人教版动物细胞融合与单克隆抗体制备.pptx

会计学1人教版动物细胞融合与单克隆抗体制备人教版动物细胞融合与单克隆抗体制备一、动物细胞融合一、动物细胞融合1、动物融合的过程请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52P52动物融合动物融合n n.细胞融合的概念n n.诱导动物细胞融合的方法n n.意义n n并用笔画出来第1页/共29页2、动物细胞融合的概念、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程个动物细胞形成一个细胞的过程第2页/共29页思考题思考题思考题思考题1 1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；离心、电激等物理方法；PEG等化学方法等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不能第3页/共29页不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂1、动物细胞融合过程第4页/共29页动物细胞融合动物细胞融合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁原生原生质体质体融合融合植物植物组织组织培养培养杂种细胞杂种细胞物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒常用方法动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B第5页/共29页4 4、原理、原理细胞膜的流动性5 5、最有价值的应用、最有价值的应用制备单克隆抗体3 3、过程、过程不同DNA的两个细胞灭活的病毒PEG等杂交细胞v细胞融合完成的标志细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个细胞核融合成一个核核第6页/共29页主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较第7页/共29页 1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A离心 B灭活的病毒 C电刺激 D振动 2.动物细胞融合的目的中最重要的是A克服远源杂交不亲和 B制备单克隆抗体C培育新物种 D生产杂种细胞第8页/共29页7 7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？生产单克隆抗体生产单克隆抗体请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52第9页/共29页提提问问？1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？、一个淋巴细胞、一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种能分泌多种抗体吗？抗体吗？、一种抗原侵入机体之后，引起机体、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？免疫反应产生的抗体只有一种吗？二、单克隆抗体二、单克隆抗体 每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。浆细胞浆细胞一种一种第10页/共29页抗体不纯抗体不纯 抗原抗原 动物体动物体刺激刺激浆细胞浆细胞 抗抗体体抗原不纯抗原不纯.简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？、这种方法获得的抗体有什么缺陷？、这种方法获得的抗体有什么缺陷？特异性差、纯度低；特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?不能不能怎样解决这个问题？怎样解决这个问题？第11页/共29页设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂交细胞杂交细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体第12页/共29页 为什么用小鼠骨髓瘤细胞与为什么用小鼠骨髓瘤细胞与为什么用小鼠骨髓瘤细胞与为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融淋巴细胞融淋巴细胞融淋巴细胞融合？合？合？合？思考思考：因为因为B B淋巴细胞具有淋巴细胞具有分泌特异性抗分泌特异性抗体体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下外培养条件下大量增殖大量增殖的本领，所的本领，所以由某种以由某种B B淋巴细胞和骨髓瘤细胞淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，融合产生的杂交瘤细胞，能够在体能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。隆抗体。第13页/共29页B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细骨髓瘤细胞胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合培养液中细胞有培养液中细胞有几种类型？几种类型？（只（只考虑两两融合）考虑两两融合）融合细胞几种融合细胞几种类型类型？5 5种种B淋巴细胞、淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B淋巴细胞淋巴细胞-B淋巴细胞淋巴细胞B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞3 3种种骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细骨髓瘤细胞胞B B淋巴细胞淋巴细胞-B-B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细杂交细胞胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠注射到小鼠体内体内体外培体外培养养2 2 2 2、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细胞。胞。胞。胞。该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高第14页/共29页2.2.制备过程：制备过程：诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么大量增殖杂交瘤细胞获得单大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法抗的方法融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞两次筛选的原因两次筛选的原因第15页/共29页2 2、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导诱导融合融合B-BB-B细胞细胞B-B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择培养选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（B-B-瘤细胞）瘤细胞）克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测产生所需产生所需抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体课堂课堂小结小结单克隆抗体制备过程中应用单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞哪些细胞 工程技术手段？