜斜面面菌菌种种上上加加34ml10%甘油防冻。甘油防冻。二、菌种保藏二、菌种保藏（二）石蜡封藏法（隔绝空气法）（二）石蜡封藏法（隔绝空气法）方方法法：用用注注射射器器注注入入灭灭菌菌的的石石蜡蜡。注注入入量量以以高高出出斜斜面面尖尖端端1cm为为宜宜，然然后后塞塞上上棉棉塞塞或或无无菌菌橡橡皮塞，用蜡封好，保藏在冰箱或低温干燥处。皮塞，用蜡封好，保藏在冰箱或低温干燥处。（菌菌丝丝体体与与空空气气隔隔绝绝，降降低低其其代代谢谢活活动动，防防止止培养基干燥）培养基干燥）保存期：保存期：6年年适用范围：适用范围：可用于保藏所有不宜用冷冻或干燥保藏的真菌。可用于保藏所有不宜用冷冻或干燥保藏的真菌。石蜡石蜡培养基培养基菌丝体菌丝体二、菌种保藏二、菌种保藏（三）担子孢子保藏法（干燥）（三）担子孢子保藏法（干燥）食食用用菌菌的的孢孢子子，可可用用滤滤纸纸条条、河河砂砂、氯氯化硅胶作吸附剂，干燥后进行保存。化硅胶作吸附剂，干燥后进行保存。1、滤纸片保藏法、滤纸片保藏法将将食食用用菌菌的的孢孢子子吸吸附附在在无无菌菌的的滤滤纸纸条条上上，干燥后进行保存，一般可保存干燥后进行保存，一般可保存35年。年。方方法法：滤滤纸纸片片（剪剪成成40.8cm小小条条灭灭菌菌）收收集集孢孢子子（让让孢孢子子弹弹射射到到滤滤纸纸条条上上）将将有有孢孢子子的的滤滤纸纸条条放放入入试试管管中中（含含硅硅胶胶）封口封口冰箱中保存冰箱中保存（三）担子孢子保藏法（干燥）（三）担子孢子保藏法（干燥）1、滤纸片保藏法、滤纸片保藏法2、砂土管保藏法、砂土管保藏法砂砂土土（2 1）装装管管灭灭菌菌接接入入孢孢子子干燥干燥保存。保存。（四）冷冻、真空、干燥保藏法（四）冷冻、真空、干燥保藏法这这种种方方法法是是利利用用低低温温、干干燥燥、缺缺氧氧等等条条件件保保存存菌菌种种，一一般般可可保保存存10年左右。年左右。二、菌种保藏二、菌种保藏三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染底底部部取取菌菌：可可根根据据细细菌菌只只发发生生在在培培养养基基表表面面，而而真真菌菌菌菌丝丝能能穿穿透透到到培培养养基基内内部部的的特特点点，用用无无菌菌操操作作法法敲敲破破试试管管取取出出培培养养基基，在在培培养养基基的的底底部部挑挑取取一一小小块块带带有有菌菌丝丝的的培培养养基基，移移植植到到另另一一试管中培养，可得到纯正的母种。试管中培养，可得到纯正的母种。二、菌种保藏二、菌种保藏三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染底部取菌底部取菌覆覆盖盖培培养养：将将熔熔化化培培养养基基冷冷却却到到40，倒倒在在已已污污染染细细菌菌的的斜斜面面上上，使使之之形形成成厚厚约约20cm的的覆覆盖盖层层，当当食食用用菌菌菌菌丝丝透透过过培培养养基基形形成成新新的的菌菌落落时，即可挑取转管纯化。时，即可挑取转管纯化。三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染真菌污染真菌污染若若污污染染的的是是青青霉霉、黄黄霉霉、木木霉霉等等真真菌菌，只只要要母母种种菌菌丝丝与与这这些些杂杂菌菌没没有有相相联联或或尚尚有有一一部部分分菌菌丝丝没没有有相相联联，并并且且这这些些杂杂菌菌的的菌菌丝丝还还没没有有产产生生孢孢子子时时，可可以以用用无无菌菌方方法法仔仔细细挑挑取取没没有有相相联联的的一一部部分分菌菌丝丝，移移植植到到另另外外的的试试管管中中继继续续培培育育，就能得到纯正的母种。就能得到纯正的母种。三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理2、原原种种、栽栽培培种种被被杂杂菌菌污污染染的的原原因因有有哪哪些些？怎样鉴别？怎样鉴别？根根据据杂杂菌菌开开始始发发生生的的部部位位，大大致致有有以以下下几几种污染原因：种污染原因：若若杂杂菌菌同同时时在在培培养养基基的的上上、中中、下下部部位位发发生，主要是由于培养基灭菌不彻底造成的。生，主要是由于培养基灭菌不彻底造成的。若若杂杂菌菌开开始始发发生生在在接接种种块块上上，这这很很可可能能是是母母种种或或原原种种已已经经感感染染了了杂杂菌菌；或或者者是是由由于于接接种工具不严格（消毒），把杂菌带入。种工具不严格（消毒），把杂菌带入。2、原原种种、栽栽培培种种被被杂杂菌菌污污染染的的原原因因有有哪哪些？怎样鉴别？些？怎样鉴别？若若杂杂菌菌先先在在培培养养基基表表面面发发生生，这这是是由由于接种过程中无菌操作不严而引起的。于接种过程中无菌操作不严而引起的。若若杂杂菌菌是是在在接接种种后后若若干干天天才才发发生生的的，而而且且是是发发生生在在瓶瓶口口往往下下挂挂的的，这这说说明明杂杂菌菌是是从从棉棉花花塞塞侵侵入入培培养养基基的的。引引起起的的原原因因是是培培养养室室湿湿度度过过大大、棉棉塞塞受受潮潮，造造成成霉菌滋生所致。霉菌滋生所致。三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法3、为什么母种不能多次转管移植？、为什么母种不能多次转管移植？母母种种转转管管次次数数多多了了会会削削弱弱菌菌丝丝的的生生活活力力，降降低低出出菇菇率率，甚甚至至造造成成菌菌丝丝不不孕孕而而不不能能形形成成子子实实体体。因因此此母母种种培培育育可可以以一一次次多多培培育育几几支支试试管管，不不要要反反复复多多次次分分离离转转管管，以确保菌丝旺盛的生活力。以确保菌丝旺盛的生活力。（发生变异）（发生变异）4、优良菌种的标准是什么？、优良菌种的标准是什么？各各种种食食用用菌菌菌菌种种，既既有有特特定定的的质质量量标标准准，也也有有共共同同的的质质量量标标准准。这这些些共共同同的的质量标准主要是纯、壮两条。质量标准主要是纯、壮两条。纯纯：除除银银耳耳菌菌种种，其其余余各各种种栽栽培培食食用用菌菌均均是是一一种种菌菌丝丝体体的的纯纯培培