实验五微生物的分离、培养.ppt

一、目的要求一、目的要求二、实验材料二、实验材料三、实验原理三、实验原理四、实验过程四、实验过程五、实验任务五、实验任务六、思考题六、思考题神农架土壤微生物分离纯化神农架土壤微生物分离纯化微生物实验五一、目的要求一、目的要求l掌握微生物的三种分离方法：稀释平板法；掌握微生物的三种分离方法：稀释平板法；平板涂抹法；平板划线法平板涂抹法；平板划线法l观察细菌、放线菌和真菌的菌落形态、颜观察细菌、放线菌和真菌的菌落形态、颜色、大小色、大小l比较和识别四大类微生物的菌落形态比较和识别四大类微生物的菌落形态二、实验材料二、实验材料样品：样品：神农架土壤神农架土壤培养基：培养基：肉膏蛋白肉膏蛋白胨胨培养基（培养培养基（培养细细菌）菌）高氏一号培养基（高氏一号培养基（加酚液加酚液培养放培养放线线菌）菌）查查氏培养基（氏培养基（加链霉素液加链霉素液培养霉菌）培养霉菌）试试剂剂和和仪仪器器：无无菌菌水水、无无菌菌培培养养皿皿、无无菌菌吸吸管管、无无菌菌三三角角玻玻棒棒、接接种种环环、酒酒精精灯灯、火火柴柴、标标签签纸纸、水浴锅水浴锅 2人一小组人一小组：6个培养皿，个培养皿，3支装有支装有9 ml的无菌水的的无菌水的试管，试管，6根根1ml无菌吸管，无菌吸管，1根无菌三角玻璃涂棒根无菌三角玻璃涂棒三、实验原理三、实验原理 土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件所以土壤中微生物的数量和种类都很多。它们参与土件所以土壤中微生物的数量和种类都很多。它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。此外，土壤中微壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。因此，从土壤中微生物的数量和组成情况，对要的作用。因此，从土壤中微生物的数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。十分必要的。四、实四、实 验验 过程过程1、微生物的分离、微生物的分离2、细菌、放线菌和真菌的菌落特征观察、细菌、放线菌和真菌的菌落特征观察3、四大类微生物菌落形态的比较和识别、四大类微生物菌落形态的比较和识别1、微生物的分离方法、微生物的分离方法（1）用稀释平板法从土壤中分离真菌。（使用）用稀释平板法从土壤中分离真菌。（使用查氏培养基）查氏培养基）（2）用平板涂抹法分离土壤中的放线菌。（使）用平板涂抹法分离土壤中的放线菌。（使用高氏一号培养基）用高氏一号培养基）（3）用平板划线法分离土壤中的细菌。（使用）用平板划线法分离土壤中的细菌。（使用牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基）土壤稀释液制备土壤稀释液制备 1.称取土壤称取土壤10 g，用研钵研碎放入用研钵研碎放入90 mL无菌水的三无菌水的三角瓶中（加入玻璃珠），振荡角瓶中（加入玻璃珠），振荡10 min，即为稀释即为稀释101的土壤悬液。的土壤悬液。2.另取装有另取装有 9 mL无菌水试管无菌水试管 5支，用记号笔编上支，用记号笔编上102、103、104。取已稀释成。取已稀释成101的土壤液，振荡后静止的土壤液，振荡后静止0.5 min，用无菌吸管吸取用无菌吸管吸取1 mL土壤悬液加入土壤悬液加入102的无的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成混匀，即成102土壤稀释液。同法依次连续稀释至土壤稀释液。同法依次连续稀释至103、104 土壤稀释液。土壤稀释液。图图1 土壤稀释液的制备和稀释液的取样土壤稀释液的制备和稀释液的取样 1.每组取培养皿每组取培养皿2只，即每个同学做只，即每个同学做1只。先在无菌培养皿底只。先在无菌培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。2.另取一吸管，以无菌操作法吸取另取一吸管，以无菌操作法吸取103或或104土壤稀释液土壤稀释液0.2mL，加在无菌培养皿的一边，在皿的另一边加入加在无菌培养皿的一边，在皿的另一边加入2滴滴10酚。此时两液严防相混。酚。此时两液严防相混。3.取已熔化的在水浴锅中保温取已熔化的在水浴锅中保温4550 0C左右的查氏培养基，左右的查氏培养基，分别倒入上述培养皿中（分别倒入上述培养皿中（见图见图2），轻轻转动培养皿，使），轻轻转动培养皿，使菌液、菌液、10酚、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，酚、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于凝固后，倒置于28 0C恒温培养。恒温培养。