《化学发光免疫分析》PPT课件.ppt

化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术与临床应用与临床应用化学发光免疫检测技术起源Halman在1977年基于放射免疫分析的基本原理，将酶的化学发光与免疫反应结合起来，建立了化学发光免疫分析方法。(Chemiluminescenceimmunoas)临床核医学临床核医学诊断核医学诊断核医学（影像诊断）（影像诊断）治疗核医学治疗核医学体外分析技术体外分析技术（放射免疫分析）（放射免疫分析）（化学发光免疫分析化学发光免疫分析）什么是化学发光？人体内的某些化合物分子被氧化后，可以形成激发态并返回基态同时发射光子，这就是化学发光。化学发光免疫检测技术是利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。该技术可以有效的消除样本的本底干扰，消除样本对光信号的散射，从而获得更高的检测灵敏度。化学发光免疫分析原理：化学发光免疫分析化学发光免疫分析化学发光分析系统化学发光分析系统免疫反应系统免疫反应系统免疫反应系统：将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）直接标记在抗原（化学发光免疫分析）或标记抗体（免疫化学发光分析）上，或用酶作用于发光底物。化学发光分析系统：利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子（hv)，利用发光信号测量仪测量光量子的产额，就可测知体内某些微量生物活性物质的含量。化学发光免疫分析类型：根据标记物的不同分为三大类：1、化学发光免疫分析2、化学发光酶免疫分析3、电化学发光免疫分析 化学发光免疫检测技术：化学发光免疫检测技术：优点：安全，灵敏度高（10-15g/ml），稳定性好，重复性较佳，结果漂移小，线性较好，准确度高，操作方便，试剂货架期长（半年1年），浪费少，出结果快速。缺点：仪器价格昂贵，试剂成本较高，目前有些检测项目不能用化学发光检测，待开发。化学发光技术与其他免疫分析化学发光技术与其他免疫分析技术比较：技术比较：免疫免疫诊断技断技术在在经历了放射免疫法、了放射免疫法、酶标免疫法、免疫免疫法、免疫荧光法等方法后，光法等方法后，发展到展到今天，化学今天，化学发光技光技术的出的出现并并临床床应用，用，为现代医学免疫代医学免疫诊断技断技术的的发展奠定了一展奠定了一个划个划时代的里程碑。代的里程碑。.1、放射免疫法：放射免疫法：1、放射免疫法放射免疫法缺陷缺陷：同位素半衰期短（125I半衰期60天）及需要特殊水源处理装置，污染问题、试剂有效期短、出报告时间长（一般要2天）、标准曲线稳定性差，但在有些发达国家仍在使用，完全能满足临床需要。2、酶标记免疫分析免疫分析缺陷：缺陷：由来已久，但是始终没有能够替代放射免疫。这种依靠比色法或偏振光法的检测技术所受的干扰因素太多，甚至试管的形状的变化都会影响实验结果，灵敏性、稳定性、重复性均较差（可可测灵敏度为测灵敏度为10-8g/ml）。）。3、荧光免疫分析技光免疫分析技术缺陷缺陷：利用特定波长的入射光将分子转换到激发态，然后分子回到基态并发射光子。但有以下干扰因素：1）血清样本中存在内源性荧光带，会增强非特异性本底荧光；2）样本对荧光光信号的散射也干扰实验结果。化学发光免疫检测技术临床应用：化学发光免疫检测技术临床应用：1、甲状腺功能类：T3、T4、THS、FT3、FT4、rT3、TG、T-PO新生儿筛查：T4sTSH2、性腺激素类：HCG、-HCG、FSH、LH、E2、E3、PRL、P、T、GH等3、肿瘤检测：CEA、AFP、Fe、PSA、CA125、CA153、CA199CA50、CA211、CA7244、心血管：CK-MB、BNP、Tn-I、Myoglobin5、贫血类：铁蛋白、ViteB12、叶酸6、药物浓度：地高辛、洋地黄、托普霉素可马西平、苯巴比妥、等7、糖尿病及代谢：胰岛素、C-肽、PTH8、过敏源类：过敏源筛选、总过敏源9、传染病：肝炎系列、风疹、弓形体10、其他：皮质醇、还有很多待开发项目。心血管系统心血管系统:如何能如何能更快更快更准确更准确更全面的更全面的诊断诊断AMIAMI时心电图并不能典型归类时心电图并不能典型归类诊断急性心肌梗塞有一定难度诊断急性心肌梗塞有一定难度 一半有不稳定胸口窒息痛的病人，入一半有不稳定胸口窒息痛的病人，入 院时心电图并不典型。院时心电图并不典型。