实验九紫外分光光度法测定核酸的含量.ppt

实验九实验九 紫外分光光度法测定紫外分光光度法测定 核酸的含量核酸的含量一一 实验原理实验原理 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收键系统，能吸收紫外光紫外光。RNA和和DNA的紫的紫外吸收高峰在外吸收高峰在A260nm波长处。一般在波长处。一般在A260nm波长下，每波长下，每ml含含1gRNA溶液的光吸收值为溶液的光吸收值为0.022。所以测定未知浓度。所以测定未知浓度RNA溶液溶液A260nm波波长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。二二 实验操作实验操作1.称取核酸样品称取核酸样品0.05g加入加入2ml左右的左右的DW溶解（可在水浴锅上加热促其溶解）溶解（可在水浴锅上加热促其溶解）然后用玻璃棒然后用玻璃棒蘸取蘸取稀氨水调节稀氨水调节pH到到7使用使用pH试纸调节试纸调节调好后将样品液定容调好后将样品液定容到到5ml（使用（使用10ml量筒定容）量筒定容）2.取取2支离心管，按下表加样支离心管，按下表加样振荡振荡均匀均匀在冰箱中冷却在冰箱中冷却30min然后然后离心离心15min,V=8000离心管号离心管号12样品液样品液2ml2mlDW2ml-沉淀剂沉淀剂-2ml3.上清液稀释上清液稀释100倍：倍：用移液管从离心管中移取用移液管从离心管中移取0.5ml上清液置上清液置于量筒中于量筒中用用DW定容到定容到50ml倒入小倒入小烧杯搅拌均匀烧杯搅拌均匀然后用紫外分光光度计测然后用紫外分光光度计测OD260nm值值A1,A24.计算：计算：RNA(A1-A2)/0.022 /50 100