蛋白质含量的测定微量凯氏定氮法.ppt

蛋 白 质 含 量 的 测 定微量凯氏定氮法王冬亮 讲师87330724二、实验原理：1.氮元素：蛋白质区别于糖和脂肪的特征，绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15 17%，平均值为16%左右。只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以相应的蛋白质换算系数（均值为6.25、乳制品为6.38），就可以计算出样品中的蛋白质含量。消化蒸馏吸收滴定 2.含氮量的测定 先高温条件下强酸(浓H2SO4)把样品中的蛋白质的有机氮全部消化为无机氮形式 再强碱高温水蒸气蒸馏出氨气 用硼酸吸收氨气 用标准盐酸进行滴定反应方程式（二）蒸馏、吸收微量凯氏定氮蒸馏装置传统装置1：电炉2：水蒸气发生器3：螺旋夹4：小玻杯及棒状玻塞5：反应室6：反应室外层7：橡皮管及螺旋夹8：冷凝管9：蒸馏液接收瓶三、试剂(已制备)1、消化液：硫酸2、催化剂：硫酸铜、硫酸钾3、碱溶液：40%氢氧化钠4、吸收液：2%硼酸5、混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液：0.1%甲基蓝乙醇溶液=（1：1）6、标准滴定液：0.2M HCL半自动凯氏定氮仪1、确保仪器运行正常、管道内部干净、管道及其连接口密封性好2、准备好吸收液（200ml 2%硼酸+2ml 混合指示剂）并做好标记3、将碱溶液及去离子水桶与仪器连接好，放入盛装消化好样品的消化瓶，放入盛装吸收液的锥形瓶并保证管口插入液面下。4、设置并启动程序程序设置：步骤加碱或加水时间 蒸馏 时间C0（样品检测)E0（加碱）5s E0 4minC1（样品间清洗）E1 0s E1 2minC2（试验结束后第一次清洗）E2（加水）20s E2 0minC3（试验结束后第二次清洗）E3（加水）10s E3 4min（三）滴定：至灰色或蓝紫色 至灰色或蓝紫色终点 至灰色或蓝紫色 X：样品蛋白质含量（g/100g 或g/100mL）V1、V2：测定用样、试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积（mL）C：盐酸标准液的摩尔浓度（mol/L）0.014：1mol/L 盐酸标准液1mL 相当于氮的克数 m：样品质量（g）或体积（mL）F：蛋白质换算系数6.25五、结果计算:作业实验报告的撰写：实验题目 实验原理 实验结果（空白滴定的结果可以共享）实验讨论（操作中现象的出现原因；结果的影响因素；与商标 上显示的结果对比等。）结果每个小组可以相同，但是讨论不能相同！（一）消化1、标记消化瓶2、将下列物质加入消化瓶：牛奶1ml、浓硫酸5ml、催化剂（K2SO4，CuSO4）、玻璃珠3、将消化瓶放入智能数控消化炉进行消化，至液体变为无色或淡蓝色 250 1h左右 350 40min左右 450 2.5h左右观察浓硫酸刚加入牛奶中的颜色？作用？