生物化学实验32 糖酵解中间产物的鉴定电子课件 .pptx

生物化学实验32 糖酵解中间产物的鉴定电子课件 生物化学实验技术生物化学实验技术糖酵解中间产物的鉴定实验类型：综合性实验类型：综合性实验类型：综合性实验类型：综合性教学时数教学时数教学时数教学时数：3 3生物化学实验技术一、实验目的一、实验目的1、通过本实验对糖酵解过程进一步加深理解。、通过本实验对糖酵解过程进一步加深理解。2、初步了解碘乙酸对酶的抑制作用。、初步了解碘乙酸对酶的抑制作用。3、通过碘乙酸和硫酸肼的作用，了解使中间、通过碘乙酸和硫酸肼的作用，了解使中间产物堆积的方法在研究中间代谢的意义。产物堆积的方法在研究中间代谢的意义。生物化学实验技术二、实验二、实验原理原理利用利用碘乙酸对糖酵解过程中碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2,4-二二硝基硝基苯肼与苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成磷酸甘油醛在碱性条件下形成2,4-二二硝基苯硝基苯肼肼-丙丙糖的棕色复合物，其棕色程度与糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。磷酸甘油醛含量成正比。生物化学实验技术三、仪器与试剂三、仪器与试剂1、材料：新鲜酵母、材料：新鲜酵母2、仪器：恒温水浴锅、离心机、电子天平、仪器：恒温水浴锅、离心机、电子天平、试管、移液管、玻璃棒。试管、移液管、玻璃棒。3、试剂：、试剂：2,4-二硝基苯肼溶液，二硝基苯肼溶液，0.56mol/L硫硫酸肼溶液，酸肼溶液，5%葡萄糖溶液，葡萄糖溶液，10%三氯乙酸溶三氯乙酸溶液，液，0.75mol/LNaOH溶液，溶液，0.002mol/L碘乙碘乙酸溶液。酸溶液。生物化学实验技术四、实验内容四、实验内容1、发酵过程观察：取干燥试管、发酵过程观察：取干燥试管3支，编号支，编号13，分别加入，分别加入0.2g酵母，再按下表所示加入试剂。酵母，再按下表所示加入试剂。试剂试剂（mL）12310%三氯乙酸三氯乙酸1000.002mol/L碘乙酸碘乙酸0.50.500.56mol/L硫酸肼硫酸肼0.50.505%葡萄糖葡萄糖55537保温保温45min，观察气泡多少，并，观察气泡多少，并记录记录生物化学实验技术加加完葡萄糖后每支试管立刻分别插入玻璃完葡萄糖后每支试管立刻分别插入玻璃棒棒1支，搅拌均匀，玻璃棒留在试管中，在支，搅拌均匀，玻璃棒留在试管中，在37保温时用留在试管中的玻璃棒间断搅拌保温时用留在试管中的玻璃棒间断搅拌12次。次。生物化学实验技术2、终止发酵和补加试剂：、终止发酵和补加试剂：37保温保温45min后，后，按下表所示添加试剂。按下表所示添加试剂。试剂试剂（mL）12310%三氯乙酸三氯乙酸0110.002mol/L碘乙酸碘乙酸000.50.56mol/L硫酸肼硫酸肼000.5加加完试剂后，立刻用原来留在试管中的玻完试剂后，立刻用原来留在试管中的玻璃棒搅拌，这时发酵终止，取出玻璃棒璃棒搅拌，这时发酵终止，取出玻璃棒。生物化学实验技术3、发酵液过滤：上述、发酵液过滤：上述3支试管分别过滤，取滤支试管分别过滤，取滤液用于显色鉴定。液用于显色鉴定。生物化学实验技术4、显色鉴定：取、显色鉴定：取3支试管，按下表所列顺序加支试管，按下表所列顺序加入试剂，观察各管颜色的深浅，记录。入试剂，观察各管颜色的深浅，记录。试剂试剂（mL）123过滤液过滤液0.50.50.50.75mol/LNaOH0.50.50.5室温放置室温放置5min2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼0.50.50.50.75mol/LNaOH3.53.53.5观察颜色深浅，并记录观察颜色深浅，并记录