病人再发梗塞诊断困难病人再发梗塞诊断困难导致不能及时诊断导致不能及时诊断AMIAMI延误及时治疗、护理延误及时治疗、护理 临床需要临床需要尽早准确诊断尽早准确诊断AMIAMI方法方法肌肉组织肌肉组织心肌心肌心肌细胞心肌细胞特异性标志特异性标志肌钙蛋白肌钙蛋白 I I释放入血释放入血心肌坏死心肌坏死（氨基酸顺序（氨基酸顺序4040差异）差异）心肌细胞心肌细胞肌红蛋白肌红蛋白 肌酸激酶肌酸激酶MBMB心肌坏死心肌坏死 释放入血释放入血（含量大含量大）血液浓度血液浓度明显升高明显升高(CKCK-MBMB)6 65 54 43 32 21 10 4 8 12 16 20 24 48 72 96 0 4 8 12 16 20 24 48 72 96 h h肌红蛋白肌红蛋白CK-MBCK-MB肌钙蛋白肌钙蛋白 浓度急性心肌梗塞后各项指标变化急性心肌梗塞后各项指标变化肌红蛋白肌红蛋白升高升高高峰高峰回落回落肌酸激酶肌酸激酶MBMB肌钙蛋白肌钙蛋白I I1-2 1-2 h h4-84-8h h6-86-8h h5-125-12h h10-2410-24h h12-2412-24h h18-3018-30h h48-7248-72h h5-75-7d d肌红蛋白的临床意义肌红蛋白的临床意义 早期诊断早期诊断 特异性低特异性低 灵敏度高灵敏度高急性心梗后最早急性心梗后最早(1-2h)出现的标记出现的标记最早能排除非急性心梗最早能排除非急性心梗阴性预测率为阴性预测率为 99%99%体内周期短，对再发梗塞特别灵敏体内周期短，对再发梗塞特别灵敏肌红蛋白测定能有效分辨非急性心梗，肌红蛋白测定能有效分辨非急性心梗，使急性心梗病人能尽早得到治疗使急性心梗病人能尽早得到治疗.有效观察溶栓疗效有效观察溶栓疗效肌钙蛋白肌钙蛋白I I的临床意义的临床意义诊断急性心肌梗塞特异性诊断急性心肌梗塞特异性 98%98%特异性强、确诊率高特异性强、确诊率高 灵敏度低灵敏度低急性心梗发病后急性心梗发病后6 h6 h才出现，应与肌红才出现，应与肌红蛋白一同使用蛋白一同使用肌钙蛋白肌钙蛋白I升高即可确诊为急性升高即可确诊为急性心肌梗塞，及时得到治疗心肌梗塞，及时得到治疗体内周期长，对外地病人延误求诊亦能诊断体内周期长，对外地病人延误求诊亦能诊断对极轻微的心肌创伤都能检出对极轻微的心肌创伤都能检出胸痛胸痛ECGECG发病发病肌钙蛋白肌钙蛋白I I肌红蛋白肌红蛋白CK-MBCK-MB急性心梗急性心梗+8h 8h 8h随访随访+再发心梗再发心梗肌红蛋白肌红蛋白注意事项注意事项肌酸激酶肌酸激酶MBMB骨骼肌损伤骨骼肌损伤肌红蛋白肌红蛋白升高升高肾功能衰竭肾功能衰竭 CKCK-MBMB 增高增高甲状腺功能系列诊断：甲状腺功能系列诊断：T3 T4 TSH TSH-3 FrT3 FrT4 TupT-poAb诊断各种甲亢必须具备的仪器设备诊断各种甲亢必须具备的仪器设备:1、甲状腺131-I摄取率测定仪2、各种放射免疫测定仪或各种全自动发光免疫测定仪3、甲状腺功能显像设备：（SPECT、照相仪）甲亢正确诊断（特别是首诊）1、临床症状、体征临床症状、体征。2、实验室检查实验室检查：T3、T4、FT3、FT4、sTSH 或或uTSH、TMAb、TGAb、TPOAb、TRAb3、131-I131-I摄取试验是必查项目摄取试验是必查项目 只靠临床症状、体征及实验室检查无法鉴别：碘甲亢、亚甲炎甲亢、亚急性淋巴细胞性甲炎甲亢、慢甲炎甲亢和医源性甲亢。治疗和处理是完全不同的。目前临床上靠一张甲状腺功能检查单（目前临床上靠一张甲状腺功能检查单（T3、FT3、T4、FT4增高和增高和sTSH降低）诊断甲降低）诊断甲亢是不正确的，化验单只证明患者血中甲亢是不正确的，化验单只证明患者血中甲状腺激素增多（甲状腺毒症），而状腺激素增多（甲状腺毒症），而碘甲亢、碘甲亢、亚甲炎甲亢、亚急性淋巴细胞性甲状腺炎亚甲炎甲亢、亚急性淋巴细胞性甲状腺炎甲亢、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、医源性甲亢、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、医源性甲亢甲亢等靠临床症状、体征及化验检查是无等靠临床症状、体征及化验检查是无法区分的，因此，首诊病人必须做法区分的，因此，首诊病人必须做131-I摄摄取试验才不会造成误诊。取试验才不会造成误诊。甲状腺炎扫描图甲状腺炎扫描图正常甲状腺扫描图正常甲状腺扫描图治疗治疗1个半月后个半月后治疗后检测结果显治疗后检测结果显示各项指标正常示各项指标正常治疗后恢复正常治疗后恢复正常临床常见的甲状腺疾病种类：1、甲亢：大概分为13种，三大类。2、甲减：分为原发性、继发性。3、甲状腺炎：分5种。4、甲状腺肿瘤：良性、恶性。5、甲状腺肿：青春期、结节性甲肿。6、TH 不敏感综合征：不敏感综合征：三大类。甲状腺激素不敏感综合症：一、全身型：1、甲减型T3、T4、TSH2、代偿型T3、T4、TSH二、垂体型：甲亢症状明显：T3、T4、TSH三、外周选择型：T3、T4、TSH（正常）临床甲减症状总之，化学发光免疫检测技术（ChemiluminesentImmunoassay,CLIA）是继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴高度敏感的微量测定技术。其具备以下特点：其具备以下特点：高度敏感，极限达10-17g/mL，远高于RIA、EIA、FIA。特异性强，重复性好C.V.5。测定范围宽，可达7个数量级。试剂稳定性好，无污染有效期612月。操作简单，自动化、半自动化程度高。目前医疗服务市场是一个竞争的市场，适者生存同样也适用于医疗服务行业，医院的长期发展依赖于两方面的结合，一个是人才的竞争，一个就是医疗设备竞争，化学发光免疫检测技术可以提高医院的整体诊断水平。特别是在内分泌系统、心血管系统、肿瘤检测、健康普查、新生儿筛查、药物浓度测定、体内激素测定及传染病诊断等方面必将发挥越来越显著的作用。谢谢！