（1 1）稀释平板法（使用查氏培养基）稀释平板法（使用查氏培养基）（2）平板涂抹法（使用高氏一号培养基）平板涂抹法（使用高氏一号培养基）1.每组取无菌培养皿每组取无菌培养皿2只（每个同学做只（每个同学做1只）。在皿底贴上标签，只）。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。注明分离菌名、稀释度、组别、班级。2.以无菌操作法先在培养皿中加入重铬酸钾溶液溶液以无菌操作法先在培养皿中加入重铬酸钾溶液溶液2滴，取滴，取已熔化的高氏一号培养基，分别倒入培养皿，使培养基与已熔化的高氏一号培养基，分别倒入培养皿，使培养基与重铬酸钾溶液充分混匀，铺平，制成平板。重铬酸钾溶液充分混匀，铺平，制成平板。3.凝固后，另取一支吸管吸取凝固后，另取一支吸管吸取103或或104的土壤稀释液的土壤稀释液0.2 mL放在平板上。放在平板上。4.用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于280C条件下培养。条件下培养。（3）平板划线法（使用牛肉膏蛋白胨培养基）平板划线法（使用牛肉膏蛋白胨培养基）1.每组取无菌培养皿每组取无菌培养皿2只，在皿底贴上标签，注明事项。取只，在皿底贴上标签，注明事项。取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。2.凝固后，用接种环取相应的菌液一环（凝固后，用接种环取相应的菌液一环（103或或104）在）在平板上划线。平板上划线。连续划线法：连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。作连续划线。3.划线完毕，盖上皿盖，倒置于划线完毕，盖上皿盖，倒置于370C温室培养。温室培养。2、实验结果的观察与记录、实验结果的观察与记录（1）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌)24 h和和48 h各观察一次，各观察一次，记录菌落形态、颜色、大小；记录菌落形态、颜色、大小；（2)查氏培养基（培养真菌）查氏培养基（培养真菌）48 h观察真菌菌落形态以及计观察真菌菌落形态以及计数菌落。并计算出每数菌落。并计算出每g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得；内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得；（3）高氏一号培养基（培养放线菌）高氏一号培养基（培养放线菌）100120h观察菌落形观察菌落形态及计数菌落，并计算出每态及计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量（方法同土壤中放线菌的数量（方法同上）。上）。3、四大类微生物菌落形态的比较和识别、四大类微生物菌落形态的比较和识别l区分和识别各大类微生物通常包括区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）形态）和细胞形态（个体形态）两方面的观察。两方面的观察。l菌落形态：菌落形态：菌落表面湿润：菌落表面湿润：细菌细菌薄而小，酵母菌薄而小，酵母菌厚而厚而大。大。菌落表面干燥：菌落表面干燥：放线菌放线菌密而小，霉菌密而小，霉菌松而松而大。大。l细胞形态：细胞形态：细菌细菌小而分散小而分散 酵母菌酵母菌大而分散大而分散 放线菌放线菌丝状细丝状细 霉菌霉菌丝状粗丝状粗图图4 细菌菌落形态。（细菌菌落形态。（a）肉眼观察的细菌菌落形态的多变性。菌落总体形状）肉眼观察的细菌菌落形态的多变性。菌落总体形状和边缘状况可由菌落上方俯视观察。而菌落高度则由平板边缘水平观察。和边缘状况可由菌落上方俯视观察。而菌落高度则由平板边缘水平观察。l表1五、五、实验任务实验任务 1、2个培养皿倒查氏培养基（稀释平板法分离真个培养皿倒查氏培养基（稀释平板法分离真菌）菌）2、2个培养皿倒高氏培养基个培养皿倒高氏培养基(三角玻棒涂布法分离三角玻棒涂布法分离放线菌）放线菌）3、2个培养皿倒牛肉膏蛋白胨培养基（划线法分个培养皿倒牛肉膏蛋白胨培养基（划线法分离细菌）离细菌）课后任务：实验结果的观察与记录课后任务：实验结果的观察与记录六六 作业作业二二.思考题思考题1、什么叫无菌操作？平板培养时为什么要把培养皿倒置？、什么叫无菌操作？平板培养时为什么要把培养皿倒置？2、分离放线菌和真菌为什么需要分别加重铬酸钾和链霉素、分离放线菌和真菌为什么需要分别加重铬酸钾和链霉素？3、如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性、如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做？的细菌，你认为应如何做？一一.结果菌落观察结果记录表结果菌落观察结果记录表结结 束束