工程技术手段？动物细胞融合技术动物细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞第16页/共29页【堂堂清堂堂清】1.单克隆抗体的优点是单克隆抗体的优点是_特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是原因是_每一种每一种B B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是产生抗体的细胞是_ 产生单克隆抗体的细胞是产生单克隆抗体的细胞是_效应效应B B细胞（浆细胞）细胞（浆细胞）杂交瘤细胞杂交瘤细胞第17页/共29页4.杂交瘤细胞的特点杂交瘤细胞的特点:_既能无限增殖，又能分泌特异性抗体既能无限增殖，又能分泌特异性抗体5.首次筛选是为了获得首次筛选是为了获得_ 第二次筛选时为了获得第二次筛选时为了获得_杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细既能无限增殖，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞胞第18页/共29页第一步：从一只小鼠体内提取第一步：从一只小鼠体内提取T T淋巴细胞，然后与骨髓淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。伤风杆菌单克隆抗体。1、已注入过灭活破伤、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞淋巴细胞3、选择培养基、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。第19页/共29页3.单克隆抗体的应用：在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹二、单克隆抗体二、单克隆抗体第20页/共29页4 4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是 A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞第21页/共29页5 5、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和和B B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是能存活、增殖的细胞是B B淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴淋巴细胞自身融合细胞细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A A、B B、C C、DD、第22页/共29页6下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）B过程是一个过程是一个_过程，该过程过程，该过程的进行需要灭活的的进行需要灭活的_或或_的诱导。的诱导。免疫的免疫的B淋巴淋巴特异性抗体特异性抗体特定抗原特定抗原细胞融合细胞融合 病毒病毒 聚乙二醇聚乙二醇 第23页/共29页7 7右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生瘤技术的方法，设计的生瘤技术的方法，设计的生瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验产破伤风杆菌抗体的实验产破伤风杆菌抗体的实验产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：方案。据图回答：方案。据图回答：方案。据图回答：（1 1）该方案能达到预）该方案能达到预）该方案能达到预）该方案能达到预期效果吗？期效果吗？期效果吗？期效果吗？。原因是。原因是。原因是。原因是 .。（2 2）图中）图中）图中）图中为为为为过程，过程，过程，过程，常用常用常用常用作为诱导剂。作为诱导剂。作为诱导剂。作为诱导剂。该细胞继承了该细胞继承了该细胞继承了该细胞继承了 ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌 ，还能，还能，还能，还能 。（3 3）该方案的目的是）该方案的目的是）该方案的目的是）该方案的目的是 。不能不能 无法获得产生单一抗体的无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞.细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖在体外培养条件下大量增殖 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 没有将抗原注入小鼠体内，没有将抗原注入小鼠体内，第24页/共29页7 7、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。动物细胞培养动物细胞培养选择选择特异性强特异性强,灵敏度灵敏度高高灭活的病毒灭活的病毒在体外大量增在体外大量增殖殖分泌特异性抗体分泌特异性抗体骨骨髓髓造血干细胞造血干细胞主动运主动运输输（1 1）_技术是单克隆抗体技术的基础。技术是单克隆抗体技术的基础。（2 2）根据培养基的用途分类，图中）根据培养基的用途分类，图中HATHAT培养基属于培养基属于_培养基。培养基。（3 3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。（4 4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用用_。（5 5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具备淋特点，又具备淋巴细胞的巴细胞的_特点。特点。（6 6）淋巴细胞是由动物体）淋巴细胞是由动物体_中的中的_细胞分化、发育而来。细胞分化、发育而来。（7 7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。第25页/共29页第26页/共29页五种（五种（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、杂交瘤细胞）骨骨、杂交瘤细胞）其中三种融合细胞。其中三种融合细胞。融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞第27页/共29页比较项目第一次筛选第二次筛选原理在选择性培养基中添在选择性培养基中添加某种药物，特异性加某种药物，特异性杀死骨髓瘤细胞和骨杀死骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的髓瘤细胞自身融合的细胞细胞抗原抗原抗体的特抗体的特异性结合异性结合目标筛选出杂交瘤细胞筛选出杂交瘤细胞既能无限增殖，既能无限增殖，又能产生所需特又能产生所需特异性抗体的杂交异性抗体的杂交瘤细胞瘤细胞第28页/共29页